1糖的呈色反应和定性鉴定
生物化学实验
⽣物化学实验实验⼀1、糖类的颜⾊反应1. α-萘酚反应糖在浓⽆机酸（硫酸或盐酸）作⽤下，脱⽔⽣成糠醛及糠醛衍⽣物，后者能与α-萘酚⽣成紫红⾊物质。
注意：因糠醛及糠醛衍⽣物对此反应均呈阳性，不是糖类的特异反应。
2. 间苯⼆酚反应在酸作⽤下，酮糖脱⽔⽣成羟甲基糠醛，后者再与间苯⼆酚作⽤⽣成红⾊物质。
此反应是酮糖的特异反应。
因为醛糖在同样条件下呈⾊反应缓慢，只有在糖浓度较⾼或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。
2、还原作⽤许多糖类由于其分⼦中含有⾃由的或潜在的醛基或酮基，因此在碱性溶液中能将铜、铁、银等⾦属离⼦还原，同时糖类本⾝被氧化成糖酸及其他产物。
糖类这种性质常被利⽤于检测糖的还原性及还原糖的定量测定。
本实验所⽤的试剂为斐林试剂和本尼迪克特试剂。
它们都是Cu2＋的碱性溶液，能使还原糖氧化⽽本⾝被还原成红⾊（颗粒⼤）或黄⾊（颗粒⼩）的Cu2O沉淀。
实验⼆脂肪碘值的测定碘值（价）是指100g脂肪在⼀定条件下吸收碘的克数。
碘值是鉴别脂肪的⼀个重要常数，可⽤以判断脂肪所含脂肪酸的不饱和程度。
脂肪中常含有不饱和脂肪酸，不饱和脂肪酸具有⼀个或多个双键，能与卤素起加成作⽤⽽吸收卤素。
常⽤碘与脂肪中不饱和脂肪酸的双键起加成作⽤。
脂肪的不饱和程度越⾼，所含的不饱和脂肪酸越多，与其双键起加成作⽤的碘量就越多，碘值就越⾼。
故可⽤碘值表⽰脂肪的不饱和度。
I2+－CH=CH－－CHI－CHI－本实验⽤溴化碘(Hanus试剂)代替碘。
⽤⼀定量(必须过量)溴化碘和待测的脂肪作⽤后，⽤硫代硫酸钠滴定的⽅法测定溴化碘的剩余量，然后计算出待测脂肪吸收的碘量，求得脂肪的碘值。
加成作⽤：IBr+－CH=CH－－CHI－CHBr－剩余溴化碘中碘的释放：IBr + KI KBr + I2再⽤硫代硫酸钠滴定释放出来的碘：I2 +2Na2S2O3 2Na2S4O6+2NaI思考题：何谓空⽩溶液和空⽩实验？空⽩实验有何意义？在各种分析⽅法中，为消除⼲扰，⽤与测定试样时完全⼀致的条件进⾏测定的溶液。
糖的核磁共振性质
HO
+10.6
HO
O S +0.2
OH OH
O R
+7.6
OH HO
HO
-4.4 +6.0
O S -0.3
OH OH
OH HO
S O +3.3
-4.7 +6.8
O R -0.6 O
R
+3.4
OH
23
3.酯苷、酚苷的苷化位移规律： 苷化位移值较特殊，端基碳与羰基
碳（即苷元α-碳）均向高场方向位移， β-C向低场方向位移。
※ 电压：30-50V/cm
※ 时间： 30-120min ※ 显色剂：p-甲氧基苯胺-硫酸。 ※ 注意：必须使用冷却系统，将温度维持在
0℃,以免烧坏支持体。 ※ 本法常用 2.超离心法 ※ 原理：由于微粒在离心力场中移动的速度 与微粒的密度、大小与形状有关，故将多糖
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溶液进行密度梯度超离心时，如果是组成均一 的多糖，则应呈现单峰。 ※ 具体做法:
2、多糖纯品实质上是一定分子量范围的均 一组分。
3.多糖纯度常用的测定方法
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（一）纯度测定方法 1.高压电泳法 ※ 原理：由于中性多糖导电性差、分子量大 在电场中的移动速度慢，常将其制成硼酸络合 物进行高压电泳。 ※ 电泳支持体：玻璃纤维丝、纯丝绸布等。 ※ 缓冲液：pH=9-12的硼砂溶液。
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β-D-甘露吡喃甲苷 13C1=104.5ppm
27
② 如果苷元为链状结构，则糖端基碳的苷化 位移值随着苷元为伯、仲、叔基而递减。
例如: 与糖的甲苷化学位移比较，苷元 分别为伯、仲、叔基时，糖端基碳的苷化 位移值的变化情况如下，
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O O CH2 CH3
高中生物常见试剂及变色反应
高中生物常见试剂及变色反应高中生物常见试剂大全1.斐林试剂：成分：0.1g/ml NaOH(甲液)和0.05g/ml CuSO4(乙液)。
用法：将斐林试剂甲液和乙液混合，再将混合后的斐林试剂倒入待测液，水浴加热，如待测液中存在还原糖，则呈砖红色。
2.班氏糖定性试剂：为蓝色溶液。
和葡萄糖混合后沸水浴会出现砖红色沉淀。
用于尿糖的测定。
3.双缩脲试剂：成分：0.1g/ml NaOH(甲液)和0.01g/ml CuSO4(乙液)。
用法：向待测液中先加入2ml甲液，摇匀，再向其中加入3~4滴乙液，摇匀。
如待测中存在蛋白质，则呈现紫色。
4.苏丹Ⅲ：用法：取苏丹Ⅲ颗粒溶于95%的酒精中，摇匀。
用于检测脂肪。
可将脂肪染成橘黄色(被苏丹Ⅳ染成红色)。
5.二苯胺：用于鉴定DNA。
DNA遇二苯胺(沸水浴)会被染成蓝色。
6.甲基绿：用于鉴定DNA。
DNA遇甲基绿(常温)会被染成蓝绿色。
