第九章 血清学反应
血清学试验简介
血清学试验简介血清学反应是指：相应的抗原与抗体在体外肯定条件下作用，可消失肉眼可见的沉淀、凝集现象。
在食品微生物检验中，常用血清学反应来鉴定分别到的细菌，以最终确认检测结果。
血清学反应的一般特点：1)抗原体的结合具有特异性，当有共同抗原体存在时，会消失交叉反应。
2)抗原体的结合是分子表面的结合，这种结合虽相当稳定，但是可逆的。
3)抗原体的结合是按肯定比例进行的，只有比例适当时，才能消失可见反应。
4)血清学反应大体分为两个阶段进行，但其间无严格界限。
第一阶段为抗原体特异性结合阶段，反应速度很快，只需几秒至几分钟反应即可完毕，但不消失肉眼可见现象。
其次阶段为抗原体反应的可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合反应等。
反应速度慢，需几分、几非常以至更长时间。
而且，在其次阶段反应中，电解质、PH、温度等环境因素的变化，都直接影响血清学反应的结果。
习惯上将经典的血清学反应分三种类别：凝集反应、沉淀反应和补体结合反应。
１、凝集反应颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体结合，在电解质参加下所形成的肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应（Agglutination reaction）。
其中的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。
在该反应中，由于单位体积抗体量大，做定量试验时，应稀释抗体。
１）直接凝集反应颗粒性抗原与相应抗体直接结合所消失的反应，称为直接凝集反应(Direct agglution reaction)。
a.玻片凝集法。
是一种常规的定性试验方法。
原理是用已知抗体来检测未知抗原。
常用于鉴定菌种、血型。
如将含有痢疾杆菌抗体的血清与待检菌液各一滴，在玻片上混匀，数分种后若消失肉眼可见的凝集块，即阳性反应，证明该菌是痢疾杆菌。
此法快速、简便，但不能进行定量测定。
b.试管凝集法。
是一种定量试验方法。
多用已知抗原来检测血清中有无相应抗体及其含量。
常用于帮助诊断某些传染病及进行流行病学调查。
如肥达氏反应就是诊断伤寒、付伤寒的试管凝集试验。
血清学反应
同种异型抗体
抗人免疫球蛋白
间接Coombs试验
双功能抗体
自身红细胞凝集试验（一）
双功能抗体抗 原交联物
自身红细胞凝集试验（二）
第三节 沉淀反应
一、液相沉淀反应 二、凝胶内沉淀反应
液相沉淀反应
1、絮状试验 2、环状试验 3、免疫浊度测定
液相内沉淀反应
絮状沉淀反应
环状沉淀反应
单向扩散试验
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T1 T2 T3
Mancini曲线
T1 T2 T3
Fahey曲线
Mancini曲线：K=C/d2 适用于大分子抗原，长时间扩散
Fahey曲线：K=logC/d 适用于小分子抗原，短时间扩散
单向扩散试验的适用对象
有特异性单价抗血清 有已知含量的标准品 待检标本抗原蛋白质含量大于1.25g
抗血清 抗原
+—
抗原 抗体
+
—
微量免疫沉淀测定
1、方法：免疫透射浊度测定法 免疫速率散射浊度测定法
2、原理：
散射光
入射光
透射光
检测器 检测器
凝胶内沉淀反应
1、扩散试验 2、免疫电泳技术
免疫扩散技术 单向扩散试验 双向扩散试验
免疫电泳技术 火箭电泳 对流电泳 免疫电泳
扩散试验
单向扩散试验 双向扩散试验
（ml）1
2
3
4
CH50示意
补体结合试验
1、补体结合试验原理 2、补体结合试验应用
补体结合试验原理
待检系统
补体
指示系统
补体结合试验原理（结果阳性）
补体消耗
待检系统
指示系统（不溶血）
补体结合试验原理（结果阴性）
免疫学实验-血清学反应
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实验内容
直接凝集试验
双向扩散试验 补体溶血试验 观看细胞免疫的示教片
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教材P299
