1.提取淋巴细胞步骤

提取大鼠淋巴细胞的步骤：

1.准备工作：将实验用具（小剪子3把，小镊子3把，磁盘1个，离心管1盒，离心管盖1盒，筛网1盒，表面皿1组，注射器2支，手套1副，1000ul枪头1盒，200ul枪头1盒，10ul枪头1盒，白大褂）放在紫外光下照射30分钟以上。实验试剂（PBS、无血清的培养液、有血清的培养液、淋巴细胞分离液）准备好。检查酒精灯内酒精量灯芯、酒精棉量。

脱颈处死，放入酒精中浸泡20分钟（可放到无菌室中）。

3.拿好实验药液（有血清的培养液，无血清的培养液，PBS，淋巴细胞分离液）进入无菌室，穿好白服套袖，于手上身上喷好酒精消毒，进入操作台，擦拭台子，台子干后点燃酒精灯。

（缓冲液，生化反应中以免影响体系PH值波动），将大鼠取出至于磁盘中，于腹中线剪开皮毛，向左侧剪开，用镊子在大鼠左侧找到长条状的脾脏，将脾脏至于PBS中分离结缔组织。

注意：勿将脾脏接触到皮毛引起污染，结缔组织尽量去除干净

200目），浸湿，用镊子夹取脾脏至于筛网上，用第一个注射器芯将其碾碎干净（碾碎至筛网上剩余物质为白色），吸取无血清培养液2ml

PBS的无用表面皿中。

注意：夹取脾脏的镊子不可以碰到筛网以外的液体中，以免污染组织；注入培养液时不要产生气泡（气泡会影响细胞生长）。

6.避光条件下，第二个注射器吸取3ml淋巴细胞分离液（先注入气体再抽取液体）加于离心管中（加4个）。将装有组织液的表面皿倾

用新的一二混用注射器吸取3ml缓慢注入离心管中，一定要让界面明显。

7.稳拿离心管放入离心机中，离心（2500r/min，20min）。

注意：动作稳，配平时找放的稳得离心管。若脾脏的状态不好，可适当增加离心转数（3000）。

8.稳稳拿出离心管，用200ul 的枪吸取离心管中处于中间的淡黄色条带（先排气后插入吸取液体，一般能吸取500-600的液体），集中收于第五、六个离心管中，9.离心（1500r/min，10min），慢弃上清（倒入刚才的表面皿中），加入PBS 6-7ml

反复吹吸充分，离心（1500r/min，10min）。准备细胞计数板。

10.慢弃上清，加入有血清的培养液4ml，↓吸取10ul于细胞计数板上，开始计

64个格中的数量= a/4 *10000 ml）

可变根据具体提到的细胞数量及下面试验所应用的具体用量来定稀释的剂量11.取培养板分别于每个孔中加入淋巴细胞液1ml，再加入适量所需测定的物质，盖好盖子，标记好，喷酒精放入CO2培养箱中，培养24小时。

12.

枪调回最大量程放好；酒精擦拭台子；废液缸倒掉垃圾清理掉，鼓风机关闭。