吡罗红：检测RNA，呈红色7、50%的酒精溶液：用于洗去苏丹Ⅲ在脂肪上的浮色。
8、70%的酒精溶液：用于医学临床上的消毒灭菌。
9、95%的酒精溶液：DNA不溶于酒精，尤其是体积分数为95%的冷冻酒精，而细胞中的某些物质可以溶解于酒精10、15%的盐酸：和95%的酒精溶液等体积混合可用于解离根尖，使细胞分离开来。
“有丝分裂观察”和“低温诱导染色体加倍”中15％盐酸能够使洋葱细胞的细胞壁软化,并使细胞间的中胶层物质溶解,从而达到分离细胞的目的。
洗去卡诺氏液8％盐酸：（1）盐酸能改变细胞膜的通透性,加速染色剂的跨膜运输；（2）盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离,便于DNA与染色剂的结合11. 龙胆紫溶液或醋酸洋红：碱性染料，用于染色体染色时，前者呈深蓝色，后者呈红色改良苯酚品红染液：检测染色体，红色健那绿：检测线粒体，专一性让线粒体染色呈蓝绿色12.20%的肝脏、3%的过氧化氢、3.5%的氯化铁：用于比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率。
（新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶）13、3%的可溶性淀粉溶液、3%的蔗糖溶液、2%的新鲜淀粉酶溶液：用于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用实验。
第二章 糖类的化学
第三节 寡糖的结构和性质
第一节 概 述
2.命名
(1) 单糖:依据来源命名：如葡萄糖曾是从葡萄中提取出来的， 果糖在水果中含量较高，所以分别称为葡萄糖和果糖。 根据单糖分子中含有的碳原子数命名：丙糖、丁糖 、戊糖、 己糖等。如上面提到的核糖、脱氧核糖均含5个碳原子，故 称为戊糖，而葡萄糖、果糖、半乳糖则是含6个碳原子的己 糖。 依据糖分子中的羰基位置不同命名：醛糖和酮糖，例如葡萄 糖和果糖虽然都是己糖，但前者羰基位于分子末端，相当于 醛的衍生物，把它称为己醛糖；后者的羰基位于2-C位，相 当于酮的衍生物，把它称为己酮糖。 (2) 寡糖的命名： 依据碳原子数分别称为二糖、三糖、四糖等 依据来源名称，如蔗糖、麦芽糖等。
三、环糊精
1.结构——环糊精为含有6-8个葡萄糖基的环状寡糖具有一定的抗 酸、碱和酶的作用，容易同一些小分子或离子形成包含络合物等 特点。
2.用途——环糊精在工业上有广泛用途 环糊精因其特殊的分子结构和上述的特殊性质，常作为 稳定剂、乳化剂、增溶剂、抗氧化剂等，广泛用于食品、 医药、轻工及农业化工等方面。
二、寡糖的性质
1.旋光性和变旋性——寡糖都有旋光性，个别 没有变旋性 寡糖分子中都存在不对称碳原子，因而都有 旋光性。例如蔗糖具右旋性，比旋光度为 +66.5°；麦芽糖和乳糖也都具有各自的比旋 光度。但并非所有寡糖都有变旋性，蔗糖由 分子中不存在半缩醛羟基，所以不具有变旋 性；麦芽糖和乳糖保留有半缩醛羟基，因而 具变旋性。
第二节
单糖的结构和性质
四碳糖由于具有2个不对称碳原子，其分子结构就可能有4种 (22)不同的排布方式， 因此具有4个对映异构体,依此类推， 凡分子中含 n 个不对称碳原子的，就有2n个旋光异构体.
(整理)实验一糖和蛋白质的理化性质检验
实验一糖和蛋白质的理化性质检验（4学时）第一部分蛋白质的理化性质第一节蛋白质的颜色反应一、实验目的掌握鉴定蛋白质的原理和方法。
二、实验原理蛋白质分子中的某种或某些基团与显色剂作用，可产生特定的颜色反应，不同蛋白质所含氨基酸不完全相同，颜色反应亦不同。
颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质亦可产生相同颜色反应，因此不能仅根据颜色反应的结果决定被测物是否是蛋白质。
颜色反应是一些常用的蛋白质定量测定的依据。
三、实验器材与试剂实验器材1. 鸡蛋1个2. 吸管1.0mL（×1）3. 试管１.5cm×15cm（×2）4. 试管架5. 试管夹2个6. PH试纸（5-7）7. 水浴锅实验试剂1. 卵清蛋白液：将鸡（鸭）蛋白用蒸馏水稀释20-40倍，离心，上清液冷藏备用。
2.1%茚三酮溶液：1g茚三酮溶于95%乙醇并稀释至100mL。
3. 浓硝酸：比重1.42。
4. 10%NaOH溶液：10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100mL。
四、实验方法A. 黄色反应蛋白质分子中含有苯环结构的氨基酸（如酪氨酸、色氨酸等）。
遇硝酸可硝化成黄色物质，此物质在碱性环境中变为橘黄色的硝苯衍生物（苯及苯丙氨酸较难硝化，需用浓硫酸促进之。
反应如下：操作方法：于一试管内，置蛋白质溶液10滴及浓硝酸5滴，加热，冷却后再加10％NaOH溶液20滴，观察颜色变化。
B. 茚三酮反应蛋白质与茚三酮共热，则产生蓝紫色的还原茚三酮、茚三酮和氨的缩合物。
此反应为一切蛋白质及ａ-氨基酸所共有。
含有氨基的其他物质亦呈此反应。
亚氨基酸（脯氨酸和羟脯氨酸）与茚三酮反应呈黄色。
操作方法：取1mL蛋白质溶液置于试管中，加3-5滴茚三酮试剂，加热至沸，即有蓝紫色出现。
