课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

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专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》
➢实验目的从土壤中分离分解尿素的细菌并计数
培养基中以尿素为唯一氮源，只有能合成脲酶的微生
➢实验原理物才能分解尿素，缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿
素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。
➢实验材料小铁铲、培养皿、试管、移液管、锥形瓶等
（二）制备培养基实验组：制备选择培养基（尿素为唯一氮源的培养基）
筛选出能够分解尿素的细菌
对照组：制备完全培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）
与选择培养基做对照，检测选择培养基是否具有选择作用
➢实验步骤——【3】样品稀释与涂布
判断选择培养基是否具有筛选作用
选择培养基完全培养基
➢实验步骤——【3】样品稀释与涂布
（3）测真菌数：一般用102、103、104稀释液
第一次做该实验时，可以将稀释的范围放宽一点，如可以将103 ~ 107分别涂布到平板上培养。保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板
➢4】微生物的培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。
➢实验步骤实验结果
实验流程：
土壤取样制备培养基样品稀释涂布平板微生物的培养与观察
菌落计数
（一）土壤取样从富含有机物、潮湿、酸碱度适中的土壤中取样。铲去表层土3cm左右，取样，将样品装入事先准备好的
信封中。铁铲和信封都要灭菌
“微生物的天然培养基”
数量最大、种类最多
大约70%—90%是细菌细菌适宜在富含有机质，酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大多数分布在约3~8cm的土壤层。

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

缺点：不能区分死菌与活菌（数值偏大）；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察；
计算公式：每毫升原液含菌数=400×104×每小格平均菌体数×稀释倍数
2.间接计数法（活菌计数法-菌落）（1）常用方法：稀释涂布平板法。（2）原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个活菌繁殖而成的。
培养基类型实验组以尿素为唯一
氮源的培养基
是否接种目的
分离尿素
是
细菌
结果只生长尿素细菌
对照组牛肉膏蛋白胨
是
判断该培养基生长多种微生物
培养基
有无选择性
二、研究思路（一）筛选菌株（二）统计菌落数目（三）设置对照
（二）统计菌落数目
1、显微镜直接计数：利用血球计数板(血细胞计数板），在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。
不加有机碳源不加氮源加入青霉素加高浓度食盐不加C、N源石油是唯一碳源
自养微生物固氮微生物酵母菌和霉菌金黄色葡萄球菌
自养固氮菌能消除石油污染的微生物
4、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：
①从物理性质看此培养基属于哪类？固体培养基
②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素
4、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌
二、研究思路
（一）筛选菌株（二）统计菌落数目（三）设置对照
（一）筛选菌株
1、科学实例：寻找耐高温的DNA聚合酶 PCR是一种在体外DNA复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。
3、例如： ①判断培养基中是否有杂菌污染：

2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(上课)

• 7．血球计数板的清洁血球计数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，
洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95%的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。
例题
• 例1：用血球计数板对培养液中酵母菌进行计数，若计数室为1mm×1mm×0.1mm方格，由400个小方格组成，如果一个小方格内酵母菌过多，难以计数，应先稀释后再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有 2×108 个。
解析：根据公式：5×400×10000×10＝2×108
• 例3（2008江苏高考31．）
（4）在整个实验过程中，直接从静置的培养瓶中取培养原液计数的做法是错误的，正确的方法是 _和培养后期的样液稀释后再计数摇匀培养液后。再取样
（5）实验结束后，用试管刷蘸洗涤剂擦洗血球计数板
的做法是错误的，正确的方法
培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基（选择培养基）就能够选择出分解尿素的微生物。
（二）统计菌落数目
1.显微镜直接计数利用血球计数板，在显微镜下计算一定容
积里样品中微生物的数量。
尿素
1.0g
琼脂
15.0g
①从物理性质看此培养基属于哪类？固体培养基
②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？
碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素
〖思考2〗该培养基对微生物具有（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机
制是只有能够以尿素作。为氮源的微生物才能在该培养基上生长

