银杏黄酮类化合物的提取1

银杏黄酮类化合物的性质

银杏黄酮类化合物的苷元一般难溶于或不溶于水，可按于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、乙醚等有机溶剂及稀碱溶液中。银杏黄酮苷元与糖结合成苷后，水溶性相应增大，一般可溶于热水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙能中，难溶于乙醚、石油醚、苯、氯仿等有机溶剂。银杏黄酮类化合物因分子中具有酚羟基而显弱酸性，可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺等。

根据活性成分的特性，本实验中主要采用了简单易行、比较常用的有机溶剂提取法来进行有效成分的提取。由于回流提取法是利用易挥发的有机溶剂进行加热提取，并采用冷却装置使溶剂连续回流，使植物有效成分能充分提出，且此法简单易行，溶剂用量少，提取较完全，故本实验中采用了回流提取法。

通过查找相关文献知银杏绿叶中总黄酮含量约为1.19%，银杏黄叶的总黄酮含量约为0.83%，所以采用绿叶作为原料提取黄酮类化合物，可以提高总黄酮的产量。在60℃时碱性去离子水的提取率为46.2%，纯乙醇的提取率为73.41%，乙醇水溶液的提取率介于两者之间，考虑成本，使用乙醇水溶液作为浸取剂更为合适。且在70%的乙醇水溶液，浸取温度为80℃，料液比为1:15，提取时间为4h的提取条件下黄酮类化合物的提取率为87.54%。

试剂与仪器

试剂：芸香叶苷标准品(纯度≥95％)，银杏叶，乙醇，亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠。

仪器：紫外—可见分光光度计、粉碎机，烘箱，分析天平，恒温水浴锅，搅拌器，搅拌叶，升降架，冷凝管，温度计(量程100℃)，真空泵，三口烧瓶（100ml）容量瓶（10ml、50ml）。

具体步骤

1、银杏黄酮的提取将银杏叶干燥，粉碎，筛分，精确称量20目的银杏叶样品10g。

（1）将其和35mL70％乙醇水溶液加入到100mL带搅拌、冷凝管和温度计的三口烧瓶中进行回流提取，在50℃搅拌提取2h。

（2）将粗提液过滤、抽滤，再用70％乙醇定容至50mL。

（3）定容液中黄酮类化合物的含量用紫外—可见分光光度计测定。

2、银杏黄酮的测定

（1）标准溶液的配制精确称取芸香叶苷5mg，置于50mL容量瓶中，加入适量60%乙醇，在水浴上加热溶解，自然冷却，用60％乙醇稀释至刻度，摇匀。（2）标准曲线的制作取10mL容量瓶6只，分别准确吸取标准溶液1.0mI、2.0mI、3.0mI、4.0mI、5.0mL置于10mL容量瓶中，另一容量瓶中不加标准溶液(配制空白溶液，作参比)。然后各加30％乙醇补充至5mI，加入5％亚硝酸钠溶液0.3mI，摇匀，放置6min，再加10％硝酸铝溶液0.3mL，摇匀，再放6min，加4％NaOH溶液4mL，用水稀释到10mI，放置20min。在紫外—可见分光光度计上，先取两个2cm比色皿加空白溶液，调零。取出一个比色皿，分别加入不同浓度的溶液，在波长510nm处测定吸光度，以酮含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

（3）未知液中酮含量的测定吸取2mL未知液代替标准溶液，其他步骤均同上，测定吸光度。由未知液的吸光度在标准曲线上查出2mL未知液中黄酮的含量。乙醇提取

银杏叶采集后洗净，于60℃烘干至恒重，粉碎、过筛。称取粉碎银杏叶100g，加入400ml75%酒精，浸泡过夜，再于55℃左右水浴，并不断搅拌，5～6h后趁热过滤，收集滤液。将滤渣重复上述操作，合并两次滤液；将滤液盛于分液漏斗中，用石油醚萃取1～2次，每次石油醚用量约为滤液体积的1/25，直到水层不含叶绿素时为止；将分液漏斗中分出的水相，用旋转蒸发器旋转蒸发，同时回收乙醇；当蒸至少量液体时，转入培养皿中，于60～70℃干燥箱中烘干，得到棕红色粘稠物，这就是主要成份为黄酮类化合物的银杏叶提取物。

1.溶剂热法

是指在特制密封容器中，以有机溶剂为反应介质，通过对体系加热进行合成的一种方法，该法中溶剂因在密闭条件下而表现出高压、高传质速率等优势性。利用这一原理，将该方法用作银杏叶黄酮的提取，取得了较理想的效果。

称取1.0ｇ磨细的银杏叶粉末，装入50ml止聚四氟乙烯内衬的不锈钢反应釜中，加入70%的乙醇40ml，将反应釜密封好，置于干燥箱，在90℃下按设定的时间(3小时)加热，待自然冷至室温后取釜，将提取液抽滤，取滤液10ｍＬ加入3ｍＬ体积比为1:4的盐酸，在90℃的水浴中水解30min后迅速冷至室温，用甲醇定容于25ml容量瓶得分析液。