菌种的使用和管理

菌种的使用过程
—非冻干菌种的恢复 非冻干菌种的恢复
非冻干菌种的恢复 申请 申请 接种斜面----适用于短期保藏 一般细菌为1个月 真菌为2个月 适用于短期保藏, 个月; 个月. 接种斜面 适用于短期保藏,一般细菌为 个月;真菌为 个月. 如果为第一代的菌种,参考冻干菌种进行恢复后制备储备管进行冷冻保藏. 如果为第一代的菌种,参考冻干菌种进行恢复后制备储备管进行冷冻保藏. (或仅接种斜面进行传代). 或仅接种斜面进行传代).
菌种的质量控制
效期 确保所有的菌种应当在有效期内. 确保所有的菌种应当在有效期内.
标签
菌种名称:沙门氏菌 菌种名称: 储藏时间: 储藏时间:2009.01.01 ATCC#:14028 批号#: #:601844,传代 :2009.01.01 批号#: ,传代2: TSA批号:0081230, 效期:2012.01.01 批号: 批号 , 效期:
菌种的使用过程 —储备管的制备
储备管的制备 申请 申请 的原始菌种可以制备成储备管进行储存, 经过修复后 的原始菌种可以制备成储备管进行储存,每个冻干菌种恢复 后可以制成数个储备管和一支质控管, 后可以制成数个储备管和一支质控管,储备管的数量依据效期及使用量来 定. 按照10%的比例加入甘油做为防冻剂. 的比例加入甘油做为防冻剂. 按照 的比例加入甘油做为防冻剂 摇匀后进行分装,每支一般1-2ml. 摇匀后进行分装,每支一般 . 按顺序进行编号,最后一支做为质控管进行质量控制, 按顺序进行编号,最后一支做为质控管进行质量控制,即进行相应的鉴 .(冷冻至少 小时后进行鉴别) 冷冻至少24小时后进行鉴别 别.(冷冻至少 小时后进行鉴别) 贴标签进行标识(标签参考前面,但需要有顺序号, 贴标签进行标识(标签参考前面,但需要有顺序号,保证每支菌种管标 签的唯一性.) 签的唯一性.) 低于-50℃进行冷冻保藏,效期根据实验室验证的时间来定, 低于 ℃进行冷冻保藏,效期根据实验室验证的时间来定,一般可以 保存3年 保存 年.
第一代
QC
S1
S2
S3
菌种的质量控制
菌种鉴别 通过一系列的检查来确认菌种的纯度和活性. 通过一系列的检查来确认菌种的纯度和活性.
鉴别方法: 鉴别方法: 传统的鉴别方法:菌落形态,个体形态,孢子形态,生化特征等. 传统的鉴别方法:菌落形态,个体形态,孢子形态,生化特征等. 商业的鉴别方法: Vitek等 商业的鉴别方法:API ,Vitek等.
菌种的使用过程
—冻干菌种的恢复 冻干菌种的恢复 冻干菌种的恢复(原始菌种或叫0代菌种) 冻干菌种的恢复(原始菌种或叫0代菌种)
冻干菌种处于一种深度休眠状态,生理特性受到抑制,代谢处于较低状态, 冻干菌种处于一种深度休眠状态,生理特性受到抑制,代谢处于较低状态, 必须经过恢复后才能使用, 必须经过恢复后才能使用,即将冻干菌种溶解后将其接种于新鲜的营养培 养基上,在一定的温度下培养一段时间. 养基上,在一定的温度下培养一段时间. 冻干菌种的恢复一般情况下按照说明书的要求进行, 冻干菌种的恢复一般情况下按照说明书的要求进行,如无说明可以参考以 下进行: 下进行: 细菌类/酵母类: 细菌类/酵母类: 菌种管外表面消毒( 酒精) 溶解后全部吸出, 菌种管外表面消毒(75%酒精)打开,吸取 酒精 打开,吸取0.3-0.4mlTSB溶解后全部吸出, 溶解后全部吸出 加入适量TSB培养(细菌 培养( 加入适量 培养 细菌30-35℃18-24h;酵母菌 ℃ ;酵母菌20-25℃24-48h) ℃ ) 霉菌: 霉菌: 打开后,加入适量的无菌水溶解后全部吸出,加入适量的无菌水于20打开后,加入适量的无菌水溶解后全部吸出,加入适量的无菌水于 25℃恢复 小时, 斜面上( ℃恢复2-12小时,将菌悬液接种几个 小时 将菌悬液接种几个SDA斜面上(一般用三角瓶,生长 斜面上 一般用三角瓶, 的孢子较多), 的孢子较多), 于20-25℃7-14天,用含有 ℃ 天 用含有0.05%Tween80氯化钠胨水洗 % 氯化钠胨水洗 刷到其他无菌试管中. 刷到其他无菌试管中.