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

去3cm表层土）。
2.制备培养基：
制备两种培养基：牛肉膏蛋白胨培养基（完全培养基）—对照组尿素为唯一氮源培养基（选择培养基）-实验组
将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。
大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征大肠杆菌的菌落呈黑色,有或无金属光泽
六.结果分析与评价
（一）培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落
对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染；
牛肉膏蛋白胨培养基(完全培养基)中菌落数目明显多于选择培养基，说明选择培养基已筛选出一些菌落。
因此，还需借助生物化学方法对分离的细菌作进一步的鉴定。(筛选后必鉴定)
五、课外延伸
1、对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助生物化学的方法。
2、在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨。氨会使培养基的碱性增强，PH 升高。因此，我们可以通过检测培养基 pH 变化来判断该化学反应是否发生。
以防被
致病微生物
感染，实验
后一定要洗手。
当堂训练
1.使用选择培养基的目的是（ C ） A.培养细菌 B.培养真菌 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加
以区别
2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分
别是( D )
A.CO2和N2 C.CO2和尿素
B.葡萄糖和NH3 D.葡萄糖和尿素
（二）统计菌落的数目
采用什么方法可以统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌呢？

2-2课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数研究思路（一）筛选菌株1、尿素是一种重要的氮肥，农作物（能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为，这是因为细菌能合成。

2、PCR技术中使用的耐高温的酶是，它是从中分离出来的。

科学家能从中把筛选出来是因为，这样也适用于实验室中微生物的筛选，原理是_ 。

点评：生物适应一定环境，环境对生物具有作用。

所以通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。

〖本课题使用的培养基——见旁栏资料〗〖思考1〗在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是，提供氮源的的是，琼脂的作用是。

〖思考2〗该培养基对微生物（具有，不具有）选择作用。

如果具有，其选择机制是。

3、选择培养基是指特定种类的微生物生长，同时其他种类微生物生长的培养基（二）统计菌落数目1、在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是。

除此之外，也是测定微生物数量的常用方法。

【补充】显微镜直接计数是测定微生物的方法。

公式：观察到的红细胞平均数∶观察到的细菌平均数＝红细胞含量∶细菌含量2、统计菌落数目的理论依据是：当样品的稀释度足够时，_ 。

通过统计，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

因此，恰当的是成功地统计菌落数目的关键。

3、．为保证统计结果准确，通常将都涂布在平板上，培养后再选择的平板进行计数。

4、在设计实验时，一定要涂布至少个平板作为重复组，才能增强实验的说服力和准确性。

在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果，结果，意味着操作有误，需要重新实验。

〖思考3〗统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是_ 〖思考4〗第位同学的结果接近真实值。

你认为这两位同学的实验需要改进的操作是第一位同学需；第二位同学_ 。

5、统计的菌落数比活菌的实际数目。

因为当两个或多个细胞时，平板上观察到的只是菌落。

因此，统计结果一般用来表示。

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

【土壤中分解尿素的细菌的分离和计数】一、研究思路1．筛选菌株尿素是一种重要的肥，农作物不能直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为和CO2，才能被植物利用，土壤中的这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成。

可以利用这一特点，将其从土壤中筛选出来。

(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于_____ _生长的条件(包括营养、、pH等)，同时____ _或其他微生物生长。

(2)选择培养基：在微生物学中，将允许的微生物生长，同时和其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

2．统计菌落数目(1)常用来统计样品中数目的方法是__________ _______。

即当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中。

通过统计平板上的，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。

例如每克样品中的菌株数= ,C代表 ,V代表 ,M代表。

通常统计出的菌落数比活菌的实际数目。

这是因为。

因此，统计结果一般用而不是活菌数来表示。

(2) 也是测定微生物数量的常用方法。

(3)细菌的数目还可以通过法来测定。

例如，测定饮水中大肠杆菌的数量，可将的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现色，可以根据培养基上的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。

在该实验中至少应取___个水样。

3．设置对照(1)设置对照的主要目的是排除实验组中___________对实验结果的影响，提高实验结果的。

例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需用______________________________ 作为空白对照。