• 一、直接凝集试验——试管法（1份/人）
• 试管法凝集试验是一种半定量的试验方法，是在 试管内将抗原或抗体稀释不同倍数后加入等量的 待检抗体或抗原，根据每管内的凝集程度，判定 待检样品中相应抗原或抗体的有无及其效价。 • 试验中可能由于电解质浓度或pH 值不适宜等原 因，而引起抗原非特异性凝集，出现假阳性反应 ，所以应设立阴性对照管。
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血型鉴定
20
（2）间接凝集反应（3）间接凝集抑制试验
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（二）沉淀反应
• 1、概念：可溶性抗原+抗体→沉淀现象。
• 可溶性抗原（如细菌的外毒素、内毒素、 菌体裂解液、病毒的可溶性抗原、血清、组 织浸出液等）与相应的抗体结合，在适量电 解质存在下，形成肉眼可见的细微的白色沉 淀。
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2、分类 （1）液相中的沉淀反应： 环状沉淀、絮状沉淀 （2）凝胶扩散： ①单向扩散：
6
静电引力 （electrostatic forces） 范德华引力:作用最小 （van der Waals interactions） 氢键:最具特异性 （hydrogen bond ） 疏水作用力:作用最大 （hydrophobic interactions）
2、可逆性：抗原与抗体的结合是非共价键 结合，在一定条件下又可解离为游离状态， 反应具有可逆性。
此时自第一管至第七管血清的稀释倍数分别是1:10， 1:20，1:40……1:320，具体稀释方法可参阅下图。 42
血清０.１ml
０ .５
０ .５
０ .５
０ .５
０ .５
血清学-血清学反应的一般特点
血清学- 血清学反应的一般特点1)抗原体的结合具有特异性，当有共同抗原体存在时，会出现交叉反应。
2)抗原体的结合是分子表面的结合，这种结合虽相当稳定，但是可逆的。
3)抗原体的结合是按一定比例进行的，只有比例适当时，才能出现可见反应。
4)血清学反应大体分为两个阶段进行，但其间无严格界限。
第一阶段为抗原体特异性结合阶段，反应速度很快，只需几秒至几分钟反应即可完毕，但不出现肉眼可见现象。
第二阶段为抗原体反应的可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合反应等。
反应速度慢，需几分、几十分以至更长时间。
而且，在第二阶段反应中，电解质、PH、温度等环境因素的变化，都直接影响血清学反应的结果。
习惯上将经典的血清学反应分三种类别：凝集反应、沉淀反应和补体结合反应。
１、凝集反应颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体结合，在电解质参与下所形成的肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应（Agglutinationreaction）。
其中的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。
在该反应中，因为单位体积抗体量大，做定量实验时，应稀释抗体。
１）直接凝集反应颗粒性抗原与相应抗体直接结合所出现的反应，称为直接凝集反应(Directagglutionreactio n)。
a.玻片凝集法。
是一种常规的定性试验方法。
原理是用已知抗体来检测未知抗原。
常用于鉴定菌种、血型。
如将含有痢疾杆菌抗体的血清与待检菌液各一滴，在玻片上混匀，数分种后若出现肉眼可见的凝集块，即阳性反应，证明该菌是痢疾杆菌。
此法快速、简便，但不能进行定量测定。
b.试管凝集法。
是一种定量试验方法。
多用已知抗原来检测血清中有无相应抗体及其含量。
常用于协助诊断某些传染病及进行流行病学调查。
如肥达氏反应就是诊断伤寒、付伤寒的试管凝集试验。
因为要测定抗体的含量，故将待检查的血清用等渗盐水倍比稀释成不同浓度，然后加入等量抗原，37℃或56℃，2~4小时观察，血清最高稀释度仍有明显凝集现象的，为该抗血清的凝集效价。
第九章血清学试验
第九章血清学试验§9-1血清学试验概述一、血清学试验的概念概念：抗原抗体反应是指抗原与相应的抗体之间发生的特异性结合反应。
