1糖的呈色反应和定性鉴定

Benedict试验
▪ 鉴定单糖与还原二糖 Barfoed试验
葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、淀粉，及水
1）Molish反应 （糖定性）
浓酸
糖 + a-萘酚
紫红色复合物 （紫环反应）
OH
OH
糖
浓 H2SO4
2
HOH2C
HOH2C O CHO
浓 H2SO4
O
C
羟甲基糠醛
HO3S
OH
O SO3H
糠醛
欢迎同学们上 《生物化学实验》
任课教师： 高志勇 杨明园 陈颖卓
生科院2003室 zygao@whu.edu.cn
不及格(<60分) 有下列情况者，实验项目成绩评为不及格： 1．不能完成基本的实验操作； 2．实验报告马虎、内容不全、无数据处理过程或 数据处理过程不完整、实验无结论等； 3．抄袭实验报告； 4．未做实验，但模仿指导教师笔迹签字伪造原始 数据的; 5. 无故缺席或者迟到30分钟以上者，不能补做， 该次实验成绩按0分记。
实验报告的书写
（1）实验目的 （2）实验原理 （3）药品试剂 （4）实验方法和步骤 （5）实验结果：包括原始数据的记录和结果
计算等。原始数据记录在实验报告空格处， 每次实验的原始数据均需要老师签字。 （6）讨论 其中的实验目的和原理部分作为预习报告。
有关网址和参考书目
▪ http://www.bioon.com/molebio/biochem_books .htm
当加热时间过长，非还原性二糖经水解后也 能呈现阳性反应。
Barfoed反应
试剂 糖
Molish 蒽酮 Seliwanoff Fehling Benedict Barfoed
100 ml 1 ml 1 ml
甲1ml 乙1ml
2 ml
2ml
1 ml 100 ml 200 ml 200 ml 200 ml 200 ml
2. 用学到的知识和实验区分和鉴定五种未知 糖溶液。
寡糖 (oligosaccharide)：2-10个单糖脱水后以糖苷键相连而成
多糖 (polysaccharide)：由糖苷键结合的糖链，超过10个以上 的单糖组成的聚合糖高分子碳水化合物
单糖
全部都是还原糖，分为丙糖、丁糖、戊糖、己糖、庚糖等
葡萄糖 （Glucose） 醛糖
果糖（Fructose）
浓酸
酮糖 + 间苯二酚
鲜红色复合物 1min
(果糖)
∆
浓酸
醛糖 + 间苯二酚
淡黄色复合物 10-20 min
（葡萄糖）
∆
1ml Seliwanoff 试剂 + 200ml 各待测糖 加热
Seliwanoff 反应
鉴定还原糖 4）Fehling试验
5）Benedict试验
还原糖能在碱性溶液中将二价铜离子还原成一价氧化 亚铜（红色沉淀），而糖本身氧化成各种羟酸。非还原糖 则无此特性。 醛糖比较容易被氧化，甚至能被弱氧化剂氧 化成酸，如Fehling试剂和Benedict试剂；而酮糖一般不易 被氧化，只有在长时间或强氧化剂的作用下才被分解。
均多糖：淀粉、纤维素等 杂多糖：透明质酸等
还原糖
非还原糖
单糖 葡萄糖（醛糖） 淀粉 果糖（酮糖） 纤维素
双糖 麦芽糖 乳糖 纤维二糖
蔗糖
多糖 还原糖
淀粉 纤维素
目的
实验
▪ 鉴定是否存在糖类
Molish反应
▪ 测定糖类的含量
蒽酮反应
▪ 鉴定酮糖和醛糖
Seliwanoff反应
▪ 鉴定还原糖和非还原糖 Fehling试验
H2SO4
1ml
混匀
沸水浴
沸水浴 沸水浴 沸水浴 3min 5min 3-20min
观察,记录 **
**
冷却 冷却
**
请勿将含浓酸的溶液倒入废液缸，应倒入水池中，流水冲洗
冷却




边加热边观察，区分不同糖类的反应时间
实验内容
1. 用上述六种糖鉴定实验检测已知六种糖, 以水为阴性对照；其中蒽酮实验只需观察 颜色深浅，不需测定OD；
紫红色复合物
• 各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸、草酸、甘油醛 等均产生近似的颜色反应（假阳性）
• 果糖浓度过高时，由于浓硫酸对它的焦化作用，将呈现红色及褐色
Molish 实验步骤
1. 对试管做标号
2. 每管1ml各待测糖溶液+ 100ml Molish试剂
3. 倾斜试管，沿管壁小心加入约 1ml 浓硫酸，切勿摇动，小心竖直后仔细 观察两层液面交界处的颜色变化
4. 比较各管的颜色并记录。
2）蒽酮反应 （糖定量）
浓酸
糖 + 蒽酮
蓝绿色复合物
该蓝绿色复合物在630nm有最大的吸收峰，并且在 一定范围内，颜色与糖量的多少成正比。 1) 勿混入沉淀； 2) 不同糖类呈色深浅不同，故仅用于单一糖类的测定。
1ml 蒽酮试剂 + 100ml 各待测糖
蒽酮反应
3）Seliwanoff 反应 （鉴定酮糖）
▪ http://www.kumc.edu/biochemistry/bioc800/bio cindx.htm
▪ http://cti.itc.virginia.edu/~cmg/ ▪ http://www.bio-soft.net/ ▪ 赵永芳. 生物化学技术原理及应用.北京. 科学出版
社.2002 ▪ 沈同 王镜岩.生物化学.高等教育出版社.2002
Fehling 试剂： 氢氧化钠 + 硫酸铜 + 酒石酸钾钠 Benedict试剂：氢氧化钠 + 硫酸铜 + 柠檬酸钠
Fehling反应
Benedict反应
6）Barfoed试验 (区分单糖和还原二糖）
在酸性溶液中，单糖和还原二糖的还原速度 有明显差异。在弱酸性Barfoed试剂（巴弗德氏 试剂）的作用下，煮沸时，单糖能将Cu2+还原成 砖红色的氧化亚铜，时间约为3分钟，而还原二 糖则需20分钟左右。
实验一
糖的呈色反应和定性鉴定
实验目的及要求
➢ 学习鉴定糖类及区分酮糖和醛糖的方法 ➢ 学习鉴定还原糖的方法及其原理 ➢ 加强对糖的结构和性质的理解
糖（saccharide） Cn (H2O)n
多羟基醛或多羟基酮以及它们的聚合物或衍生物 单糖 (monosaccharide)：不能被水解成更小分子的糖
酮糖
CH2OH C=O
H–C–百度文库H
CH2OH
双糖
非还原糖 蔗糖（sucrose）
D-葡萄糖 部分
D-果糖 部分
还原二糖 麦芽糖 （maltose）
D-葡萄糖部分 D-葡萄糖部分
还原二糖 乳糖
（lactose）
D-葡萄糖部分
D-半乳糖部分
多糖
非还原糖，难溶于水，不溶于有机溶剂，在 酸性条件下水解可生成寡糖或单糖