卵母细胞体外成熟的机制与临床应用ppt课件
哺乳动物卵母细胞的成熟,受精及早期胚胎发育26页PPT
56、书不仅是生活，而且是现在、过 去和未 来文化 生活的 源泉。 ——库 法耶夫 57、生命不可能有两次，但许多人连一 次也不 善于度 过。— —吕凯 特 58、问渠哪得清如许，为有源头活水来 。—— 朱熹 59、我的努力求学没有得到别的好处， 只不过 是愈来 愈发觉 自己的 无知。 ——笛 卡儿
拉
60、生活的道路一旦选定，就要勇敢地 走到底 ，决不 回头。 ——左
哺乳动物卵母细胞的成熟,受精及早期 胚胎发育
36、如果我们国家的法律中只有某种 神灵， 而不是 殚精竭 虑将神 灵揉进 宪法， 总体上 来说， 法律就 会更好 。—— 马克·吐 温 37、纲纪废弃之日，便是暴政兴起之 时。— —威·皮 物特
38、若是没有公众舆论的支持，法律 是丝毫 没有力 量的。 ——菲 力普斯 39、一个判例造出另一个判例，它们 迅速累 聚，进 而变成 法律。 ——朱 尼厄斯
体外受精和早期胚胎发育ppt课件
B、应用该技术繁育后代的过程属于有性繁殖类型 C、试管动物技术是利用体细胞繁育后代的技术
D、试管动物技术培育动物过程全部在体外进行
ppt课件
13
2 、 哺乳动物体外受精的过程是 ①卵母细胞的采集 ②精子的采集
(B)
③卵母细胞的人工培养 ④精子的获能处理
⑤精子与成熟的卵子在受精溶液中共同培养
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课内小结
卵母细胞 的采集
方法一：用促性腺激素处理，使其超数排卵，从输卵 管中冲取卵子
方法二：从屠宰母畜卵巢中采集
方法三：直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞
体外受精
精子的获 取
假阴道法 手握法
电刺激法 受精： 获能的精子 ＋培养成熟的卵子
完成受精
早期胚胎培养
条件： 受精卵在发育培养液中培养
3.2体外受精和早期胚胎培养
ppt课件
1
目的：良种牛快速大量繁殖
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2
一、试管动物技术
♂♀
概念：
通过人工操作使
卵子和精子在体外 条件下成熟和受精， 并通过培养发育为 早期胚胎后，再经 过移植产生后代的 技术
精子采集 卵子采集 精子获能 卵子体外培养
体外受精 早期体外胚胎培养
本地牛（子宫）
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注意：卵子能直接与获能的精子在体外受精。
常用对象：实验动物如小鼠、兔，以及家畜猪、羊等
②刚屠宰母畜的卵巢中取卵或活体动物卵巢中取卵。
注意：要在体外经人工培养成熟后，才能与精子 结合完成受精。
常用对象：大家畜或大型动物，如牛等
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6
1、体外受精
⑵精子的采集和获能
猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活的研究
猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活的研究猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活的研究引言：随着现代生物科技的不断发展，人们对于动物胚胎发育过程的探索也愈发深入。
猪作为一种重要的农业畜牧业动物，其生殖发育研究对于提高繁殖效率和品种改良具有重要意义。
猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活的研究被认为是改善猪生殖效率的关键技术之一，本文将就该研究进行探讨。
一、猪卵母细胞体外成熟的研究进展1.1 体外培养条件的优化猪卵母细胞的体外成熟需要适宜的培养基和环境条件的支持。
过去的研究中发现，添加荷尔蒙和营养因子可以促进卵母细胞的发育，但也有一些不良因素对其生成产生负面影响。
如今，研究人员通过改良培养基成分和添加植物激素等手段，成功地提高了卵母细胞的发育率和质量。
1.2 卵母细胞成熟标志物的鉴定卵母细胞的成熟状态可以通过某些标志物的表达情况进行鉴定。
近年来，研究人员发现，猪卵母细胞的成熟可以通过检测卵母细胞表面的特定蛋白、细胞器的形态及功能等进行判定。
这些标志物的鉴定为猪卵母细胞体外成熟的监测提供了依据。
1.3 卵母细胞体外成熟能力的提高提高猪卵母细胞的体外成熟能力对于提高繁殖效率具有重要意义。
研究人员通过调整培养条件、添加辅助因子等手段已取得了一定的突破。
例如，改善培养基中气相和营养物质的供应，可以促进细胞发育和成熟率的提高。
此外，添加某些荷尔蒙如促黄体生成素、卵泡刺激素等也能够提高卵母细胞的体外成熟能力。
二、孤雌激活的研究现状2.1 孤雌激活的意义孤雌激活是指在缺乏精子参与的情况下，卵母细胞可以自主地发育和分裂，从而获得新生命。
这种现象在动物界被广泛研究并被认为是生殖发展领域的一个热点。
对孤雌激活机制的深入研究不仅可以理解胚胎发育的基本过程，还有助于解决某些生殖障碍的问题。
2.2 孤雌激活的机制目前，孤雌激活的机制尚不完全清楚，但有一些重要的研究和理论已经提出。
研究发现，内质网钙离子释放和细胞质内信号通路的活化是孤雌激活的重要因素。
人教版生物选修3：3.2 体外受精和早期胚胎培养 课件(共23张PPT)
精子体外获能
体外受精
良种牛体外受精胚胎
胚胎移植
受体牛
良种犊牛
成熟期牛
采集卵巢中卵母细胞
屠宰加工厂
市场
一、体外受精
1.采集的方法有哪些?
