马松三色染色原理masson

是多孔的构造。不同的组织和细胞成分,它们的孔隙大小是不同的。孔隙的大小,决定了组织的渗透 性。如孔隙小,组织结构致密,渗透性低；孔隙宽,组织结构疏松,渗透性高。如已固定的组织用一系 列阴离子水溶性染料先后或混合染色,则可发现红细胞被最小分子的阴离子染料着染.肌纤维与胞质 被中等大小的阴离子染料着染,而胶原纤维则被大分子的阴离子染料着染。由此说明了红细胞对阴 离子染料的渗透性最小,肌纤维与胞质次之,而胶原纤维具有最大的渗透性。根据组织不同的渗透性 能,选择分子大小不同的阴离子染料进行染色,便可把不同组织成分显示出来. 染料分子的大小,主要由其分子量来体现。小分子量者易于穿透结构致密、渗透性低的组织,而大分 子最者则只能进入结构疏松,渗透性高的组织。一般来说,结构疏松,渗透性高的组织多选择大分子 染料,而结构致密,渗透性低的组织多选择小分子染料。常用作胶原纤维染色的几种阴离子染料的分 子量由小到大分别是: 苦味酸(黄色),分子量,229.11 橙黄G(橙黄色),分子量452 丽春红(红色),j女子量,480.42 酸性品红(红色),分子量,585.53 苯胺蓝(蓝色),分子量737.72 亮绿(绿色),分子量792.72 甲基蓝(蓝色),分子量,799 因此,在Van Gieson氏法中,苦味酸染红细胞和肌纤维,酸性品红染胶原纤维,而在Masson氏法中,酸 性品红或丽春红染肌纤维,而苯胺蓝或亮绿染胶原纤维。染色反应是一个很复杂的过程,胶原纤维染 色除上述两个方面外,不排除电子吸附和排斥作用。在实际染色中,两种阴离子染料的比例也是很重 要的。在Van Gieson氏染色,苦味酸与酸性品红浓的比例若不恰当,如苦味酸的浓度太高,小分子量 染料苦味酸占优势,则结构致密的胞浆,肌纤维和结构疏松的胶原纤维都会被苦味酸所着染。这点是 要注意的。 应用： 胶原纤维和肌纤维的鉴别染色是病理组织制片的一个重要方法,它的染色对病理诊断很有帮助。 1.来源于间胚叶的肿瘤,如纤维瘤、平滑肌瘤、横纹肌瘤、神经纤维瘤甚至它们的肉瘤等都产生一 定的纤维,这些纤维在H-E染色中都染成红色而难以区别。通过用上述方法染色,一般可区分出该肿 瘤组织是胶原纤维源性,还是肌源性,或者是神经纤维源性。对于后者,有时还需加染磷 钨酸苏木素来协助诊断。 2.在慢性炎症,机化和瘢痕形成中,可随病理过程的发展而出现胶原纤维。在早期,H-E染色切片中的 这些纤维往往和纤维蛋白很难鉴别,通过胶原纤维染色则可证实。如慢性肾小球肾炎的肾小球纤维 化后,V.G.染色呈红色。大叶性肺炎或血栓发生机化后,原有的纤维蛋白灶内出现胶原纤维,V.G.染 色呈红色。风湿性肉芽肿已静止时,阿啸夫氏(Aschoff's。巨细胞消失,病灶内的纤维被胶原纤维取 代,V.G.染色也呈红色。胃、十二指肠溃疡愈复时,在渍疡底部出现胶原纤维构成的疤痕,慢性阑尾 炎时阑尾壁出现的纤维化,肝硬化时胶原纤维的增生,这些用V.G。染色也都染成红色。 3.血管壁的胶原纤维染色对病理诊断也很重要。良性高血压,小动脉的玻璃样变,V.G.染色阳性。恶 性高血压病时,小动脉管壁为纤维素样坏死,V.G.染色阴性而纤维素染色阳性 4．V.G.染色对是高血压性血管疾患还是淀粉性样变血管损害的鉴别也很重要。H-E染色的玻璃样变 和淀粉样变有时很难区别，用V.G.染色和淀粉样物质染色则可作出区别。如高血压性肾固缩其小动 脉壁V染色呈红色。而淀粉样物质沉积的小动脉壁V.G.染色呈黄色。
二 Van Gieson氏染液
A液:1%酸性品红水溶液 B液：苦味酸饱和水溶液（约1.2%） A、 B两夜分瓶盛放。临用前取A液1份，B液9份混合后使用 操作方法 1 组织固定于10%甲醛液，常规脱水包埋 2 切片脱蜡至水 3 用Weigert氏铁苏木素染液5~10分钟 4 流水稍洗 5 1%盐酸酒精迅速分化 6 流水冲洗数分钟 7 用Van Gieson氏染液染1~2分钟 8 倾去染液，直接用95%酒精分化和脱水（可放入温箱烤干后，直接透明封片） 9 无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固 结果：肌纤维，胞质及红细胞黄色，胞核蓝褐色