因抗体主要存在于血清中，所以将体外发生的抗原抗体结合反应称为血清学反应或血清学试验。
在体内发生的抗原抗体反应是体液免疫应答的效应作用。
二、血清学试验的特点（一）特异性和交叉性（二）敏感性（三）可逆性（四）反应的二阶段性（五）最适比例与带现象（六）用已知测未知三、影响血清学试验的因素（一）电解质常用0.85%～0.9%（人、畜）或8%～10%（禽）的氯化钠或各种缓冲液（免疫标记技术）作为抗原和抗体的稀释液或反应液。
（二）温度在一定温度范围内，温度越高，加速抗原抗体结合和反应现象的出现。
（三）酸碱度血清学试验要求在一定的pH下进行，常用的pH值为6～8，（四）振荡适当的机械振荡能加速抗原抗体的结合反应（五）杂质和异物每批血清学试验都应设阳性对照和阴性对照试验。
四、血清学试验的应用及发展趋向（一）血清学试验的应用传染病、寄生虫病、肿瘤、自身免疫病、变态反应性疾病的确诊。
在动物疫病的群体检疫、疫苗免疫效果监测和流行病学调查。
生物活性物质的超微定量、物种及微生物鉴定和分型等方面。
基因分离，克隆筛选，表达产物的定性、定量分析和纯化等，已经成为现代分子生物学研究的重要手段。
（二）血清学试验的发展趋向反应的微量化和自动化方法的标准化和试剂的商品化技术的敏感特异和精密化检测技术的系列化方法简便快速。
§9-2凝集试验一、凝集试验的概念凝集试验：细菌、红细胞等颗粒性抗原，或吸附在红细胞、乳胶等颗粒性载体表面的可溶性抗原，与相应抗体结合后，在有适量电解质存在下，经过一定时间，复合物互相凝聚形成肉眼可见的凝集团块，称为凝集试验（Agglutination test）。
参与凝集试验的抗原称凝集原，抗体称凝集素。
二、凝集试验的类型（一）直接凝集试验(Direct agglutination test)颗粒性抗原与相应抗体直接结合并出现凝集现象的试验称直接凝集试验。
09第九章 诊断制剂(兽医生物制品学)
特异性检测：以新制菌素与标准菌素，对10匹健康马作点眼试验， 用量为2~3滴，5匹马左眼点标准菌素，右眼点新制菌素，另5匹马相反， 点眼后3、6、9、24h检查，全部试验马对两种菌素须均无反应。
阳性血清的 各种稀释度
1:10 1:25 1:50 1:75 1:100
1:10
0 0 10 20 40
抗原稀释度
1:50 1:100 1:150 1:200 1:300 1:400 1:500
补 体 结 合 反 应 结 果（溶 血，%）
0
0
0
0
10
20
40
0
0
0
0
10
30
60
0
0
0
10 20
40
60
第九章 诊断制剂
利用微生物、微生物提取物或动物血清等材料制成的，用于传染病、 寄生虫病血清学和变态反诊断应用的制品，称为诊断用生物制剂 (diagnosticum)，也称为诊断液。主要包括诊断抗原、诊断抗体(血清)和标 记抗体等三大类。
诊断生物制剂用于诊断的原理，是基于抗原和抗体能特异性结合这一 基本特性，故诊断中可以用已知抗原检测未知抗体，或用已知抗体检测未 知抗原。
(2)制造要点
将种子菌液接种肝汤琼脂培养基上37C培养2～7天,或液体通气培养36h，用 0.5%石炭酸生理盐水洗下培养物，70～80C水浴中加热灭菌lh，离心去上清， 菌体悬浮于0.5%石炭酸生理盐水，再离心沉淀洗一次。菌体悬浮于0.5%硫酸水 溶液中，121C加热30～40min，促使菌体水解。室温或冰箱放置12～24h，吸 取上清液，用NaOH液调整为pH6.8～7.0，再静置沉淀未水解部分。上清液用蔡 氏滤器过滤后75～80C加温热，凯氏法测定总氮量(用标准水解素作对照)，用灭 菌蒸馏水稀释滤液，使其最终总氮量为0.4～0.5mg/ml(或与标准的水解素相同)。
血清学反应-沉淀反应
二 凝胶内沉淀实验
（一）免疫琼脂实验(Immunodiffusion test）
原理：抗原抗体在电解质存在的条件下，再合适的比例 处形成白色沉淀线，并且一种抗原抗体系统形成一种沉淀 线，另一种形成另一种沉淀线，互相不影响。 优点：能将复合的抗原成分加以区分，根据沉淀线的数 目，位置，以及相邻两条沉淀线之间的融交分支等情况即 可了解该复合抗原的组成。并且可以将沉淀线用特殊染色 法（蛋白质、多糖、之类的鉴定染色），生物活性(酶活 性)和同位素标记法鉴定抗原的成分。 实验类型：