菌种的质量控制
标签 每一支菌种或菌液在储存期内均需要有明确的标识. 每一支菌种或菌液在储存期内均需要有明确的标识.标签的内容应包 括以下内容: 括以下内容: 冷藏, 冷藏,冷冻日期 菌种名称和编码 批号,效期, 批号,效期,传代代数
菌种名称: 菌种名称:沙门氏菌 储藏时间: 储藏时间:2009.01.01 ATCC#:14028 批号#: #:601844,传代 :2009.01.01 批号#: ,传代2: TSA批号:0081230, 效期:2012.01.01 批号: 批号 , 效期:
菌种的质量控制
传代 试验用菌株的传代次数不得超过5 试验用菌株的传代次数不得超过5 代(从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌
种为第0 种为第0 代).
代的定义:每接种一次即为一代(有在新鲜的培养基上生长过程) 代的定义:每接种一次即为一代(有在新鲜的培养基上生长过程) 传代示意图: 传代示意图:
原始菌种
鉴别
WS1
WS2
WS3
WS72
BACK
文件和记录
文件
申请 申请
需要有详细的贴合实际的SOP,但必须保证符合相应法规要求. ,但必须保证符合相应法规要求. 需要有详细的贴合实际的
记录 菌种的接收,储存, 菌种的接收,储存,取用及恢复记录 储备管的制备, 储备管的制备,储存及 取用记录 工作菌悬液的配制,储存, 工作菌悬液的配制,储存,稀释及取用记录
菌种保藏 冻干法保藏 是一种长期保藏菌种的方法,一般情况下购买的冻干菌种 即为此种方法.使用时需要进行溶解,复壮,冷藏.
BACK
菌种的质量控制
菌种的质量控制
通过设计的一系列标准行为来确保菌种的特性为Excellence即被定义 为菌种的质量控制,为了保证菌种的质量以下方面应当予以考虑. 效期 传代 鉴定 标识 文件管理
菌种的使用和管理
马英英
2009.05.20
内容提要: 内容提要: 菌种保藏 菌种的质量控制和鉴定 菌种的使用过程 文件及记录 Q&A
菌种保藏 目的:保证检验中有准备好的菌悬液可以使用. 一般需要使用菌悬液的试验如下: 防腐剂效能试验 方法验证 培养基质量控制 鉴别系统的质量控制 阳性对照
菌种保藏 菌种保藏方法 不同的微生物受不同的环境条件影响其特性会发生改变, 故需要确保菌种在合适的储存条件下保藏.
药典要求:试验用菌种应采用适宜的菌种保藏技术进行保存,以保证 试验菌株的生物学特性.
一般的保藏方式如下: 冷藏 冷冻 冻干保藏
菌种保藏 冷藏 在2-8℃的冰箱保藏,是一种短期的有效的短期储藏方法. 工作菌悬液和稀释液均用此方法保藏,储藏时间需要进行 相关的验证,但必须符合法规要求. 保藏方式可以选择如下形式:
BACK
菌种的使用过程
菌种的采购 菌种的接收和储藏 冻干菌种的恢复 非冻干菌种的恢复 储备管制备 工作菌悬液的制备 质量控制及菌种编码 菌种传代示意图
菌种的使用过程 —菌种的采购
所有的商业菌种应从ATCC或CMCC授权的代理商处购买. 所有的商业菌种应从ATCC或CMCC授权的代理商处购买. ATCC 授权的代理商处购买 所有接收的菌种应保证其传代代数 (药典要求使用时不能超过5代) 药典要求使用时不能超过5
菌种的使用
质量控制
申请 申请
质量控制贯穿于整个传代过程,只要有传代动作发生, 质量控制贯穿于整个传代过程,只要有传代动作发生,则必须有质量控 制过程. 制过程. 所有的过程均需要有记录. 所有的过程均需要有记录. 菌种编码 编码必须具有唯一性,且可以追溯.例如: 编码必须具有唯一性,且可以追溯.例如: 冻干菌种编码ATCC8739/01----ATCC8739表示菌种编码;01表示接收 表示菌种编码; 表示接收 冻干菌种编码 表示菌种编码 的第一支. 的第一支. 储备管SV8739/01/18/1----SV代表储备管,18代表第 支储备管,1代 代表储备管, 代表第 支储备管, 代 代表第18支储备管 储备管 代表储备管 表传代代数. 表传代代数. 菌悬液编码D8739/01/18/1-5-20090501----5代表稀释度;20090501表示 代表稀释度; 菌悬液编码 代表稀释度 表示 2009年5月1日制备. 日制备. 年 月 日制备
菌种的使用过程
—菌种的接收和储存 菌种的接收和储存
菌种接收时应对以下项目进行检查: 菌种接收时应对以下项目进行检查:
包装完整性 菌种名称 菌种编码 批号 效期 COA 所有过程均需要有相 应的记录, 应的记录, 无记录表示无任何活 动!