注意：此反应必须在pH5－7进行。
C.双缩脲反应（参考实验）将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而形成双缩脲。
双缩脲在碱性环境中，能与硫酸铜结合成红紫色的络合物，此反应称为双缩脲反应。
1糖的呈色反应和还原糖的检验(讲稿)
糖的呈色反应和还原糖的检验（讲稿）本次实验目的是了解鉴定糖和还原糖的原理以及方法，并通过实验操作予以验证。
2人一组，前1-18组1个实验室。
二、实验原理。
糖的鉴定：糖经浓无机酸处理，脱水产生糠醛或糠醛衍生物。
戊糖形成糠醛，己糖则形成羟甲基糠醛。
这些糠醛和糖醛衍生物在浓无机酸作用下，能与酚类化合物缩合生成有色物质。
与一元酚如α-萘酚作用，形成三芳香环甲基有色物质。
与多元酚如间苯二酚作用，则形成氧杂蒽有色物质。
通常使用的无机酸为硫酸。
如用盐酸，则必须加热。
常用的酚类为α-萘酚、甲基苯二酚、间苯二酚和间苯三酚等，有时也用芳香胺、胆酸、某些吲哚衍生物和一些嘧啶类化合物等。
还原糖和非还原糖的鉴别：含有自由醛基(-CHO)或酮基(>C=O)的单糖和二糖为还原糖。
在碱性溶液中，还原糖能将金属离子(铜、铋、汞、银等)还原，糖本身被氧化成酸类化合物，此性质常用于检验糖的还原性，并且常成为测定还原糖含量的各种方法的依据。
三、实验内容本次实验一共采用了6种糖液作为测试糖液，2％葡萄糖，果糖，麦芽糖，蔗糖，1％淀粉溶液和1种未知糖液，每种糖液均有专门的移液管移取（贴有标签，有些实验可能只需加几滴，可以在移液管头部套上胶头滴加），不要弄混，所有试剂都有相应的移液管移取（大概4个组公用1套），用后请放回原位，方便别的同学使用。
实验包括2个部分，共7个实验。
（一）糖的呈色反应1．Molish反应(α-萘酚反应)本实验是鉴定糖类最常用的颜色反应。
糖在浓酸作用下形成的糠醛及其衍生物与α-萘酚作用，形成红紫色复合物。
在糖溶液与浓硫酸两液面间出现紫环，因此又称紫环反应。
自由存在和结合存在的糖均呈阳性反应。
此外，各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等皆呈颜色近似的阳性反应。
因此，阴性反应证明没有糖类物质的存在；而阳性反应，则说明有糖存在的可能性，需要进一步通过其他糖的定性试验才能确定有糖的存在。
步骤：取6支已标号的试管，分别加入各种测试糖液lmL(约15滴)，再各加入Molish 试剂2滴，摇匀。
生物化学实验指南
实验一糖的呈色反应和定性鉴定目的要求(1) 学习鉴定糖类及区分酮糖和醛糖的方法。
(2) 了解鉴定还原糖的方法及其原理。
Ⅰ. Molish反应——α-萘酚反应实验原理糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下脱水形成糠醛及其衍生物与α-萘酚作用形成紫红色复合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环，因此又称紫环反应。
自由存在和结合存在的糖均呈阳性反应。
此外，各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸以及丙酮、甲酸和乳酸均呈颜色近似的阳性反应。
因此，阴性反应证明没有糖类物质的存在；而阳性反应，则说明有糖存在的可能性，需要进一步通过其他糖的定性试验才能确定有糖的存在。
试剂Molish试剂：取5g α-萘酚用95%乙醇溶解至100mL，临用前配制，棕色瓶保存。
1%葡萄糖溶液；1%蔗糖溶液；1%淀粉溶液。
操作方法取试管，编号，分别加入各待测糖溶液1 mL，然后加两滴Molish试剂，摇匀。
倾斜试管，沿管壁小心加入约1mL浓硫酸，切勿摇动，小心竖直后仔细观察两层液面交界处的颜色变化。
用水代替糖溶液，重复一遍，观察结果。
Ⅱ. 蒽酮反应实验原理糖经浓酸作用后生成的糠醛及其衍生物与蒽酮（10-酮-9，10-二氢蒽）作用生成蓝绿色复合物。
试剂蒽酮试剂：取0.2g 蒽酮溶于100mL 浓硫酸中，当日配制。
待测糖溶液，同Molish试验。
操作方法取试管，编号，均加入1mL蒽酮溶液，再向各管滴加2 ~ 3滴待测糖溶液，充分混匀，观察各管颜色变化并记录。
Ⅲ. 酮糖的Seliwanoff反应实验原理该反应是鉴定酮糖的特殊反应。
酮糖在酸的作用下较醛糖更易生成羟甲基糠醛。
后者与间苯二酚作用生成鲜红色复合物，反应仅需20-30秒。
醛糖在浓度较高时或长时间煮沸，才产生微弱的阳性反应。
试剂Sediwanoff试剂：0.5g 间苯二酚溶于1升盐酸（H2O∶HCl=2∶1）(V/V)中，临用前配制。
1%葡萄糖；1%蔗糖；1%果糖。
操作方法取试管，编号，各加入Sediwanoff试剂1mL，再依次分别加入待测糖溶液各4滴，混匀，同时放入沸水浴中，比较各管颜色的变化过程。
生物化学实验ppt-new全
淀粉在酸催化下加热，逐渐水解成分子较小的糖，最后水解 成葡萄糖，其过程如下：淀粉--各种糊精—麦芽糖—葡萄糖。淀 粉完全水解后，失去与碘的作用，同时出现单糖的还原性。
五、操作
1、RNA的提取 称取5g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%NaOH溶
