硫酸卡那霉素检验操作规程

目的：为检验硫酸卡那霉素规定一个标准的程序，以便获得准确的实验数据。

范围：适用于硫酸卡那霉素的检验。

职责：检验室主任、检验员。

规程：

1．性状：本品为白色或类白色的粉末；无臭；有引湿性。本品在水中易溶，在氯仿或乙醚中几乎不溶。

1.1 比旋度：精密称取本品

2.5g置50ml容量瓶中，使溶解并稀释至刻度，摇匀；照旋光度测定法（SOP-QC-310-00）检测，比旋度应在+102°至+110°范围内为符合规定。

2．鉴别

2.1 试剂与仪器

2.1.1 0.2%蒽酮的硫酸溶液 2.1.2 卡那霉素标准品

2.1.3 氯化钡试液 2.1.4 盐酸

2.1.5 硝酸 2.1.6 醋酸铝试液

2.1.7 醋酸铵试液 2.1.8 氢氧化钠试液

2.1.9 硫代硫酸盐 2.1.10 烧杯

2.1.11 单标吸管 2.1.12 微量注射器

2.1.13 硅胶G薄层板 2.1.14 层析缸

2.1.15 电子天平(万分之一克) 2.1.16 电炉

2.1.17 水浴锅

2.2 项目与仪器

2.2.1精称本品约1mg，加水2ml溶解后，加0.2%蒽酮的硫酸溶液4ml，在水浴中加热15

分钟，冷却，即显蓝紫色为符合规定。

2.2.2精称本品与卡那霉素标准品0.25g，分别置50ml容量瓶中，加水使溶解并稀释至刻

度，摇匀；吸取上述两种溶液各2μl，照卡那霉素B项下的方法，自“分别点于同

一硅胶G薄层板上”起依法试验。供试品所显主斑点的颜色与位置应与标准品的主

斑点相同为符合规定。

2.2.3 本品的水溶液显硫酸盐的鉴别反应：

⑴取供试品溶液，加氯化钡试液，即生成白色沉淀，分离，沉淀在盐酸或硝酸中均

不溶解为符合规定。

⑵取供试品溶液，加醋酸铅试液，即生成白色沉淀，分离，沉淀在醋酸铵试液或氢

氧化钠试液中溶解为符合规定。

⑶取供试品溶液，加盐酸，不生成白色沉淀为符合规定。

3．检查

3.1 试剂与仪器

3.1.1 比色用重铬酸钾液 3.1.4 盐酸溶液

3.1.5 醋酸 3.1.6 碘化钾

3.1.7 0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液 3.1.8 氨试液

3.1.9 醋酸-醋酸钠缓冲液(PH6.0) 3.1.10 淀粉指示液

3.1.11 二甲酚橙指示液 3.1.12 乙二胺四醋酸二钠滴定液(0.05mol/L)

3.1.13 氯化钡滴定液(0.1mol/L) 3.1.14 乙醇

3.1.15 5.5%磷酸二氢钾溶液 3.1.16 茚三酮

3.1.17 0.16%氯化亚锡溶液 3.1.18 0.9%无菌氯化钠溶液

3.1.19 0.5%葡萄糖肉汤培养基 3.1.20 量杯

3.1.21 容量瓶 3.1.22 烧杯

3.1.23 黄色或黄绿色4号标准比色液 3.1.24 酞紫指示液

3.1.25 硅胶G薄层板 3.1.26 层析缸

3.1.27 坩埚,称量瓶 3.1.28 微量注射器

3.1.29 试管 3.1.30 恒温干燥箱

3.1.31 PH酸度计 3.1.32 马福炉

3.2 项目与步骤

3.2.1 酸碱度：称取本品3g，置烧杯中加水10ml溶解后,按PH值测定法(SOP-QC-312-00)检测，PH值在6.0～8.0为符合规定。

3.2.2 溶液的澄清度与颜色：取本品5份各1.7g，分别加水5ml使溶解，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液，按澄清度检查法(SOP-QC-329-00)检测比较，均不得更浓；如显色，与黄色或黄绿色4号标准比色液(SOP-QC-329-00)第一法比较，不得更深为符合规定。