（3） 对流免疫电泳 对流免疫电泳是双向扩散与 电泳技术相结合的一种方法。在PH8~8.6的缓冲溶 8-21火箭免疫电泳 液中，蛋白质抗原带负电，向阳极移动。抗体虽然 也是蛋白质，但等电点比抗原高，所带阴离子少且 分子质量大，移动缓慢，同电渗反而向阴极移动。 实验时，将免疫血清置琼脂板正极孔内。通电后， 在电场作用下，抗原向正极移动，抗体向负极移动， 在最适比例处相遇时即形成白色沉淀。由于电场作 用，既限制了抗原抗体向多方向扩散，有加速了泳 动速度，缩短了时间。 优点：时间短，灵敏度高。 缺点：特异性不如双扩散高。如图8-20 8-20对流免疫电泳
抗原
抗体
单向单扩散
2.单向双扩散 用内径8mm的试管，现将含有阳 性血清的琼脂加于管底，高约6mm， 中间加一层同样浓度的琼脂，先凝固 后加待测0.25ml抗原，37°或室温扩 散数日。抗原抗体在中间琼脂层相向 扩散，在平衡点上形成沉淀线。
单向双扩散
3. 双向双扩散
试验在玻璃板或平皿上进行,用1.6％~2.0％琼脂加一定 浓度的等量抗体浇成凝胶板厚度为2~3mm在其上打孔直 径为2mm，孔内滴加抗原液。抗原在孔内向四周辐射扩 散，在与凝胶中的抗体接触形成白环。此环随扩散时间 而增大。因此可用已知浓度的抗原制成标准曲线，即可 用以测定抗原的量。 此法在兽医临床已用于传染病的诊断：如马立克氏病的 诊断。将马立克氏病高免血清制成血琼脂平板，拔取病 鸡新换的有髓质的羽毛数根，将毛根剪下，插于血琼脂 平板，阳性者毛囊中病毒向四周扩散，形成白色沉淀环。
血清学反应
2
（一）特异性和交叉性
血清学反应具有高度特异性。抗原只能与 相应抗体结合，而不能与其他抗体相结合。
生物体的组成是复杂的，包含有多种抗原 成分，在进化过程中形成不同的种类，有各 不相同的特异性抗原，在亲缘种系中往往含 有部分相同的抗原成分，能引起交叉反应。
10/20/2024
3
（二）结合的可逆性
抗原抗体结合是分子表面结合，这一结合 受理化因素的影响，当温度超过60˚C或pH 降至3以下时，则抗原抗体复合物又重新离 群。离群后的抗原、抗体，其理化性质、免 疫活性保留。
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二 琼脂扩散试验
琼脂是一种含有硫酸基的多糖，加热溶解于水， 冷却后凝固成凝胶，琼脂凝胶是一种多孔结构，其 孔径大小与琼脂含量有关，1%琼脂凝胶孔径为 85nm，能使许多可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散。 当抗原与抗体在凝胶中的一定位置上相遇时，则两 者结合形成沉淀线。沉淀线的位置与抗原、抗体颗 粒的大小、浓度，沉淀线的数目和所含抗原组分有 关。琼脂扩散可分为单扩散（抗原或抗体中一种成 分扩散）和双扩散。
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第二节 沉淀试验
可溶性抗原与相应抗体结合，在适量电解质存在 下，形成肉眼可见的絮状白色沉淀，称之为沉淀试 验（Precipitationreaction test）。
0.85%Na
可溶性抗原 +免疫血清Cl 出现沉淀现象 (血清蛋白、病毒) （抗体） 比例适合 沉淀原 沉淀素 比例不适合 不出现沉淀现象
吸附抗原的红细胞与抗体结合后，在补体存 在下可以引起溶血反应，这种反应称为间接溶 血反应。间接溶血反应只能用新鲜红细胞，而 新鲜红细胞不易保存，限制了本法的应用。
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2.溶菌试验
动物微生物—血清学反应
第九章血清学反应
一、名词解释
1．血清学反应
2．凝集反应
3．补体结合反应
4．沉淀试验
5．凝集试验
6．中和试验
二、问答题
1．体外抗原抗体反应的一般规律。
2．抗原抗体反应结果受哪些因素影响？
3．什么是ELISA？试述其操作过程。
4．何谓血清学反应？其应用原则及注意事项是什么？
5．何谓凝集反应和沉淀反应？它们有什么异同点？在兽医学上有何用途？
6．琼脂扩散试验有几种类型？各有什么特点？
7．试述补体结合反应的原理及用途。
8．免疫标记技术常用的有哪些？各有什么特点？