液30ml，沸水浴加热30min，经常搅拌。冷却，加入乙酸 数滴，使提取液呈酸性（PH5-6，用试纸试之），离心1015min（1000r/min）,取上清液，加入两倍体积的95%乙醇， 边加边搅拌。加毕，静置，待完全沉淀，离心5min （1000r/min），取沉淀物，沉淀物即为粗RNA，可作鉴 定和测定含量用。 2、鉴定
试剂
管号 0 1
2
4
6
2mg/ml卵清蛋白质/ml
0.0 0.3 0.6 1.2
1.8
蒸馏水/ml
3.0 2.7 2.4 1.8
1.2
双缩脲试剂/ml
2.0 2.0 2.0 2.0
2.0
充分混合，在540nm比色
蛋白质浓度/(mg/ml)
0.0 0.2 0.4 0.8
1.2
A540nm
需于显色后30min比色测定，30min后可能有雾状沉淀产生。各管由显色到比色的时间应尽 可能一致。
一、目的 掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。
二、原理 酵母核酸中RNA含量较多，DNA则少于2%。
RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使 其沉淀，由此即可得到粗RNA制品。
用碱液提取的RNA有不同程度的降解。
实验一糖类的颜色反应(最新整理)
3.水浴锅
四、试剂
1.莫氏（Molisch）试剂： 5% α-萘酚的酒精溶液，称取 α-萘酚 5g，溶于 95%酒精中，
并用此酒精使总体积达 100mL，贮于棕色瓶内。此试剂需新鲜配制。
2.塞氏（Seliwanoff）试剂：称取间苯二酚 0.05g 溶于 30 mL 浓盐酸中，再用蒸馏水稀释
至 100 mL，此试剂需新鲜配制。
1．试管及试管架 2．竹试管夹 3．水浴锅 4．电炉 四、试剂 1．斐林（Fehling）试剂 菲林甲液（硫酸酮溶液）：称取 34.5g 硫酸铜（CuSO4·5H2O）溶于 500mL 蒸馏水中。 菲林乙液（碱性酒石酸盐溶液）：称取 125g 氢氧化钠和 137g 洒石酸钾钠溶于 500 mL 蒸馏水中。 为了避免变质，甲、乙二液分开保存。用前，将甲、乙二液等量混合即可。 2．本尼迪克特（Benedict）试剂 称取柠檬酸钠 173g 及碳酸钠（Na2CO3·H2O）100 g 加入 600mL 蒸馏水中，加热使其溶
注意事项：硫酸铜不能多加，否则将产生蓝色的 Cu(OH)2。此外在碱溶液中氨或铵盐与 铜盐作用生成深蓝色的络离子 Cu(NH3)42+，妨碍此颜色反应的观察。
2.蛋白质的黄色反应 在一试管内，加蛋白质溶液 10 滴及浓硝酸 3～4 滴，加热，冷却后再加 10%NaOH 溶 液 5 滴，观察颜色反应。 3.米伦氏反应 ① 用苯酚做实验：取 0.5%苯酚溶液 1mL 于试管中，加米伦试剂约 0.5mL(米伦试剂含 有硝酸，如加入量过多，能使蛋白质呈黄色，加入量不超过试液体积的 1/5～1/4)，小心加热， 溶液即出现玫瑰红色。 ② 用蛋白质溶液做实验：取 2mL 蛋白质溶液，加 0.5mL 米伦试剂，此时出现蛋白质 的沉淀(因试剂含汞盐及硝酸之故)，小心加热，凝固之蛋白质出现红色。 注意事项：蛋白质溶液中如含有大量无机盐，可与汞产生沉淀从而丧失试剂的作用，如 此试剂不能测定尿中的蛋白质。另外试液中还不能含有 H2O2、醇或碱，因它们能使试剂中 的汞变成氧化汞沉淀。遇碱必须先中和，但不能用盐酸中和。 4.茚三酮反应 取 1mL 蛋白质溶液置于试管中，加 2 滴茚三酮试剂，加热至沸，即有蓝紫色出现(注意： 此反应必须在 pH5～7 进行)。 六、思考题 1. 氨基酸与蛋白质具有哪些共同的颜色反应？说明原因。 2. 蛋白质除了可以实验中的这些颜色反应外，你还知道哪些蛋白质的颜色反应？
《生物化学实验》教学大纲
《生物化学实验》教学大纲一．实验目的二．实验内容三．实验学时安排四．考试方法五．参考教材一．实验目的生物化学是一门实验性学科，其所有知识均来自于实验。
本课程着眼于学生学习和掌握生物化学课程的基本理论、基本知识以及实验技能，培养学生具有初步分析问题和解决问题的能力。
生物化学实验课通过学习滴定、比色、纸层析、电泳、生化制备等基本实验技术，分析研究糖、脂、蛋白质、核酸、酶、维生素等生化物质及某些代谢过程，培养学生具有初步的科学实验能力及严格的科学作风，同时验证生物化学的某些基本理论知识，加深感性认识，并锻炼初步的综合实验能力。
返回顶部二．实验内容•实验一糖的呈色反应及还原糖的检验一．实验目的学习鉴定糖类及区分酮糖和醛糖的方法；了解鉴定还原糖的方法及其原理。
二．实验内容Molish反应、蒽酮反应、Seliwanoff反应、Bial反应、Fehling 反应。
三.实验过程1.呈色反应（1） Molish 反应（2）蒽酮反应（3） Seliwanoff反应（4） Bial反应2.还原糖的检验（1） Fehling反应（2） Benedict反应（3） Barfoed反应四.作业与思考1.列表总结和比较本实验7种颜色反应的原理及其应用.2.应用Molish反应和Seliwanoff反应分析未知样品时，应注意些什么问题？3.举例说明那些糖属于还原糖.•实验二脂类组成对脂类单分子层通透性的影响一、实验目的学习制作脂类单分子层和鉴定它的原理及方法，比较不同脂类所形成的脂类单分子层通透性的差异。
