实验室细胞株管理规定

细胞株管理规定

一、什么是细胞株？

原代代培养物经第一次传代培养后的细胞，常被称为细胞系（cell line）。由某一细胞系分离出来的、在性状上与原细胞系有一定差异的细胞系，常被称为该细胞系的亚系（subline）。

从一个经过鉴定的细胞系采用选择法或单细胞克隆进一步所得到的细胞群，常被称细胞株（cell strain）。由原细胞株进一步分离培养出的与原株性状不同的细胞群，又被称为亚株（substrain）。

二、细胞株管理规定

对已建立和经过鉴定的细胞株要进行严格管理，规定如下：

1.制度管理规定

A.细胞株应有专人负责保管，并由实验室负责人监督检查。更换保管人时应提

前做好工作交接，确保使用安全。

B.建立细胞株使用登记制度，记录细胞株的编号、名称、来源、冻存数量及日

期、取用数量及日期、剩余数量及保存方法。

C.细胞株长期保存应放置于液氮罐中，短时保存或过渡保存可置于-80℃冰箱

中。

D.保存的细胞株应定期复活、保种，即每半年对没有复苏过的细胞株进行维护，

复苏、培养和保存，并详细记录细胞株状态，如形态、生长速度、抗体分泌情况等。

E.细胞株不得外借，不得随便带出实验室。

F.细胞株的使用、保存、转移和销毁应符合相关部门的有关规定。

2．使用流程规定

A.如有新细胞株进入实验室，需告知实验室负责人并进行冻存保种；

B.实验室人员需复苏细胞时，需提前向实验室负责人申请，经批准后方可复苏；

C.设存取记录表，实验人员存取细胞时做好记录并把细胞复苏情况反馈至实验

室负责人，实验室负责人需监督实验人员做好细胞株使用记录情况；

D.若复苏细胞人员复苏同一株细胞株两次均未成活，需通知负责人进行检查和

复苏，如贮存细胞确实出现问题，则及时清理。

三、细胞保存

A.冻存条件：90%FBS+10%DMSO，4℃冰箱预冷；

B.冻存方法：

4 ℃（30-40min）→-20 ℃（1-2h）→-80 ℃（过夜/24 h以上，可短时保存

1-3个月）→液氮（永久保存；

C.填写冻存记录表

四、细胞复苏

A.水浴锅37℃预热

B.从细胞冻存管理表中查找并记录所需细胞在液氮罐中的位置。

C.液氮罐中快速取出细胞，迅速放入水浴锅中融化，并持续晃动，避免因受热

不均产生冰晶，损伤细胞，融化时间为1～2min；

D.将细胞悬液移至离心管中，加入10倍体积的细胞培养液，混匀；

E.1200rpm/min，离心5min

F.弃去上清液，加入新的培养液重悬，移至细胞培养瓶中，显微镜下观察细胞

形态，37℃培养箱培养。

G.次日，更换培养液继续培养，待其铺满培养瓶面积80%及以上，可尽心传代。

四、液氮罐的使用

A.开启液氮罐时，戴好防冻棉手套，防止冻伤；

B.提前确定细胞保存位置，避免提篮在外停留时间过长；

C.填写复苏记录表，负责人做好整理保藏记录，禁止短期内使用同一株细胞的

多管细胞，复苏后使用细胞的同时需补充细胞株库存，写明细胞名称、冻存时间、冻存人等细节。

五、附件

1.细胞冻存记录表

以50L液氮罐所配的6个提篮，每个提篮6层抽屉柜，每个抽屉柜5*5个冻存管。

以1号提篮Ⅰ层、Ⅱ层为例：

2. 细胞复苏记录表

3.细胞株整理记录表