Masson染色 (2010-09-02 14:43:20)
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masson 染色原理
Masson三色法 （根据Masson,1929） 试剂配制 （一） Weigert氏铁苏木素液（见苦味酸——酸性品红法） （二） 丽春红酸性品红液 丽春红（Ponceau 2R） 0.7g 酸性品红（acid fuchsin） 0.3g 蒸馏水 99ml 冰醋酸(glacial acetic acid) 1ml （三） 1%磷钼酸水溶液 磷钼酸（phosphomolybdic acid） 1g 蒸馏水加至 100ml （四） 2%苯胺蓝液 苯胺蓝（aniline blue） 2g 冰醋酸（glacial acetic acid ） 2ml 蒸馏水加至 100ml （五） 亮绿液 亮绿（light green） 1g 蒸馏水 99ml 冰醋酸（glacial acetic acid ） 1ml 操作方法 1． 组织固定于Bouin氏液或Zenker氏液，流水冲洗一晚，常规脱水包埋。 2． 切片脱蜡至水。 如用Zenker氏液固定者，应进行除汞处理，其步骤如下： （1） 切片脱蜡后于0.5%碘酒精作用10分钟。 （2） 稍水洗 （3） 5%硫代硫酸钠作用5分钟。 （4） 流水冲洗10分钟 3． Weiger氏铁苏木素染5-10分钟。 4． 流水稍洗。 5． 1%盐酸酒精分化。 6． 流水冲洗数分钟。 7． 丽春红酸性品红液染5-10分钟。 8． 蒸馏水稍冲洗。 9． 1%磷钼酸水溶液处理约5分钟。 10．不用水洗，直接用苯胺蓝液或绿液复染5分钟。 11．1%冰醋酸处理1分钟。 12．95%酒精脱水多次。 13．无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固 结果： 胶原纤维虽蓝色(用苯胶蓝液复染)或绿色(用亮绿复染)。胞质、肌纤维和红细胞红色。胞核蓝褐 色。 注意事项: 1.组织用Bouin氏液或Zenker氏液固定为佳。如已用10%甲酸液固定,切片可在脱蜡至水后.再放入 Bouin氏液作用一晚或置37。C温箱内1-2小时,然后流水冲洗切片至黄色消失再进行染色。 2.铁苏木素染核(见苦味酸一酸性品红法)。 3.如没有丽春红染料,可把酸性品红加至1克来配制。 4.用1%磷钼酸处理时可在镜下控制.见肌纤维呈红色,胶原纤维呈淡红色即可。 染色原理: 上面介绍的胶原纤维染色如苦味酸-酸性品红法和三色染色法,都是利用两种或三种阴离子染料混合 一起或先后作用而完成鉴别染色的。Van Gieson氏染色中,为什么胶原纤维呈红色(被酸性品红所 染),肌纤维呈黄色(被苦味酸所染).而Masson氏染色时胶原纤维呈蓝色(被苯胺蓝所 染),肌纤维呈红色(被酸性品红和丽春红所染),这与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。 组织的渗透性(Permeability),取决于组织的结构密度。如果细致地观察,会发现组织和细胞成分都
95ml （30%三氯化铁溶液则为100ml）
盐酸
1ml
临用时，取甲、乙液等量混合即可应用。混合时应将乙液加人甲液内，染液呈紫黑色。铁苏木素不能象明矾苏 木素一样配制后可放置贮存备用，因铁与染色剂的色素根会化合生成不溶性沉淀，所以铁作媒染液时，必须与染 液分别配制和分别保存，染片时临时混合应用。
由于这是一种铁苏木素，它将胞核染成黑色。能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用，且不会被光线退 色，因此比钾矾苏木素染色较为持久。
备注
1 Bouin氏液是常用的混合固定液
配方： 苦味酸饱和液（1.22％）75ml 制，对皮肤及肌腱有软化作用。
福尔马林25ml
冰醋酸5ml
此液一般在临床用时配
2 苦味酸-酸性品红法
一Weigert氏铁苏木素液
甲液 苏木素
1g
无水酒精（或 95％酒精） 100ml
乙液 29Baidu Nhomakorabea三氯化铁水溶液
4ml
蒸馏水