实验6-a-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测

4、酶制剂的缺点
1、通常对强酸、强碱、高温和有机溶剂 等条件非常敏感，容易失活； 2、溶液中的酶很难回收，不能被再次利 用，提高了生产成本；
3、反应后会混在产物中，可能影响产品 质量。(难分离）
（二）固定化酶 1、固定化酶技术。即将酶固定在一定空间 内的技术（如固定在不溶于水的载体上）。 2、固定化酶技术的优点： （1）使酶既能与反应物接触，又能与产物 分离；
3.酶的固定方法不包括( D )。 A. 将酶吸附在固体表面上 B．将酶相互连接起来 C．将酶包埋在细微网格里 D．将酶制成固体酶制剂，如加酶洗衣粉 中的酶
5. 关于固定化酶的叙述不正确的是 ( C )。 A．既能与反应物接触，又能与反应物分离 B．固定在载体上的酶可被反复利用 C．可催化一系列反应 D．酶的活性和稳定性受到限制
1、研究认为，用固定化酶技术处理污 染物是很有前途的。如将从大肠杆菌得 到的磷酸三酯酶固定到尼龙膜上制成制 剂，可以用来降解残留在土壤中的有机 磷农药，与用微生物降解相比，其作用 不需要适宜的（ D ） A、温度 B、PH C、水分 D、营养
2、目前，日用化工厂大量生产的酶 D 制剂，其中的酶大都来自 A、化学合成 B、动物体内 C、植物体内 D、微生物体内
②发酵法——常用方法 定义：通过微生物发酵获得所需要的酶。
优点： 易培养、繁殖速度快、便于大规 模生产。 提取方式： 如果是胞外酶，可以从发酵液中直 接提取；如果是细胞内酶，则可将 细胞弄碎再经过提取纯化而得到。
3、酶制剂的优点
在食品、化工、轻纺、医药等领域大规 模使用酶制剂，说明酶制剂使用有很多 优点，你能思考后举出一些吗？ 催化效率高、低能耗、低污染等。
酶 物理吸附法
交联法
包埋法
共价偶联法
四、“α-淀粉酶固定化”实验
实验目的：1、制备固定化的α-淀粉酶
2、检测固定化α-淀粉酶的效果 实验原理：本实验是用吸附法将a-淀粉酶固定在石英砂上， 一定浓度的淀粉溶液经过固定化酶柱后，可使淀粉水解成糊 精，用淀粉指示剂溶液测试，流出物呈红色表明水解产物糊 精生成
第二部分 :酶的应用
实验目的:
1.制备固定化a-淀粉酶 2.进行淀粉水解的测定
知识回顾：
1、在果汁生产中利用________，可以提高果汁的 产量和质量，其原理是___________。
2、洗衣粉中添加________，可以更有效地清除 顽渍。常用的酶制剂有_________________四类。
淀粉 5ml注射器 反应柱 固定化酶
气门心 夹子
2.实验后,用10倍柱体积的蒸馏水洗涤此柱,放 置在4℃冰箱中,几天后再重复上述实验,看是 否有相同的结果.
课后练习
1.如何证明洗涤固定化酶柱的流出液中没有淀粉酶?
可在试管中加入1ml可溶Βιβλιοθήκη Baidu淀粉，再加几滴淀粉酶柱 流出液，保温几分钟后用碘液检验。如仍显蓝色，则 流出液中没有淀粉酶了。 2.耐高温的淀粉酶有哪些可能的用途? 可以在高温下使淀粉水解快，而且酶不会因高温上 而失活，所以可在一些需要高温加热同时又要水解 淀粉的反应中使用。
除去未吸附的 游离淀粉酶
3、5mmol/L KI-I2溶液：称取0.127g碘和0.83g碘化钾。加 蒸馏水100ml完全溶解后装入滴瓶中。
5ml注射器 反应柱 固定化酶
气门心 夹子
步骤:
1.将灌注了固定化酶的 注射器放在注射器架上, 用滴管滴加淀粉溶液,使 淀粉溶液以0.3ml/min的 流速过柱.在流出5ml后 接收0.5ml流出液,加入 1~2滴KI-I2溶液,观察颜 色.用水稀释1倍后再观 察颜色.
三、 酶的固定化方法 1、物理吸附法：将酶吸附到固体吸附剂表面的 方法，固体吸附剂多为活性碳、 多孔玻璃等 2、包埋法： 将酶包裹在多孔的载体中，包埋成格子型或 包埋成微胶囊型 3、化学结合法： 将酶分子相互结合，或将其结合到纤维素、 琼脂糖，离子交换树脂等载体上的固定方式 交联法和共价偶联法
酶的固定化方法
（2）固定在载体上的没可以被反复利用。
直接使用酶和固定化酶的优缺点
类型 优点 不足
直接使 催化效率高，低耗 用酶 能、低污染等
固定化 酶既能与反应物接 酶 触，又能与产物分 离，同时，固定在 载体上的酶还可以 被反复利用
对环境条件非常敏感，容易失 活；溶液中的酶很难回收，不 能被再次利用，提高了生产成 本；反应后酶会混在产物中， 可能影响产品质量 一种酶只能催化一种化学反应， 而在生产实践中，很多产物的 形成都通过一系列的酶促反应 才能得到的
淀粉
α-淀粉酶
糊精
B—淀粉酶 麦芽糖糖化淀粉酶 葡萄糖
遇碘显蓝色
遇碘显红色
遇碘不显色
这里使用的是枯草杆菌的a-淀粉酶，其作用的最适温度为
50~75℃；最适PH为5.5~7.5
设备及用品：5ml塑料注射器
用气门心及夹子
50ml烧杯 滴管 自行车 注射器架 试管及微量离心管3支
实验材料:
1、a-淀粉酶的固定化：在烧杯中将5mg a-淀粉酶溶于 4ml蒸馏水中。由于酶不纯，可能有些不溶物。再加入 5g石英砂，不时搅拌，30min后装入1支下端接有气门 心并用夹子封住的注射器中(石英砂体积约4ml)。用10倍 体积的蒸馏水洗涤此注射器，流速为1ml/min。 2、可溶性淀粉溶液：取50ml可溶性淀粉溶于100ml热水 中，搅拌均匀。
（一）酶制剂 1、酶制剂的概念和种类 ①定义： 含有酶的制品 ②种类： A、液体酶制剂 治疗某些胃病的胃蛋白酶液 B、固体酶制剂
多酶片、加酶洗衣粉中的蛋白酶 和脂肪酶
2、酶的生产 ① 定义：采用一定的技术直接从动植物或微生 提 物的组织、细胞中将酶提取出来 取 简单易行，在动植物或微生物资源丰 法 优点： 富的地区具有应用价值 缺点： 要有充足的原材料，广泛应用受到限制 实例：在屠宰厂，可以从家畜胰脏中提取 出胰酶；在水果加工厂，可以从菠萝皮中 提取出菠萝蛋白酶
酶制剂的使用有缺点吗？
4.酶在应用过程中存在的问题 ①天然酶通常对强酸、强碱、高温和有机溶 剂等条件非常敏感，容易失活 ②溶液中酶很难回收，不能再次利用，提高 了生产成本 ③反应后，酶会混在产物中，影响产品质量， 难以在工业生产中广泛应用 针对酶的特点，如何在生产实践中加以应用？ 固定化酶：将水溶性的酶用物理或化学的方法固 定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活 性的制剂。