1.卵母细胞的采集和培养
2.采集到的细胞能直接 和精子受精吗？
1.采集的方法有哪些?
2.精子的采集和获能
2.采集到的精子能直接和卵 子受精吗？
3.受精
在体外受精要准备什么条件？
进行
2、下列现代生物技术成果获得必须通过胚胎移植的是 D
A. 转基因良种鸡
B. 重组酵母乙肝疫苗
C. 单克隆抗体
D. 试管婴儿
3、“试管婴儿”技术是通过将不孕夫妇的精子和卵细胞取出在
试管中完成受精，并在试管中培养受精卵使其发育到桑椹胚或囊
胚阶段，再将胚胎移入女性子宫内发育成胎儿。它不仅使一部分
不能生育的男女重新获得了生育的机会，也为人类的优生开辟了
1.卵母细胞的采集和培养 方法一： 超数排卵法
用促性腺激素处理后，从输卵管中冲取卵 子，直接与获能的精子在体外受精。
如：小鼠、兔、
猪、羊等
方法二：已屠母畜卵巢取卵法 从屠宰的母畜卵巢中直接采集卵母细胞。
（适用于大家畜和大动物，如牛，大象）
牛卵巢
牛卵巢中采卵
方法三：活体取卵法 借助超声波探测仪、内窥镜、腹腔镜等工具，
化学诱导法：
精子一定浓度的 肝素 或 钙离子载体A23187溶液 中，用 _____ _____
_______________________ __________________________________
化学药物诱导获能。
3.受精过程
人教版高中生物选修三课件：体外受精和早期胚胎培
A.都属于无性生殖
B.都属于细胞工程的技术范畴
C.都不会发生基因重组
D.都体现了分化的细胞具有全能性
精子体外获能
体外受精
良种牛体外受精胚胎 胚胎移植
受体牛
良种犊牛
成熟期牛
采集卵巢中的 屠宰加工厂 卵母细胞
市场
二、体外受精
1.卵母细胞的收集和培养
小型动物或家畜： 用促性腺激素处理 ，然后从输卵管中 冲取卵子，直接与 获能的精子在体外 受精。
大型动物或家畜： 屠宰场已屠宰母畜 的卵巢中采集卵母 细胞；直接从活体 动物卵巢中吸取卵 母细胞。
1.下列关于利用胚胎工程技术繁殖优质奶羊的叙述，错误的是 B
A.对受体母羊与供体母羊进行同期发情处理
B.人工授精后的一定时间内，收集供体原肠胚用于胚胎分割
C.利用胚胎分割技术可以获得两个基因型完全相同的胚胎
D.一次给受体母羊植入多个胚胎，可增加双胞胎和多胞胎的比例
2.老年痴呆症患者的脑血管中有一种特殊的β淀粉样蛋白体，它
A.在形成早期胚胎的过程中，依次经历了卵裂、桑椹胚、囊胚、
原肠胚等几个阶段
B.兔子卵细胞质的作用是激发大熊猫细胞核的全能性
C.克隆出的早期胚胎中，各细胞间具有相同的遗传信息
D.在形成早期胚胎的过程中，尚未出现细胞的分化
5.试管婴儿、试管苗和克隆羊这三者可以说是现代生物科技的杰
出成果，下列对其生物学原理及技术的叙述，正确的是 B
人教版高中生物选修三 课件：体外受精和早期
说起
试管动物： 是指通过人工 操作使卵子和 精子在体外条 件下成熟和受 精，并通过培 养发育成早期 胚胎后，再经 移植产生后代 的技术。
“试管牛”工厂化生产的技术流程图
哺乳动物卵母细胞体外成熟技术应用与研究
贵
达拉特旗 ０４０ ） １３ ０
摘要： 综述 了近 年 来 国 内外在 哺 乳动 物 卵母 细胞 采 集 方 法、 卵母 细胞 体 外成 熟培 养技 术 的研 究
进展 。 对影 响 卵母 细 胞成 熟 的 因素 以及 哺 乳动 物 卵母 细胞体 外成 熟在 家畜育 种 中的应 用进行 了 总结和 分析 。
卵 泡 腔 ， 卯 丘—— 卵母 细胞 的复 合体 （ Ｏ ｓ 冲 出 ， 将 Ｃ Ｃ） 于 实 体 显微镜 下 检 卵 ］ 。 将 切 剖后 的 卵巢 ， 除黄 体及 多 余 的脂 肪 ， 门部 去 从 纵 切卵 为半 ，然 后 置于 盛 Ｐ Ｓ １ ｇｍ Ｂ ＋ ０Ｉ ／ Ｌ肝 素 的表 面或 ｘ 者 置 于 １ ０ｍ ｌ 的培 养皿 中 ，用 镊子 固定 卵巢 ， ０ ｍｘ ５ｍｍ 然后 用 单 面刀或 一组 特 制刀 片 （ ３ ５个 单 面刀 片或 双 有 ～
用 含 有 ０３ ／ Ｌ硫 酸 庆 大霉 素 的 生 理 盐水 洗 净 ， ． ｍｇｍ ２ 然
后 进 行 采 卵 ［。 ６ ３
科 研 工作 者 在卵 母细 胞 的体 外 成 熟 上做 了大 量 的
工 作 ． 以通 过体 外培 养使 小 鼠 、 可 绵羊 、 、 、 、 、 猴 猪 牛 人 山
用 废 弃 卵巢 采集 卵母 细 胞 一 般 采 用 机械 分离 法 ， 郭 宪等 研究认 为主要 有 以下几 种 方法 ： 吸法 、 抽 切剖 法 、 剥离 法 。 １１１１ 抽 吸法 ：用 ５ｍＬ或 １ ．．． ０ｍＬ的 一 次性 注 射 器从
