流式细胞仪分选

抑癌基因蛋白产物的检测;细胞内酶;耐药蛋
白的分析等等。
临床应用
疾病诊断:为疾病诊断提供直接的或支持诊断的依据 免疫调节：细胞因子/受体的相互作用 共刺激分子受体/配体的相互作用 发病机理：肿瘤的发病与机体的免疫力低下、以及信号传递 障碍有关 药物/疫苗效果的评价：肿瘤生物治疗的时机选择、以及效果 的监测
Th1Th2检测Tips

一定要确定T细胞是否已经活化，细胞转运阻滞是否成功，胞 膜打孔是否有效

一定要用胞浆内同型对照（特别是FITC标记时） ，以便分别部分弱表达的细胞因子。
TETRAMER

抗原递呈细胞（APC）携带抗原片段通过与TCR复合物结合，在APC和T细 胞的MHC相容和其它共刺激分子的相互作用下激活T细胞并产生细胞免疫效 应。MHC-四聚体染色技术用于抗原特异性T细胞分析的原理在于体外模仿上 述抗原递呈的过程来实现对特异性T细胞的鉴定，通过流式细胞仪这种高通 量分析仪器对标本中这群细胞进行分析 四聚体技术的优势是：可以对特异性免疫细胞进行定量；用流式细胞仪检测 可以快速测定大量细胞，可以同时进行其它表面染色，可以直接用外周血测 定而不需要培养；四聚体染色不会杀伤细胞，因此染色后的细胞可以进行分 选或其它功能分析；四聚体对所有的特异性T细胞都能够结合，而不仅仅是 对有功能的细胞进行检测。
Normal Cell Cycle
G2 M
G1 G0
DNA Analysis
s
C o u n t
G0G1
s
0 200 400 600
G2 M
800 1000
4N 2N DNA content
1. 2. 3. 4.
肿瘤的早期诊断。 肿瘤的良恶性判断。 观察细胞的增殖状态及周期分布。 疗效监测
细胞功能分析
应用分类
1、膜表面抗原和胞浆内蛋白分析 2、DNA含量及细胞周期分析 3、定量分析 4、细胞功能分析 5、凋亡研究 6、细胞间相互左右 7、细胞分选
1.检测淋巴细胞亚群，监测细胞免疫状态
2.白血病/淋巴瘤免疫分型 3.HLA组织配型及HLA与某些疾病的关系
4.干祖细胞的定量及成分分析.
5.其它:粘附分子;TCR多态性检测;肿瘤癌基因及
CD4CD25 Treg



调控性T细胞的主要功能是抑制机体免疫功能，太强则免 疫耐受，太弱会引起自身免疫反应 调控性T细胞调节抗原递呈细胞对抗原的递呈 调控性T细胞的表型是CD4+CD25bright，逐渐发现越来 越多的其它分子可能能够更精确限定（eg.FOX-1?) CD25也是免疫细胞晚期活化的标记，但表达的平均荧光 强度不足够强
免疫状态评价： 移植、放化疗等.
DNA含量及细胞周期分析
细胞周期分析:在细胞周期(G0，G1，S， G2 ，M)的各个时期，DNA的含量随各时相呈现 出周期性的变化。通过核酸染料标记DNA，并 由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时 期的分布状态，计算出G0/G1%，S%及G2/M%。 了解细胞的周期分布及细胞的增殖活性。也可 利用细胞周期蛋白（CYCLIN）、Ki67、核增殖 抗原（PCNA）等，对细胞周期进行精确的分期： G0、G1、S、G2、M.


不同厂家的MHC四聚体产品不太一样：贝克曼库尔特公司创造性地 构建和表达了MHC分子α3链的区域突变的蛋白（iTAg），能降低其 与非特异性T细胞结合，大大提高了特异性。并且将MHC四聚体直接 标记荧光，和常用的抗原多肽负载后整体商品化，也有单独的MHC 分子（iTAg）单独出售，极大方便了研究者
1.吞噬功能试验 2.氧爆发试验 3.根据T淋巴细胞分泌细胞因子的不同将CD4+或 CD8+分为介导细胞免疫的I型细胞和介导体液 免疫的II型细胞. 4.药物泵的功能检测 5.NK细胞的肿瘤杀伤活性检测 6.血小板的粘附,聚集功能检测
树突状细胞分析（Dendritic Cells,DC)
DC是主要的抗原递呈细胞，同时又是重要的先 天免疫细胞，还是具有免疫调控功能的一个细胞 群，没有发现特异性的抗原标记 DC研究的主要内容包括直接分析计数、体外诱 导检测,一般分为两群－PDC,MDC 当前DC检测的方法： 1）Lin-,CD11c,CD123,同时可能表达 CD80,CD86,CD83,DR等 2）利用BDCA1,2,3,4对外周血或其它组织DC进行 分析 3）CD14+16/CD85/CD33,CD14+16/CD85/CD123
根据产生的细胞因子的类 型和生物学功能,人的ＣＤ4+Ｔ 细胞可以分为Ｔｈ1、Ｔｈ2 Ｔｈ1细胞产生ＩＬ 2、ＩＬ 12、ＩＦＮ γ、ＴＮＦ β等细 胞因子,主要参与细胞介导的免 疫反应、迟发性过敏反应,并在 清除病毒等细胞内致病因子方 面起着重要作用 Ｔｈ2细胞分泌ＩＬ 4、ＩＬ 5 、ＩＬ 6、ＩＬ 10、ＩＬ 13 等细胞因子,主要促进体液免疫 反应,中和胞外病原体 相应地，CD8+T细胞也可以分 为Tc1和Tc2
降低
降低
降低
CD4细胞绝对计数



对AIDS病人的诊断、疗效和预后有重要的指导意 义，一般认为CUTOFF值为200/ul. 绝对计数是加入浓度已知的标准微球与标本一起 测定，流式细胞仪控制软件在设置后能自动计算 出浓度 对任何细胞群体都可以进行绝对计数
Th1Th2细胞因子分泌细胞测定




Th1细胞：介导细胞免疫、细 胞毒性T细胞的生长和活化 、巨噬细胞的活化、介导 迟发型过敏反应。其功能 亢进将导致炎症慢性迁延 ，器官特异性自身免疫病 ，急性排异反应和接触性 皮炎等的发病和免疫病理 损伤。 Th2细胞 ：介导体液免疫，促 进B细胞的生长、活化和分 化，是IgG1和IgE类抗体的 转换因子，其功能亢进将 导致特异性过敏反应，参 与高IgE综合症和嗜酸性粒 细胞增多症。
百度文库
T细胞分析

相对计数－淋巴细胞亚群数量检查项目和意义
疾病 自身免疫病 AIDS SARS 慢性活动性肝炎、 肝硬化 肿瘤 降低 降低 降低 CD3 CD4 降低 严重 降低 降低 降低 CD8 增高 增高 降低 正常 或 增高 增高 CD4/CD8 降低 降低 降低 降低 降低 降低 NK 降低