菌种的储存
严格按照说明书的要求进行储藏. 严格按照说明书的要求进行储藏. 如果没有说明书,如何做? 如果没有说明书,如何做?
菌种的使用过程 —菌悬液的制备
菌悬液的制备
申请 申请
储备管的取用—按照顺序进行取用,保证取用的无误性. 储备管的取用 按照顺序进行取用,保证取用的无误性. 按照顺序进行取用 储备管融化; 储备管融化;商业购买的储备管按照说明进行接种 恢复: 细菌接种TSA30-35℃培养 恢复 细菌接种 ℃培养18-24h;真菌接种 ;真菌接种SDA,酵母 ,酵母20-25 ℃ 培养24-48h;霉菌 培养7-14天(用0.05%Tween80胨水稀释后接 培养 ;霉菌20-25 ℃培养 天 % 胨水稀释后接 种) 菌液的制备:细菌和酵母菌用氯化钠胨水进行稀释;霉菌用 菌液的制备:细菌和酵母菌用氯化钠胨水进行稀释;霉菌用0.05% % Tween80胨水稀释) 胨水稀释) 胨水稀释 标识(唯一性,可以追溯) 标识(唯一性,可以追溯) 效期:按照药典要求,菌悬液在室温下放置应在 小时内使用, 效期:按照药典要求,菌悬液在室温下放置应在2 小时内使用,若保存 在2～8℃可在 小时内使用.黑曲霉孢子悬液可保存在 ～8℃,在验证 ～ ℃可在24 小时内使用.黑曲霉孢子悬液可保存在2～ ℃ 过的贮存期内使用. 过的贮存期内使用.
菌种的使用
菌种传代流程
冻干菌种
申请
Cycle 1储备管 储备管 第一代 冻存(零下50℃ 冻存(零下 ℃)
申请
S1
S2
S3
S72
QC
CV
TSB
来自百度文库鉴别
WS1
WS2
WS3
WS72 S1 S2 S3
Cycle 2储备管 储备管 第二代 冻存(零下50℃ 冻存(零下 ℃)
S72 QC
工作菌悬液 第二代 冷藏( 冷藏(2~8℃) ℃ 工作菌悬液 第三代 冷藏(2~8℃) 冷藏( ℃
Q&A
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菌种的质量控制
文件管理 SOP 记录 能够证明菌种的整个传代过程. 能够证明菌种的整个传代过程. 包括接收,传代,使用,销毁. 包括接收,传代,使用,销毁.
菌种的质量控制
注意事项: 注意事项: 必须小心处理 使用前确认菌种身份 根据生产商说明书复苏菌种 使用接种技术;不要重复从菌种包装瓶中移取菌种或重新冷冻菌种. 使用接种技术;不要重复从菌种包装瓶中移取菌种或重新冷冻菌种. 传代代数(每接种一次即为一代) 传代代数(每接种一次即为一代)
肉汤---TSB ,胨水等 穿刺--- 一般用于厌氧菌的保藏 斜面---TSA ,SDA 划平板--- 一般为了得到单颗菌落
菌种保藏 冷冻 在低温下保藏,需要加入保护剂,例如甘油,可以减少冷 冻对菌种的伤害,一般在低于-50℃冰箱内保藏,是一种 有效的长期储藏方法. 储藏时间同样需要进行相关的验证.