羊 …、 犬 、 ［、 熊 猫 等 哺 乳 动 物 的 卵母 细胞 在 体 外 马 ３大 ］ 获 得成 熟 。随着 卯母 细胞 体外 成熟 技 术 的不 断提 高 ， 体 外 成熟 的 卵母 细胞将 广泛 应用 于 体外 受精 、显 微 受精 、
卵母细胞体外成熟技术的临床应用进展
卵母细胞体外成熟技术的临床应用进展李涵;杨志勇【摘要】In vitro maturation (IVM) refers to the maturation of immature oocytes at different stages.Immature oocytes obtained in different origins have different subsequent embryonic development capacity and pregnancy rates as well health live births rates.IVM as an efficient treatment has been used in those patients with polycystic ovary syndrome,ovary high response or low response,and fertility preservation.Several thousands of healthy IVM babies have been born in the world.The improvement of clinical IVM technology focuses on IVM medium,the optimization of the culture environment and operation process.With the improvement of IVF efficiency and IVM culture system,the new treatment option was proposed that the combination of natural cycle/ mild stimulation IVF treatment with immature oocyte retrieval and the followed IVM.This IVF combined with IVM may represent a viable alternative to the present standard treatment,or as a potential first-line treatment in future.%卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)是将处于不同时期的未成熟卵母细胞体外培养成熟的技术,临床不同来源的未成熟卵母细胞在胚胎发育潜能、妊娠率和活产率等方面存在差异.IVM作为一种有效治疗手段可应用于治疗多囊卵巢综合征、卵巢高反应及低反应患者、癌症患者生育力保存等,该技术已在全世界应用并有数千名健康婴儿出生.临床IVM技术的改进主要包括IVM培养基的改良、培养环境及操作流程的优化.目前,随着体外受精(IVF)效率的提高和培养体系的改进,自然周期或温和刺激可能更适合于进行IVF治疗的女性.新的治疗方案提出将自然周期/温和刺激IVF与IVM结合,温和刺激IVF联合IVM治疗方案不仅有望成为目前标准治疗的可行替代方案,而且可能是潜在的一线治疗选择.【期刊名称】《国际生殖健康/计划生育杂志》【年(卷),期】2017(036)005【总页数】5页(P412-416)【关键词】卵母细胞;细胞培养技术;生殖技术,辅助;受精,体外【作者】李涵;杨志勇【作者单位】200032上海,同济大学附属第十人民医院生殖医学中心;200032上海,同济大学附属第十人民医院生殖医学中心【正文语种】中文20世纪60年代人类卵母细胞体外成熟技术（in vitro maturation，IVM）取得里程碑式进展，人卵母细胞体外受精（in vitro fertilization，IVF）也由IVM卵母细胞建立。
动物繁殖学第10讲卵子发生及其形态结构与体外保存ppt课件
透明带内卵黄的直径一般为80~200μm，为 精子体积的1万倍以上
华中农业大学动物 科技学院