二、实验内容以脂类单分子层作为模式膜，用甲烯蓝为指示剂，观察不同脂类单分子层通透性的影响。
三.实验过程1.溶液准备2.分光光度计测样四.作业与思考1.试述生物膜的基本结构与功能2.解释下列名词：双亲媒性分子、脂类单分子层、磷脂双分子层、膜的内在蛋白质和外在蛋白质.•实验三蛋白质浓度的测定（1）——Folin-酚法一、实验目的学习Folin-酚法的原理及方法，制备标准曲线，测定未知样品中蛋白质含量。
高中生物颜色反应知识点总结
高中生物颜色反应知识点总结一、细胞中的颜色反应概述在高中生物实验中，颜色反应是一种常用的观察和区分细胞内不同化学物质的方法。
通过特定的染色剂与细胞内的物质发生反应，可以产生不同颜色的变化，从而帮助我们识别和了解细胞的结构和功能。
二、核酸的颜色反应1. 甲基绿-吡罗红染色法- 原理：甲基绿与DNA结合呈现蓝绿色，吡罗红与RNA结合呈现红色。
- 应用：用于区分细胞核和细胞质中的DNA和RNA。
2. 瑞氏染色法- 原理：利用瑞氏染料与核酸的亲和力不同，使得DNA和RNA呈现不同的颜色。
- 应用：常用于观察细菌和病毒的核酸分布。
三、蛋白质的颜色反应1. 比氏试剂法- 原理：比氏试剂（含铜离子的碱性溶液）与蛋白质反应生成紫色复合物。
- 应用：用于检测和定量蛋白质。
2. 布拉德福德法- 原理：布拉德福德染料与蛋白质中的芳香族氨基酸反应，产生颜色变化。
- 应用：用于蛋白质浓度的测定。
四、糖类的颜色反应1. 安托诺夫试剂法- 原理：安托诺夫试剂与多糖反应，生成黄色至红色不等的沉淀。
- 应用：用于检测多糖。
2. 费林（Fehling）试剂法- 原理：费林试剂与还原糖在加热条件下反应，生成砖红色沉淀。
- 应用：用于检测还原糖。
五、脂类的颜色反应1. 苏丹III或苏丹IV染色法- 原理：苏丹染料与脂肪反应，生成橘黄色或红色的脂肪颗粒。
- 应用：用于检测细胞内的脂肪。
2. 脂溶性色素法- 原理：某些脂溶性色素可以与类固醇等脂类物质结合，产生特定颜色。
- 应用：用于观察和鉴定类固醇激素等脂类物质。
六、酶的颜色反应1. 酶底物法- 原理：特定酶作用于含有显色团的底物，产生颜色变化。
- 应用：用于酶活性的定性和定量分析。
2. 酶联免疫吸附法（ELISA）- 原理：利用抗体与抗原特异性结合，通过显色底物产生颜色变化来检测抗原。
- 应用：广泛应用于免疫学检测。
七、结语颜色反应在高中生物实验中占有重要地位，通过上述各种颜色反应的学习和掌握，学生可以更好地理解生物体内各种化学物质的存在和作用，为进一步的生物学学习和研究打下坚实的基础。
生物化学 第一章 糖类化学1
可溶性氧化铜络合物 COOH NaOH HOCH 2 HOCH COOK COONa + (CHOH)4 + Cu2O ↓ CH2OH 葡萄糖酸
红黄色
33
用于还原糖检测
温和氧化剂：Br2－H2O
COOH
Br2－H2O
强氧化剂：HNO3
COOH
HNO3
CHO (CHOH)n CH2OH
(CHOH)n CH2OH
(CHOH)n COOH
糖酸
醛糖
（生物体内）
糖二酸
CHO (CHOH)n COOH
糖醛酸
请注意：糖酸和糖醛酸的不同，前者是醛基被氧化成 羧基，后者是伯醇被氧化成羧基。 34
温和弱氧化剂溴水不能使酮糖氧化； 在强氧化剂下，酮糖羰基处断裂，生成两种酸。
C OOH
CH2OH C O
[O]
(CHOH)n CH2OH
3. 溶解度
单糖易溶于水（除甘油醛微溶），微溶于乙醇，不溶于乙
醚、丙酮等非极性有机溶剂。
32
化学性质
1.糖被氧化—单糖具有还原性
弱氧化剂：含重金属离子（Cu2+、Ag+、Hg2+的碱性溶 液。
Fehling试剂：CuSO4、NaOH、酒石酸钾钠 Benedict试剂：CuSO4、Na2CO3、柠檬酸钠
食品工业中可作饮料糕点糖果的稳定剂增稠剂增量食品工业中可作饮料糕点糖果的稳定剂增稠剂增量交联葡聚糖凝胶的化学结构分子筛生化分析和分子筛生化分析和分离制备的常用技术材分离制备的常用技术材葡聚糖凝胶离子交换葡聚糖凝胶离子交换交联葡聚糖交联葡聚糖sephadexsephadex以1氯23环氧丙烷为交联剂六六半纤维素半纤维素hemocellulosehemocellulose半纤维素是植物细胞壁中非纤维素非果胶的一类多糖物质易溶于碱它是几种物质的混合物
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生物化学实验指导电子版实验一糖类的颜色反应 (3)实验二糖类的还原作用 (4)实验三蛋白质的颜色反应 (6)实验四蛋白质的沉淀反应 (9)实验五蛋白质等电点测定 (11)实验六酪蛋白的制备——等电点沉淀法 (12)实验七氨基酸的纸层析 (14)实验八电泳技术——纸电泳分离氨基酸 (16)实验九酶的催化特性 (20)实验十糖化酶活力测定 (23)实验十一从酵母提取核糖核酸——稀碱法 (25)实验十二从酵母提取核糖核酸——浓盐法 (26)实验十三小麦萌发前后淀粉酶活力的比较 (28)实验十四醋酸纤维薄膜电泳 (29)实验一糖类的颜色反应一、实验目的1．了解糖类某些颜色反应的原理。