(2)对照实验是指除了的条件外，其他条件都的实验，其作用是比照实验组，排除任何其他可能原因的干扰，证明确实是所测试的条件引起相应的结果。

二、实验设计实验设计包括对实验方案，所需仪器、材料，用具和药品，具体的以及时间安排等的综合考虑和安排。

关于土壤中某样品细菌的分离与计数的实验操作步骤如下：1．土壤取样土壤微生物约70%～80%为，主要分布在距地表的近性土壤中。

人教版教学课件土壤中分解尿素的细菌的分离与计数定

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与记数
一、课题背景
1、尿素的利用
尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。
2、细菌利用尿素的原因
土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶
CO(NH2)
脲酶
+ H2O
+ CO2
NH3
.筛选菌株
1
.统计菌落数目
A
C
D
4.下列说法不正确的是（） A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶 B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值 C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。 5.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（） A.较多的氮源物质 B.较多的碳源物质 C.青霉素类药物 D.高浓度食盐
[三]样品的稀释
应在火焰旁称取土壤10g。在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行
分离不同的微生物采用不同的稀释度原因：不同微生物在土壤中含量不同目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板
为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？
解析：细菌群体生长规律的测定是人们在一定条件下进行的。这些条件是：一种细菌、恒定容积的培养基，液体培养基、定时测定细菌总数。在这些条件下，才能测定出细菌的生长规律。测定时只能用一种细菌的子细胞群体的变化规律表达微生物的生长；恒定容积是给微生物提供一定的生存环境；液体培养基才能通过样品推测细菌总数。若接种多种细菌，则会发生种间斗争而不能测定一种微生物的生长规律。在接种时，要保证一定的接种量。

《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》教案

课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、课题背景尿素是一种重要的氮肥，农作物不能（能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为氨和CO2 ，这是因为细菌能合成脲酶。

二、研究思路（一）筛选菌株1、实验室中微生物的筛选，原理是人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。

2、选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

3、配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。

例如，培养基中不加入有机物可以选择培养自养型微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养固氮微生物的微生物.加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。

（二）统计菌落数目1、常用方法：法当样品的稀释度足够时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中个活菌。

通过统计平板上的，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

1）注意问题①为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。

②统计的菌落数比活菌的实际数目。

这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是菌落。

因此，统计结果一般用来表示。

③利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是。

2）怎样计算2、也是测定微生物的常用方法。

（三）设置对照对照实验是指除了的条件外，其他条件都的实验。

满足该条件的称为对三、实验设计①土壤取样----土壤微生物主要分布在距地表 cm的近中性土壤中，约70％～90％为。

从富含、湿润的土壤中取样。

先铲去表层土 cm左右，再，将样品装入事先准备好的信封中。

②样品的梯度稀释-------分离不同的微生物采用不同的稀释度，③涂布平板与培养-----稀释液分别涂布到平板上培养，以保证能从中选择出菌落数在间的平板进行计数。

将涂布好的培养皿放在适宜温度下培养。

培养不同微生物往往需要不同培养温度。

细菌一般在30～37℃培养1～2d，放线菌一般在25～28℃培养5～7d，霉菌一般在25～28℃的温度下培养3～4d。

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

专题2——
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
目标导航 1.能利用选择培养基分离细菌。 2.能运用活菌计数法测定土壤中分解尿素细菌的数量。
1 预习导学挑战自我，点点落实
2 课堂讲义重点难点，个个击破
3 对点练习
即时训练，体验成功
预习导学
挑战自我，点点落实
一、研究思路
1.筛选菌株
(1)PCR技术要用到一种关键酶—— Taq DNA聚合酶，这
3.2013年11月22日凌晨3点，青岛黄岛区发生石油泄漏事件，一些微生物可以有效地分解石油，如何配制选择培养基将这类微生物选择出来？答案配制的选择培养基中，石油作为唯一的碳源，然后用这种培养基培养多种微生物，凡是能在该种培养基上生存的就是能分解石油的微生物。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
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四、课题延伸分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨，使培养基的碱性增强。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可以初步鉴定该种细菌能够分解尿素。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
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预习诊断
判断正误：
(1)选择培养基只允许特定的微生物生长，而抑制或阻止其他微生
一、选择培养基
1.选择培养基的制作方法
(1)在培养基全部营养成分具备的前提下，依据某些微生物对某
些物质的抗性，在培养基中加入某些物质，以抑制不需要的微生
物，促进所需要的微生物生长，如培养基中加入高浓度食盐时可
抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而可
将该菌分离出来；而在培养基中加入青霉素时可抑制细菌、放线
目在30～300的平板
操作成功