3.2.3 硫酸盐：取本品约0.18g，精密称定，加水100ml使溶解，用浓氨溶液调节PH值至11后，精密加入氯化钡滴定液(0.1mol/L)10ml及酞紫指示液5滴，用乙二胺四醋酸二钠滴定液(0.05mol/L)滴定，注意保持滴定过程中的PH值为11，滴定至紫色开始消褪，加乙醇50ml，继续滴定至紫蓝色消色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml氯化钡滴定液(0.1mol/L)相当于9.606mg硫酸盐（SO4）。本品含硫酸盐按干燥品计算应在23.0%～26.0%范围内为符合规定。

3.2.4 卡那霉素B：取本品，加水制成每1ml中含40mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加水稀释成每1ml中含0.8mg的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法（SOP-QC-304-00）试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5.5%磷酸二氢钾溶液-乙醇（70：30）为展开剂（用磷酸调节PH值至

4.3±0.2），在20～25℃展开后，晾干，喷以显色液（取茚三酮0.2g，加热水4ml溶解后，加0.16%氯化亚锡溶液5ml 混匀，滤过，4℃保存备用，临用时，取此溶液1m加水2ml及乙醇18ml混匀），挥干，在105℃加热15分钟，出现紫红色斑点，供试品溶液主斑点下的卡那霉素B所显斑点的颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更深为符合规定。

3.2.5 干燥失重：精密称取本品约1.0g，置称量瓶中，按干燥失重测定法（SOP-QC-325-00）检测，在105℃干燥3小时，减失重量不得过

4.0%为符合规定。

3.2.6 炽灼残渣：精密称取本品约1g，置坩埚中，照炽灼残渣检查法(SOP-QC-327-00)检测，不得过0.5%为符合规定。

４．含量测定：精密称取本品约37mg，置25ml容量瓶中，加灭菌水稀释至刻度，摇匀，照抗生素微生物检定法（SOP-QC-339-00）操作，即得。

4.1 试剂与仪器

4.1.1 抗生素检定培养基Ⅰ(7.8-8.0) 4.1.2 磷酸盐缓冲液(PH7.8)

4.1.3 枯草芽孢杆菌悬液 4.1.4 卡那霉素标准品

4.1.5 容量瓶(50ml,100ml) 4.1.6 灭菌刻度吸管,滴管

4.1.7 双碟 4.1.8 陶瓦盖

4.1.9 钢管放置器 4.1.10 电热隔水培养箱

4.1.11 称量瓶 4.1.12 CHB-1抗生素效价测量仪

4.1.13 电子天平(万分之一克) 4.1.14 超净工作台

4.1.15 酒精灯 4.1.16 三角烧瓶(50ml,150ml)

4.1.17 量筒(100ml) 4.1.18 镊子,接种棒

4.2 检验步骤

4.2.1 培养基的制备: 称取抗生素检定培养基Ⅰ(PH7.8-8.0)25g，加1000ml水加热溶解,分装，121℃高压灭菌30分钟。

4.2.2 磷酸盐缓冲液(PH7.8)制备：称取磷酸氢二钾

5.59g与磷酸二氢钾0.41g，加水使成1000ml，滤过，经121℃蒸气灭菌30分钟，备用。

4.2.3 枯草芽孢杆菌悬液的制备：取枯草芽孢杆菌的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在35℃-37℃培养7日，取出后，用灭菌水将芽孢洗下，在65℃加热30分钟，备用。

4.2.4 标准品溶液的制备：

⑴将标准品从冰箱取出，使与室温平衡，准确称取卡那霉素对照品约64.55mg，置50ml容量瓶中，加灭菌水至刻度，精密吸取10ml置250ml容量瓶中，用磷酸盐缓冲液(PH7.8)稀释至刻度，备用。

⑵高剂量标准品的制备：精密吸取4.2.4 ⑴制备的标准溶液5ml，置50ml容量瓶中,用磷酸盐缓冲液(PH7.8)稀释至刻度，备用。

⑶低剂量标准品的制备：精密吸取4.2.4 ⑴制备的标准溶液5ml，置100ml容量瓶中，