2．学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法。
二、实验原理1.α-萘酚反应（Molisch反应）原理糖在浓无机酸（硫酸、盐酸）作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后者能与α-萘酚生成紫红色物质。
因为糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性，故此反应不是糖类的特异反应。
2.间苯二酚反应（Seliwanoff反应）原理在酸作用下，酮糖脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。
此反应是酮糖的特异反应。
醛糖在同样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。
在实验条件下蔗糖有可能水解而呈阳性反应。
三、器材1.试管及试管架2.滴管3.水浴锅四、试剂1.莫氏（Molisch）试剂：5% α-萘酚的酒精溶液，称取α-萘酚5g，溶于95%酒精中，并用此酒精使总体积达100mL，贮于棕色瓶内。
此试剂需新鲜配制。
2.塞氏（Seliwanoff）试剂：称取间苯二酚0.05g溶于30 mL浓盐酸中，再用蒸馏水稀释至100 mL，此试剂需新鲜配制。
3.1%葡萄糖溶液：称取葡萄糖1g，溶于100mL蒸馏水中。
4.1%果糖溶液：称取果糖1g，溶于100mL蒸馏水中。
5.1%蔗糖溶液：称取蔗糖1g，溶于100mL蒸馏水中。
6.1%淀粉溶液：称取可溶性淀粉1g与少量冷蒸馏水混合成薄浆状物，然后缓缓倾入沸蒸馏水中，边加边搅，最后以沸蒸馏水稀释至100mL。
中国药科大学天然药物化学显色反应整理
中国药科大学《天然药物化学》显色反应整理(1)Vitali反应紫色(2)DDL反应黄色（3）沉淀反应书本P155糖Molish反应（试剂：浓硫酸，α-萘酚。
常用色谱显色剂：邻苯二甲酸和苯胺）糠醛衍生物和许多芳胺、酚类及具有活性次甲基的基团化合物缩合成有色的化合物香豆素：（1）异羟肟酸铁反应--------内酯的显色反应碱性条件下，香豆素内酯开环，并与盐酸羟胺缩合成异羟肟酸，再在酸性条件下与三价铁离子络合成盐而显红色。
（2）与酚类试剂的反应具有酚羟基，可与FeCl3试剂产生颜色反应；若酚羟基的对位未被取代，或6-位上没有取代，其内酯环碱化开环后，可与Gibb’s试剂、Emerson试剂反应。
机制如下：Gibb’s反应：符合以上条件的香豆素乙醇溶液在弱碱条件下，2,6-二氯(溴）醌氯亚胺试剂与酚羟基对位活泼氢缩合成蓝色化合物。
Emerson反应：符合以上条件的香豆素的碱性溶液中，加入2%的4-氨替比林和8%的铁氰化钾试剂与酚羟基对位活泼氢缩合成红色化合物。
醌类颜色反应:取决于其氧化还原性质以及分子中的酚羟基的性质。
（1）Feigl反应----醌的通性，所有具醌核的化合物均可反应。
（方法、机理：见书312页）醌类化合物在碱性条件下，经加热能迅速与醛类及邻二硝基苯反应，生成紫色化合物（2）无色亚甲蓝显色试验----可区别蒽醌与苯醌萘醌苯醌和萘醌因醌核上有活泼质子，可反应，而蒽醌无。
无色亚甲基蓝溶液，样品在白色背景上作为蓝色斑点出现。
（3）与碱的反应(Bornträger反应----可区别含羟基的蒽醌与蒽酚衍生物反应、机理、应用：见书313页。
羟基醌类在碱性溶液中发生颜色变化，会使颜色加深。
多呈橙、红、紫红色及蓝色。
例如羟基蒽醌类遇碱显红~紫红色的反应称Bornträger反应（4）与活性次甲基试剂的反应----可区别蒽醌与苯醌萘醌（Kesting-Craven法）反应、机理、应用：见书313页。
葡萄糖果糖蔗糖鉴别化学方法
葡萄糖果糖蔗糖鉴别化学方法摘要：一、引言二、葡萄糖果糖蔗糖的鉴别方法1.外观鉴别2.化学性质鉴别3.光谱鉴别三、实验操作步骤1.样品处理2.试剂准备3.实验操作四、结果分析与讨论1.结果分析2.鉴别方法的优缺点3.影响因素探讨五、结论正文：一、引言葡萄糖果糖蔗糖是日常生活中常见的糖类，它们在食品工业和生活中具有广泛的应用。
这三种糖类在外观上相似，容易混淆。
因此，研究一种快速、准确地鉴别葡萄糖果糖蔗糖的方法具有重要意义。
本文将介绍一种基于化学方法的葡萄糖果糖蔗糖鉴别方法，并探讨实验操作的步骤、结果分析及影响因素等。
二、葡萄糖果糖蔗糖的鉴别方法1.外观鉴别葡萄糖果糖蔗糖外观上相似，但通过观察晶体形状、颜色、颗粒大小等特征，仍可初步区分。
葡萄糖果糖呈颗粒状，颜色较浅，颗粒较小；蔗糖呈长柱状，颜色较深，颗粒较大。
2.化学性质鉴别（1）试剂：新制的氢氧化铜溶液、酚酞指示剂。
（2）操作：分别取样，加入氢氧化铜溶液，加热，观察现象。
再加入酚酞指示剂，观察颜色变化。
（3）结果：葡萄糖果糖和蔗糖在与氢氧化铜溶液反应时，溶液呈蓝色；而果糖无明显现象。
加入酚酞指示剂后，葡萄糖果糖呈红色，蔗糖和果糖无明显颜色变化。
