13细菌室药敏细菌标准操作规程

深圳市第六人民医院细菌室

细菌K-B法药敏试验标准操作规程SOP编码：SOP-JY-XJ-13 页数：5页制定人签名：日期：

审核人签名：日期：

批准人签名：日期：

生效日期：颁发日期：

周期性审查：2 年一次

修订登记：

审查登记：

I.目的：建立实验室细菌K-B法药敏试验标准操作规程，以保证实验室检测结果的可

信性，确保临床试验的质量。

Ⅱ.范围：适用于细菌室。

Ⅲ.规程：

1 简介：细菌药敏试验结果可以为临床合理使用抗生素提供信息，以减少细菌耐药性。

2 仪器：

2.1 35℃孵箱；

2.2 纸片分离器；

2.3 冰箱

3 原理：K-B法纸片琼脂扩散法，将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关关系。

4 试剂：

4.1 MH平板，购自公司，2-8℃冰箱内保存；

4.2 抗菌药物纸片，购自公司，-20℃冰箱内保存。

5 K-B法操作程序：

5.1 用无菌棉签将平板上的细菌混悬于无菌生理盐水中，调至0.5麦氏；

5.2 用无菌棉签蘸取菌液，在管内壁将多余菌液旋转挤去后，在琼脂表面均匀接种3次，每次旋转平板60º，最后沿平板内缘涂抹1周；

5.3 平板在室温下干燥3-5分钟，用纸片分离器将含药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心相距大于24毫米，纸片距平板内缘大于15毫米；

5.4 置35℃孵箱16-18小时后阅读结果，对甲氧西林和万古霉素敏感试验结果应24小时；

5.5 结果判断，用精确度为1毫米的尺量取抑菌圈直径，抑菌圈的边缘应是无明显细菌生长的区域；

5.6 当葡萄球菌对苯唑西林的药敏试验或肠球菌对万古霉素的药敏试验，围绕纸片周围只要有极少细菌生长均提示为耐药；

5.7 根据NCCLS标准，对量取的抑菌圈直径作出“敏感”、“耐药”和“中介”。

6 室内质量控制：

6.1 室内质控物：标准菌株金黄色葡萄球菌ATCC25923，G+球菌；大肠埃希氏菌ATCC25922，铜绿假单胞菌ATCC27853，均为G-杆菌。

6.2 室内质控时间：每周一次，利用上述3株菌株进行K-B法药敏试验。

6.3 室内质控失控处理：

6.3.1 确认所有操作均按标准操作程序进行。

6.3.2 确认质控物是否准确，培养时间是否合适。

6.3.3 并换取药敏纸片，重新操作一次。

6.3.4 如果结果仍然失控，则可能纸片药物失活，与公司联系。

Ⅳ.参考依据：临床检验操作规程（第二版）。

Ⅴ.附件：

1 本实验室K-B法选用的药物

2 本实验室K-B法药敏结果记录卡

药物编号

肠科细菌选用药物 平板1

平板2

平板3

非发酵菌选用药物

葡萄球菌选用药物

肺炎链球菌药敏结果记录卡日期：标本号：细菌鉴定结果：

其它链球菌药敏结果记录卡

日期：标本号：细菌鉴定结果：

葡萄球菌药敏结果记录卡

日期：标本号：细菌鉴定结果：

MRS确认试验:葡萄球菌对OXA(苯唑西林),FOX(头孢西丁)都耐药

注意:葡萄球菌对VAN(万古霉素)的抑菌直径<15,请复查!必要时做MIC或ETEST!

嗜血杆菌药敏结果记录卡

日期：标本号：细菌鉴定结果：

肠杆菌药敏结果记录卡

日期：标本号：细菌鉴定结果：

ESBL确认试验:CDO2或CDO3与前者抑菌直径>=5mm

非发酵菌药敏结果记录卡日期：标本号：细菌鉴定结果：