9．葡萄球菌A蛋白（SPA）有哪些生物学特性？。
血清反应实验报告
一、实验目的1. 了解血清反应的基本原理和操作方法。
2. 掌握血清反应在临床诊断中的应用。
3. 学会观察和分析实验结果，提高实验技能。
二、实验原理血清反应是一种基于抗原与抗体特异性结合的免疫学反应。
在血清学检测中，将待测血清与已知抗原（如细菌、病毒、肿瘤抗原等）进行混合，若血清中含有相应的抗体，则会与抗原发生特异性结合，形成可见的凝集现象。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：待测血清、已知抗原、生理盐水、试管、移液器、滴管、显微镜等。
2. 仪器：恒温箱、振荡器、离心机、洗板机等。
四、实验步骤1. 标准曲线的绘制（1）取若干支试管，分别加入不同浓度的已知抗体，作为标准品。
（2）在标准品中加入适量的待测血清，混匀。
（3）将混合液在室温下放置一段时间，使抗原与抗体充分结合。
（4）将混合液离心，取上清液，用酶联免疫吸附测定（ELISA）等方法检测抗体浓度。
（5）以抗体浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 待测血清的检测（1）取若干支试管，分别加入不同浓度的待测血清，作为实验组。
（2）按照标准曲线的绘制方法，进行抗原与抗体的结合实验。
（3）将混合液在室温下放置一段时间，使抗原与抗体充分结合。
（4）将混合液离心，取上清液，用ELISA等方法检测抗体浓度。
（5）根据标准曲线，计算出待测血清中抗体的浓度。
3. 结果分析（1）将实验组与标准曲线进行比较，确定待测血清中抗体的浓度。
（2）分析实验结果，判断待测血清中是否存在特定抗原的抗体。
五、实验结果1. 标准曲线绘制成功，相关系数R²>0.9。
2. 待测血清中抗体的浓度为XX ng/mL。
3. 结果分析：根据实验结果，待测血清中存在特定抗原的抗体。
六、实验讨论1. 实验过程中，注意避免交叉污染，确保实验结果的准确性。
2. 在实验操作过程中，严格控制反应时间，确保抗原与抗体充分结合。
3. 实验结果分析时，结合临床实际情况，综合判断待测血清中是否存在特定抗原的抗体。
血清学反应特点
血清学反应特点今天咱们来聊一聊特别有趣的血清学反应的特点哦。
血清学反应就像是一场小小的生物之间的“识别游戏”。
血清就像是一个装满了各种小卫士的神奇药水。
这些小卫士呢，能够发现外来的东西是不是自己身体的朋友。
比如说啊，当我们身体里进了一些病菌，就像一群不速之客闯进了我们的家。
这时候血清里的小卫士就开始行动啦。
血清学反应的一个特点就是特异性。
这就好比一把钥匙只能开一把锁一样。
小卫士们能准确地找到那些病菌，不会认错。
就像小狗能在好多气味里一下子就闻到主人的味道，血清里的这些东西也能一下子就找到那些病菌的特别之处。
比如说我们得了流感，血清里专门针对流感病菌的小卫士就会跑出来，不会跑去对付那些不是流感病菌的东西。
还有哦，血清学反应有可见性。
怎么理解呢？就像我们画画的时候，用不同颜色的笔，画出来的东西我们能看到。
血清里的小卫士和病菌碰到一起的时候，就会发生一些变化，这些变化我们能够看得到。
就像在一杯透明的水里，滴了一滴有颜色的颜料，水就变色了，一下子就被我们发现了。
比如说在做一些检测的时候，原本透明的液体，在血清学反应发生之后，可能会变得浑浊，或者出现一些小颗粒，就像水里突然有了小小的沙子一样。
另外呢，血清学反应还有可逆性。
这就像我们玩的拼图游戏，有时候我们把拼好的一块拿下来，还可以再放回去。
血清里的小卫士和病菌结合之后，在一定的条件下，还能再分开呢。
这就好像是两个小朋友手拉手，但是如果有什么特殊的情况，他们又可以松开手。
我再给你们讲个小故事吧。
有个小朋友生病了，医生怀疑是某种病菌在捣乱。
于是医生就取了这个小朋友的血清，然后把可能的病菌放进去。
就像把小侦探放到可能有坏人的地方一样。
如果血清里的小卫士和病菌发生了血清学反应，那医生就能知道是这种病菌让小朋友生病的啦。
因为血清学反应的特异性，就像小侦探不会认错坏人一样。
然后医生就可以根据这个结果，给小朋友用对药，把那些病菌赶跑。
血清学反应的这些特点啊，就像身体里的小秘密一样，科学家们发现了这些秘密，就可以用它们来帮助我们预防和治疗疾病啦。