3.光谱鉴别采用红外光谱、核磁共振等技术对葡萄糖果糖蔗糖进行光谱分析，根据吸收峰的位置和形状，可明确区分三者。
三、实验操作步骤1.样品处理：分别取葡萄糖果糖、蔗糖、果糖样品，粉碎后过筛，备用。
2.试剂准备：新制的氢氧化铜溶液、酚酞指示剂。
3.实验操作：（1）取样品适量，加入氢氧化铜溶液，加热，观察现象。
（2）将步骤1中的溶液加入酚酞指示剂，观察颜色变化。
四、结果分析与讨论1.结果分析：通过实验观察，葡萄糖果糖与蔗糖在氢氧化铜溶液反应时呈蓝色，而果糖无明显现象；加入酚酞指示剂后，葡萄糖果糖呈红色，蔗糖和果糖无明显颜色变化。
2.鉴别方法的优缺点：本方法操作简便、快速，适用于实验室和现场鉴别。
但需要注意的是，本方法仅适用于葡萄糖果糖蔗糖的初步鉴别，对于混合物的鉴别仍有一定局限性。
单糖的化学性质zy
单糖的构型以甘油醛为参照标准，甘油醛C2为 手性碳，与其相连的-OH在右边的为D型、在 左边的为L型，D型和L型互为立体异构体，是 一对对映体。
单糖（所有的醛糖和酮糖）的构型由于手性碳往往 不止一个，因而规定：离羰基最远的不对称C上的 -OH方向，比照甘油醛的结构，判定糖的构型，在 右边的为D型、在左边的为L型。
OH O O
OH
OH OH
OH
OO
-1, 6-glycosidic bond
OH
OH OH
NH 2
N
N
NN O
OH OH
腺嘌啉核苷
N-glycosidic bond
O
O
甜菊苷
-1, 2-glycosidic bond
糖苷键
糖苷分子中成苷的-C-O-C-氧桥键称为糖苷键。 α-型半缩醛羟基所成的糖苷键，叫做α-糖苷键， β-型半缩醛羟基的糖苷键，叫做β-糖苷键。寡 糖或多糖都是通过各种α-或β-糖苷键连接而成 的糖链。
确定面向观察者的三个取代基按优先性的大小的顺序是顺时针还是 逆时针方向
如果是顺时针方向（右手），则为R构型（R源自拉丁文rectus， 右），如果是逆时针方向，则为S构型（S源自拉丁文sinister， 左）。
构型的RS表示法
手性
分子的实物与其镜像不能重叠的现象
甘油醛及手性碳原子
甘油醛
二羟丙酮
4 糖脎：糖类的苯肼衍生物，不溶于
水，晶体呈黄色
苯腙基
不同还原糖生成的脎，晶体与熔点各不相同，如葡萄 糖脎是黄色细针状，麦芽糖脎是长薄片，因此成脎反 应可用来鉴别多种还原糖
5 形成糖酯与糖醚：单糖的许多化学行为很像简
单的醇，如糖的羟基可以转变成酯基或醚基
单糖的性质解读
▪ 在醛酮一章我们还学过，托伦斯试剂和费林试剂都是较温和的氧 化剂，只能氧化醛，不能氧化酮，常用于鉴别醛的存在。
▪ 但是，比较特殊的是在糖中，无论是醛糖还是酮糖都能被托伦斯 试剂和费林试剂氧化，产生银镜和Cu2O沉淀。
氧化反应
▪ 醛糖能被氧化好理解，因为在水溶液中有开链式存在。
▪ 酮糖为什么也能被氧化呢？因为酮糖是一个－羟基酮，而托伦 斯试剂和费林试剂都是稀碱溶液。
H
PH=3
CH2OH
CH2OH
CH2OH
▪ 就这样，经过一个循环的反应后，得到多一个手性碳的糖，如果 再进行一个循环的反应，又会得到多一个碳的糖，这就是递升反 应。
递降反应
▪ 递降反应就是经过一个反应循环后,分子中减少一个手性碳原子。
CHO H OH
COOH H OH
COO
1 2
Ca
H OH
CHO
▪ 浓HNO3是强氧化剂，不但能氧化醛基，而且还能把C6上的羟甲基 氧化，生成葡萄糖二酸。
▪ 4、HIO4氧化
▪ 在醇一章还学过，具有邻二醇结构的化合物可被HIO4氧化断键。
R CH CH R' HIO4 OH OH
RCHO + R'CHO + HIO3
▪ 醛糖是一个多羟基醛，因此，也能被HIO4氧化（反应见前）。 ▪ 5、托伦斯试剂和费林试剂氧化
还原反应
▪ 由于葡萄糖醇还可以由L－山梨糖还原制得，故葡萄糖醇又叫山 梨糖醇。
CH2OH
O HO H
[H]
H OH
HO H
CH2OH
L－山梨糖
CH2OH
CH2OH
HO H 旋转180度 H OH
HO H
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任课教师： 高志勇 杨明园 陈颖卓
生科院2003室 zygao@
不及格(<60分) 有下列情况者，实验项目成绩评为不及格： 1．不能完成基本的实验操作； 2．实验报告马虎、内容不全、无数据处理过程或 数据处理过程不完整、实验无结论等； 3．抄袭实验报告； 4．未做实验，但模仿指导教师笔迹签字伪造原始 数据的; 5. 无故缺席或者迟到30分钟以上者，不能补做， 该次实验成绩按0分记。
2. 用学到的知识和实验区分和鉴定五种未知 糖溶液。
浓酸
酮糖 + 间苯二酚
鲜红色复合物 1min
(果糖)
∆
浓酸
醛糖 + 间苯二酚
淡黄色复合物 10-20 min
（葡萄糖）
∆
1ml Seliwanoff 试剂 + 200ml 各待测糖 加热
Seliwanoff 反应
鉴定还原糖 4）Fehling试验
5）Benedict试验
还原糖能在碱性溶液中将二价铜离子还原成一价氧化 亚铜（红色沉淀），而糖本身氧化成各种羟酸。非还原糖 则无此特性。 醛糖比较容易被氧化，甚至能被弱氧化剂氧 化成酸，如Fehling试剂和Benedict试剂；而酮糖一般不易 被氧化，只有在长时间或强氧化剂的作用下才被分解。
