微生物作业指导书

西安宏兴乳业有限公司

微生物检验作业指导书

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2014-02-25发布2014-02-28实施西安宏兴乳业有限公司发布

制法：称取氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌30min。

3 操作步骤

样品的处理：

样品：称取25g样品置盛有225 %氯化钠肉汤的无菌均质袋内，混合均匀。

增菌和分离培养：

将上述样品匀液于36℃±1℃培养箱内培养18h—24h。

将上述培养物，在生物安全柜内分别用三区法划线接种到Baird-Parker平板和血平板上，血平板36℃±1℃培养18h—24h ，Baird-Parker平板36 ℃±1℃培养18h—24h或45h—48h。（使用前，如Baird-Parker平板表面有水珠，可放在25 ℃～50 ℃的培养箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。）

菌落形态：

金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上，菌落直径为2mm—3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。

在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑去上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。4鉴定：

染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为m～1m。

染色流程：初染→媒染→脱色→复染→镜检。

①取一干净的载玻片，滴一滴蒸馏水，再向蒸馏水中挑取一环可疑菌落，涂抹均匀，将涂片面朝上在酒精灯上方稍微加热，使其干燥；

②初染：用结晶紫染色1min—2min后用蒸馏水冲洗至洗出液为无色再将涂片面朝上在酒精灯上方稍微加热，使其干燥；

③媒染：用碘液媒染约1min后用蒸馏水洗干净再将涂片面朝上在酒精灯上方稍微加热，使其干燥；

④脱色：用95％乙醇脱色20s—30s后用蒸馏水洗干净再将涂片面朝上在酒精灯上方稍微加热，使其干燥；