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慢，需几分钟或更久。第二阶段受电解质、
温度、pH值等影响。两个阶段在反应进行中
无严格界限。
9/4/2019
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（五）影响反应的因素
1.电解质 血清学反应须在适当浓度的电解质参与下，
才出现可见反应。在凝集、沉淀反应操作时， 一般用生理盐水或8%—10%高渗盐水作稀 释，才出现较强反应。
9/4/2019
应用酶联免疫吸附实验、放射免疫等技术， 抗原抗体检测的敏感度均大为提高，已达到 能精确测出Pg的水平，其敏感度已大大超过 了常规的化学分析。此类技术已应用于测定 动物体内的激素、维生素、药物及其他病理 过程中的微量产物。
9/4/2019
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（三）抗原或抗体在细胞与亚细胞水平的定 位
用荧光抗体、酶标抗体技术，可以检测病毒或细 菌在动物各种组织细胞中的分布。应用免疫酶组 化法及铁蛋白标记技术进行免疫电镜观察，可以 测定病毒在亚细胞水平的定位，也可测定淋巴细 胞表面免疫球蛋白及抗体的产生情况。据此可分 析传染病发生的机制及对免疫机理的探讨。
9/4/2019
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一 液相沉淀试验
1．环状沉淀试验
原理：试管内，下层沉淀素与上层
沉淀原在液界面应形成白色沉淀环。
用途：检测皮毛中的炭疽
杆菌抗原（Asco体在试管内混合，在电解质的存在下抗
原抗体复合物可形成絮状凝聚物。此法多用于毒
素和抗毒素测定。
9/4/2019
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9/4/2019
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（四）微生物的鉴定与分析
应用交叉凝集实验、凝集吸收实验、 沉淀实验等血清学实验，进行微生物的 鉴定及区别微生物的血清型，从而确定 微生物的类型及其亲缘关系。还可应用 琼脂扩散实验、免疫电泳等技术，对微 生物的抗原组分进行分析。
9/4/2019
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（五）血型鉴定
用细胞直接凝集实验、血凝抑制实验、 溶血实验等技术，可作血型鉴定、亲子 关系的确定、新生儿和出生幼畜溶血病 的诊断。
血清学反应具有高度特异性。抗原只能与 相应抗体结合，而不能与其他抗体相结合。
生物体的组成是复杂的，包含有多种抗原 成分，在进化过程中形成不同的种类，有各 不相同的特异性抗原，在亲缘种系中往往含 有部分相同的抗原成分，能引起交叉反应。
9/4/2019
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（二）结合的可逆性
抗原抗体结合是分子表面结合，这一结合 受理化因素的影响，当温度超过60˚C或pH 降至3以下时，则抗原抗体复合物又重新离 群。离群后的抗原、抗体，其理化性质、免 疫活性保留。
9/4/2019
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第二节 沉淀试验
可溶性抗原与相应抗体结合，在适量电解质存在 下，形成肉眼可见的絮状白色沉淀，称之为沉淀试 验（Precipitationreaction test）。
0.85%NaCl
可溶性抗原 +免疫血清 出现沉淀现象 (血清蛋白、病毒) （抗体） 比例适合 沉淀原 沉淀素 比例不适合 不出现沉淀现象
二 琼脂扩散试验
琼脂是一种含有硫酸基的多糖，加热溶解于水， 冷却后凝固成凝胶，琼脂凝胶是一种多孔结构，其 孔径大小与琼脂含量有关，1%琼脂凝胶孔径为 85nm，能使许多可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散。 当抗原与抗体在凝胶中的一定位置上相遇时，则两 者结合形成沉淀线。沉淀线的位置与抗原、抗体颗 粒的大小、浓度，沉淀线的数目和所含抗原组分有 关。琼脂扩散可分为单扩散（抗原或抗体中一种成 分扩散）和双扩散。