4. 比较各管的颜色并记录。
2）蒽酮反应 （糖定量）
浓酸
糖 + 蒽酮
蓝绿色复合物
该蓝绿色复合物在630nm有最大的吸收峰，并且在 一定范围内，颜色与糖量的多少成正比。 1) 勿混入沉淀； 2) 不同糖类呈色深浅不同，故仅用于单一糖类的测定。
1ml 蒽酮试剂 + 100ml 各待测糖
蒽酮反应
3）Seliwanoff 反应 （鉴定酮糖）
紫红色复合物
• 各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸、草酸、甘油醛 等均产生近似的颜色反应（假阳性）
• 果糖浓度过高时，由于浓硫酸对它的焦化作用，将呈现红色及褐色
Molish 实验步骤
1. 对试管做标号
2. 每管1ml各待测糖溶液+ 100ml Molish试剂
3. 倾斜试管，沿管壁小心加入约 1ml 浓硫酸，切勿摇动，小心竖直后仔细 观察两层液面交界处的颜色变化
寡糖 (oligosaccharide)：2-10个单糖脱水后以糖苷键相连而成
多糖 (polysaccharide)：由糖苷键结合的糖链，超过10个以上 的单糖组成的聚合糖高分子碳水化合物
单糖
全部都是还原糖，分为丙糖、丁糖、戊糖、己糖、庚糖等
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
葡萄糖 （Glucose） 醛糖
果糖（Fructose）
均多糖：淀粉、纤维素等 杂多糖：透明质酸等
还原糖
非还原糖
单糖 葡萄糖（醛糖） 淀粉 果糖（酮糖） 纤维素
双糖 麦芽糖 乳糖 纤维二糖
蔗糖
多糖 还原糖
淀粉 纤维素
目的
实验
▪ 鉴定是否存在糖类
Molish反应
▪ 测定糖类的含量
蒽酮反应
▪ 鉴定酮糖和醛糖
Seliwanoff反应
▪ 鉴定还原糖和非还原糖 Fehling试验
实验一
糖的呈色反应和定性鉴定
实验目的及要求
➢ 学习鉴定糖类及区分酮糖和醛糖的方法 ➢ 学习鉴定还原糖的方法及其原理 ➢ 加强对糖的结构和性质的理解
糖（saccharide） Cn (H2O)n
多羟基醛或多羟基酮以及它们的聚合物或衍生物 单糖 (monosaccharide)：不能被水解成更小分子的糖
▪ /biochemistry/bioc800/bio cindx.htm
▪ /~cmg/ ▪ / ▪ 赵永芳. 生物化学技术原理及应用.北京. 科学出版
社.2002 ▪ 沈同 王镜岩.生物化学.高等教育出版社.2002
Fehling 试剂： 氢氧化钠 + 硫酸铜 + 酒石酸钾钠 Benedict试剂：氢氧化钠 + 硫酸铜 + 柠檬酸钠
Fehling反应
Benedict反应
6）Barfoed试验 (区分单糖和还原二糖）
在酸性溶液中，单糖和还原二糖的还原速度 有明显差异。在弱酸性Barfoed试剂（巴弗德氏 试剂）的作用下，煮沸时，单糖能将Cu2+还原成 砖红色的氧化亚铜，时间约为3分钟，而还原二 糖则需20分钟左右。
实验报告的书写
（1）实验目的 （2）实验原理 （3）药品试剂 （4）实验方法和步骤 （5）实验结果：包括原始数据的记录和结果
计算等。原始数据记录在实验报告空格处， 每次实验的原始数据均需要老师签字。 （6）讨论 其中的实验目的和原理部分作为预习报告。
有关网址和参考书目
▪ /molebio/biochem_books .htm
酮糖
CH2OH C=O
H–C–OH
CH2OH
双糖
非还原糖 蔗糖（sucrose）
D-葡萄糖 部分
D-果糖 部分
还原二糖 麦芽糖 （maltose）
D-葡萄糖部分 D-葡萄糖部分
还原二糖 乳糖
（lactose）
D-葡萄糖部分
D-半乳糖部分
多糖
非还原糖，难溶于水，不溶于有机溶剂，在 酸性条件下水解可生成寡糖或单糖
Benedict试验
▪ 鉴定单糖与还原二糖 Barfoed试验
葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、淀粉，及水
1）Molish反应 （糖定性）
浓酸
糖 + a-萘酚
紫红色复合物 （紫环反应）
OH
OH
糖
浓 H2SO4
2
HOH2C
HOH2C O CHO
浓 H2SO4
O
C
羟甲基糠醛
HO3S
OH
O SO3H
糠醛
当加热时间过长，非还原性二糖经水解后也 能呈现阳性反应。
Barfoed反应
试剂 糖
Molish 蒽酮 Seliwanoff Fehling Benedict Barfoed
100 ml 1 ml 1 ml
甲1ml 乙1ml
2 ml
2ml
1 ml 100 ml 200 ml 200 ml 200 ml 200 ml
H2SO4
1ml
混匀
沸水浴
沸水浴 沸水浴 沸水浴 3min 5min 3-20min
观察,记录 **
**
冷却 冷却
**
请勿将含浓酸的溶液倒入废液缸，应倒入水池中，流水冲洗
冷却
边加热边观察，区分不同糖类的反应时间
实验内容
1. 用上述六种糖鉴定实验检测已知六种糖, 以水为阴性对照；其中蒽酮实验只需观察 颜色深浅，不需测定OD；