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数一、筛选菌株的思路1、自然界中目的菌株的筛选（1）原理：根据对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。

2、实验室中目的菌株的筛选（1）原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。

（2）方法：利用选择培养基分离。

选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时阻止或抑制其他种类微生物生长的培养基。

尿素是一种重要的农业氮肥，尿素不能直接被农作物吸收，只有通过土壤中的细菌将尿素分解为氨后，才能被植物利用，土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶。

可以利用这一特点，将其从土壤中筛选出来。

（3）实例：①以尿素作为唯一氮源的培养基可以分离出分解尿素的细菌，因为只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，利用其中的氮元素。

②加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。

③加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。

④无氮源培养基可以分离固氮微生物。

⑤石油是唯一碳源的培养基，可以分离能消除石油污染的微生物。

⑥将培养基放在高温环境中培养，分离耐高温的微生物。

二、统计菌落数目1、常用来统计样品中活菌数目的方法是稀释涂布平板法。

（1）原理：样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。

通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有的活菌数。

(2)计算公式：每克样品中的菌株数＝培养基上平均菌落数×稀释倍数÷涂布液体积，即(C÷V)×M。

（3）注意事项:a．为了保证结果准确，每个稀释度涂布至少 3 个平板作为实验重复，求其平均值（平行重复原则）。

选择菌落数在 30～300 的平板进行计数。

设置重复实验的目的是：排除偶然因素对实验结果的影响。

b．稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。

原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。

因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。

高中土壤中分解尿素的细菌的分离与计数及答案教案

高中土壤中分解尿素的细菌的分离与计数及答案教案YUKI was compiled on the morning of December 16, 2020课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数要点展示1．研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。

2．能利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数。

要点突破一、理论基础1．筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时或其他微生物生长。

(2)选择培养基：在微生物学中，将允许种类的微生物生长，同时和其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

（3）配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。

例如，培养基中不加入有机物可以选择培养微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养；的微生物.加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。

2．统计菌落数目（1）测定微生物数量的常用方法有和。

（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个。

通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。

此外，测定微生物数量的常用方法还有直接计数。

3．设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的。

例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养的培养基作为空白对照。

二、实验设计关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下：1．取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。

应先 3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的中。

2．制备：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。

3．微生物的与观察将10g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液，转移至盛有的生理盐水的无菌大试管中，将土样以1、101、102……依次等比稀释至107稀释度，并按照由107～103稀释度的顺序分别吸取进行平板涂布操作。

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数核心知识要点1．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(1)分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。

(2)统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用稀释涂布平板法。

2．实验流程(1)土壤取样→富含有机质的土壤表层土(2)样品的稀释→通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板(3)接种→用稀释涂布平板法接种(4)培养⎩⎪⎨⎪⎧细菌：30～37 ℃培养1～2天放线菌：25～28 ℃培养5～7天霉菌：25～28 ℃培养3～4天(5)观察→根据菌落的特征区分微生物 (6)计数→统计菌落的数目(7)计算→根据公式“每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M[C 代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V 代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M 代表稀释倍数]”进行计算【重难详解】1．选择培养基四种常见制备方法或实例方法一加入某些特定物质2．两种计数方法的比较【解析误区】1．“选择菌落数在30～300的平板”的两个提醒用稀释涂布平板法计数微生物时，要求选择菌落数在30～300的平板进行计数。

解题时易出现以下误解： (1)只得到1个菌落数在30～300的平板是错误的。

错误的原因是不符合实验的重复原则，易受到偶然因素的影响。

(2)得到3个或3个以上菌落数在30～300的平板，也不一定正确，这可能有两种情况：①不同平板间差异较大，如得到3个平板，菌落数分别为230、34、240，虽然菌落数均在“30～300”，这也是不正确的，因为“34”与“230”“240”差异太大，应重新实验找出原因。

②不同平板之间差异不大，是符合要求的，用其平均值作为估算的最终结果。

可见，并不是只要得到3个“菌落数在30～300的平板”即可，而应该是涂布的同一稀释度的平板均符合“菌落数在30～300之间”且无较大差异，说明实验操作合格，才能按照计算公式进行计算。