9/4/2019
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（一）抗原与抗体的快速检测
在诊断传染病、寄生虫病、变态反应、肿 瘤、自身免疫疾病时，均已广泛应用血清学 方法检查抗体或抗原（细菌、病毒）的存在， 作为诊断疾病的手段。现已应用的间接血凝 技术、对流电泳、标记抗体技术，均能快速、 简便的确诊抗原或抗体。
9/4/2019
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（二）生物活性物质的超微定量
根据其扩散的方向可分为单向单扩、单向双扩、 双向单扩、双向双扩，其中双向双扩应用最广。
9/4/2019
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1 ．单向单扩散
将 0.6%-1% 琼 脂 加 热 熔 化 后 ， 加 入 定 量 经 预热的稀释抗血清，混合均匀后，加入小试 管中，待凝固后加入0.5ml抗原于其上，直立， 置于37˚C中，2-3h后出现沉淀线。由于抗原 的扩散，使沉淀线不断向下推移，而最初形 成的沉淀带随抗原的扩散而向下推移，最后 稳定。沉淀带距抗原愈近，其浓度愈大，可 作抗原浓度测定。
血清学反应通常用pH6～8，过酸或过碱都 可使复合物离群，pH值在等电点时，可引 起非特异凝集。
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二 血清学反应的类型
沉淀、凝集、琼脂扩散、中和、补体 结合和免疫吸附试验等。
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三 血清学反应的应用方式和目的
抗原抗体反应是特异性的，在应用时必须 有一个是已知的，通过反应来鉴定另一个未 知的。例如鉴定某一病原微生物时，多用已 知抗体。诊断传染病时，对慢性病可用已知 的抗原检测未知的特异性抗体；诊断急性病 则用已知的抗体检测未知的抗原（病原）， 如炭疽病等。
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2.温度
温度升高，可增加抗原与抗体分子运动而碰 撞接触，加速反应的出现，故通常将抗原抗体 混合后，放置37˚C温箱或水浴箱中，保持一定 时间，促进反应。温度高，加速反应；温度低， 反应时间延长，但反应结合充分，故在补体结 合反应、免疫吸附实验中，采用低温放置过夜。
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3.酸碱度
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比例不适合—不能完成第二步反应 —带现象
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（四）反应的阶段性
抗原与抗体进行结合，可分为两个阶段：
第一阶段为抗原与抗体的特异性结合阶段，
反应快，几秒钟至几分钟即完成，但无可见
反应；
第二阶段为抗原与抗体的反应可见阶段，表
现为凝集、沉淀、补体结合等，反应进行较
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（三）最适比与带现象
抗原与抗体结合，其比例适当时才可出现可见 反应。比例最适合，出现反应最快，反应产物 愈多。
如果抗原或抗体过多，抗体和抗原结合点的 聚合一开始时即达到饱和，形成小的复合物则 不能继续与相邻抗原、抗体结合，不出现可见 反应，谓之区带现象或带现象。为了避免血清 学反应的带现象，需要将抗原或抗体作适当的 稀释。
第九章 血清学反应
第一节 概 述
一 血清学反应的概念及一般特点
抗原及相应抗体在体内或体外均能发生特
异性结合，在体外结合能发生可见免疫反应。
由于抗体主要存在于血清中，故称为血清学反
应。
血清学反应根据抗原性质、反应条件、参与
反应物质，则表现出反应有多种多样。其反应
的一般特点是：
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（一）特异性和交叉性