酶法分析

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2. 标记底物的制备
1）定位标记 ） 2） 2）放化纯度高 3）浓度适当 ） 4）比活度适当 ）
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3. 底物与产物的分离技术
1）固相法 ） 2）沉淀法与薄板层析法结合 ） 3）挥发性产物的分离 ）
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复习题
1. 几种酶法放射分析的原理
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参考文献
图书资料 《化学标记与探针技术在分子生物学中的应用》
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2. 分类 1) 酶活性放射分析 2) 酶促放射分析（酶促同位素衍生物分析） 酶促放射分析（酶促同位素衍生物分析） 3) 酶的激活剂或抑制剂的酶法放射分析
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二、基本原理
一、几个基本概念 1. 酶反应动力学方程 E + S 酶 底物 ES 中间产物 E + P 酶 产物
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2. 米－曼氏方程式 V = Vmax ×[S] Km+[S] Km值相当于酶促反应速度为最大速度一半时的底 值相当于酶促反应速度为最大速度一半时的底 物浓度， 物浓度，它是酶的特征性常数 。
第九节 酶法放射分析和放射酶促析法
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一、概 述
1. 酶法放射分析 酶法放射分析是基于酶促反应， 酶法放射分析是基于酶促反应，使放射性标记 底物转变为放射性标记产物， 转变为放射性标记产物 底物转变为放射性标记产物，分离提纯放射性标记 产物，测定其放射性活度，从而测定酶的活性 酶的活性或 产物，测定其放射性活度，从而测定酶的活性或定 量分析待测底物等的一种微量分析技术 等的一种微量分析技术。 量分析待测底物等的一种微量分析技术。
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3. 酶活性与酶的活性单位
酶的活性
指酶催化化学反应的能力，以酶促反应速度的大小来 衡量。 衡量。 指酶催化化学反应的能力， 酶促反应速度： 酶促反应速度：以单位时间内底物的实际消耗量或产物的生成量 来表示。 来表示。
酶的活性单位
开特（ ）：在特定测定系统中 开特（Katal）：在特定测定系统中，每秒种转化 ）：在特定测定系统中，每秒种转化1mol底物所需 底物所需 的酶量。 的酶量。
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三、基本技术
1. 酶液的制备
1）对细胞外酶，可取样本直接测定； ）对细胞外酶，可取样本直接测定； 2）对细胞内酶，首先需要对细胞进行破碎处理，再提取分 ）对细胞内酶，首先需要对细胞进行破碎处理， 离酶。 离酶。 具体的方法主要有密度梯度离心法、有机溶剂提取法、 具体的方法主要有密度梯度离心法、有机溶剂提取法、吸 附法、层析法等。 附法、层析法等。
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二、基本原理
1. 酶活性放射性分析 E + *S 酶 E *S E*P E + *P 酶 产物 底物 中间产物 络合物
酶活性 ＝ P/(60×SA×t)
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Pm ＝
Pd 60 × SA × K
2. 酶促同位素衍生物法 酶促同位素衍生物法：
单标记法 Pm＝ Pd/(60×SA×K) ＝ 双标记内标准法