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数【教学目标】（一）知识与技能利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数（二）过程与方法分析研究思路的形成过程，找出共性和差异性（三）情感、态度与价值观形成无菌不在的概念，养成讲究卫生的习惯【教学重点】对土样的选取和选择培养基的配制【教学难点】对分解尿素的细菌的计数【教学方法】启发式教学【教学工具】多媒体课件【教学过程】（一）引入新课上节课我们学习了培养基的配置以及接种技术。

下面我们来学习如何进行细菌的分离，获得所需要的目的微生物。

（二）进行新课1．基础知识1．1 尿素是一种重要的氮肥，农作物不能（能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为氨和CO2，这是因为细菌能合成脲酶。

1．2 科学家能从热泉中把耐热细菌筛选出来是因为热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物，这样也适用于实验室中微生物的筛选，原理是人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。

点评：生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用。

所以通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。

〖思考1〗在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是葡萄糖，提供氮源的的是尿素，琼脂的作用是凝固剂。

〖思考2〗该培养基对微生物具有（具有，不具有）选择作用。

如果具有，其选择机制是只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长。

1．3在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是稀释涂布平板法。

除此之外，显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。

【补充】显微镜直接计数是测定微生物的方法。

公式：观察到的红细胞平均数∶观察到的细菌平均数＝红细胞含量∶细菌含量1．4 采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中一个活菌。

通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300 的平板进行计数。

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、理论基础1．筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时或其他微生物生长。

(2)选择培养基：在微生物学中，将允许种类的微生物生长，同时和其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

（3）配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。

2．统计菌落数目（1）测定微生物数量的常用方法有和。

（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个。

通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。

此外，测定微生物数量的常用方法还有直接计数。

3．设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的。

例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养的培养基作为空白对照。

二、实验设计关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下：1．取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。

应先 3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的中。

2．制备：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基，将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。

3．微生物的与观察将10g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液，转移至盛有的生理盐水的无菌大试管中，将土样以1、101、102…… 依次等比稀释至107稀释度，并按照由107～103稀释度的顺序分别吸取进行平板涂布操作。

每个稀释度下需要3个选择培养基、1个牛肉膏蛋白胨培养基。

土壤中分解尿素的细菌的分离与记数

尿素分解细菌的纯培养
尿素分解细菌的纯培养是分离尿素分解细菌的关键步骤，通过选择性培养基，将土壤中的尿素分解细菌分离出来，获得单一菌落。
培养基中添加尿素作为唯一氮源，以筛选出能够分解尿素的细菌。同时，培养基中还应添加适量的其他营养成分，以满足尿素分解细菌的生长需求。
尿素分解细菌的计数方法
尿素分解细菌的计数可以采用菌落计数法或细胞计数法。菌落计数法是通过培养基上形成的菌落数量来计算尿素分解细菌的数量，而细胞计数法则采用显微镜直接观察和计数细胞。
菌落计数法操作简便，但可能存在菌落重叠和无法区分死菌和活菌的问题。细胞计数法虽然准确度高，但操作较为复杂，需要使用显微镜和专业的细胞计数器。
尿素分解细菌的计数实验步骤
将土壤样品稀释后涂布在含有尿素的培养基上，然后进行培养。
对筛选出的尿素分解细菌进行纯培养，并进行进一步的生理生化实验和分子生物学鉴定，以确定其种类和特性。
采集时间
采样方法
选择适宜的时间采集土壤样品，通常在春季或秋季进行，此时土壤中的微生物活性较高。
采用多点采样法，在不同地点和深度采集土壤样品，以获得更全面的土壤信息。
采样地点
选择具有代表性的土壤区域进行采样，如农田、森林、草地等，确保采集的土壤样品具有广泛性和代表性。
分离尿素分解细菌的方法
生长特性
这些细菌在尿素培养基上生长良好，表现出对尿素的良好分解能力。
尿素分解细菌的记数结果
菌落计数
通过菌落计数法，对分离出的尿素分解细菌进行数量统计。
数量分布
在土壤的不同区域，尿素分解细菌的数量分布存在差异。
生长条件
部分尿素分解细菌对生长条件较为敏感，如温度、 pH值等。