考评项目赋标准分，对照考评内容和 考评办 法对考 评项目 进行考 评，评 出各考 评项目 的考评 实际得 分，考 评类目 下各考 评项目 考评实 际得分 之和为 该考评 类目的 考评实 际得分
颗粒细胞附着在卵母细胞外并通过卵母细胞外围 微绒毛为卵母细胞提供营养物质，为以后的发育 提供能量来源
华中农业大学动物 科技学院
考评项目赋标准分，对照考评内容和 考评办 法对考 评项目 进行考 评，评 出各考 评项目 的考评 实际得 分，考 评类目 下各考 评项目 考评实 际得分 之和为 该考评 类目的 考评实 际得分
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考评项目赋标准分，对照考评内容和 考评办 法对考 评项目 进行考 评，评 出各考 评项目 的考评 实际得 分，考 评类目 下各考 评项目 考评实 际得分 之和为 该考评 类目的 考评实 际得分
3．卵母细胞的成熟
初级卵母细胞发育至成熟分裂前期的双线期 便进入停滞状态，当母畜发育到一定年龄， 伴随着卵泡的增长，在生殖激素的支配和调 节下，恢复成熟分裂过程。这时卵母细胞的 核向卵质膜下移动，核仁和核膜消失，染色 体聚集成致密状态，即生发泡破裂
卵子发生起始于胚胎早期,由原始卵原细胞经过 有丝分裂、减数分裂最后成为单倍体的卵细胞过 程，持续时间很长，一般在初情期以后开始，至 受精过程中才能完成
华中农业大学动物 科技学院
考评项目赋标准分，对照考评内容和 考评办 法对考 评项目 进行考 评，评 出各考 评项目 的考评 实际得 分，考 评类目 下各考 评项目 考评实 际得分 之和为 该考评 类目的 考评实 际得分
（一）卵子发生特点
卵母细胞体外成熟的机制与临床应用
添加卵泡刺激素 （FSH）培养
添加人绒毛膜促性 腺激素（hCG）培养
联合使用FSH和hCG 当体外培养卵母细胞时，联合使用FSH和hCG可进一步 提高获卵数、卵母细胞成熟率、种植率和临床妊娠率
三、卵母细胞体外成熟技术的优化和 临床应用评估
一般来讲，未成熟卵子需要在体外培养24～48小时，国际报道 的成熟率可以达到60～75%。这些体外成熟卵子可以体外受精 发育成胚胎，进行宫腔移植。
图1 调节垂体生长激素释放（引自 Kojima M and Kangawa K,2005)
图2 人和大鼠Ghrelin的结构（引自 Kojima M and Kangawa K,2005)
2 Ghrelin的结构及其分布
调节细胞 增殖分化
影响食物摄 入、睡眠和 行为
影响心脏 功能与血 管阻力
刺激GH、 ATCH、PRL 的分泌
卵巢多囊综合征 （PCOS）患者
目 前 应 用
卵巢高度反应有卵巢过度 刺激综合征（OHSS）病史
卵巢不适于药物刺激而本 身又没有成熟卵泡生长 对自然周期IVF治疗同时取 出其余小卵泡（IVF/IVM）
一、卵母细胞体外成熟的定义、应用及其 发展现状
3、体外成熟技术安全吗？
这同样也是我们医护人员们最为关心 的问题。 IVM出生的孩子遍布世界各地， 目前全世界大概有5000～10000名体外成熟 卵试管婴儿健康成长。其妊娠率可达到与 体内成熟卵相当（35～50%）。结果表明， 较其他辅助生殖技术，IVM技术并没有增加 子代异常的风险 但是，毕竟卵母细胞体外成熟技术， 将使卵子暴露于体外条件更长时间，理论 上增加了卵子受培养环境影响的风险，在 基因编程、表观遗传学、伦理学等方面， 还需要更加深入的研究和探索。因此目前 该技术只是适用于特殊人群，还没有普及 到每一例试管婴儿
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IVM取卵时间：
由于未成熟卵母细胞主要来源 于小卵泡，所以取卵技术略不同 于含有成熟卵子的大卵泡。取卵 难度相对大一些，因为卵巢游动 度较大，患者容易产生不适，所 以一般都在麻醉下完成取卵。一 般每个患者大约可以取到7～30余 个不成熟卵子。 卵泡越小，卵母细胞恢复减数 分裂进而发育成熟的能力越弱， 但体积较大的优势卵泡可分泌大 量雌激素而引起周围卵泡闭锁。 因此，过早或过晚结束培养都会 对卵母细胞的质量产生不利影响。 目前，一般在卵泡直径达到10～ 12 mm时结束培养
一、卵母细胞体外成熟的定义、应用及其 发展现状
2、未成熟卵体外成熟技术 的应用及其发展
上世纪九十年代，试管婴 儿之父——爱德华兹先生就把卵 母细胞体外成熟技术（IVM）， 作为辅助生殖技术未来发展的 三大前景技术之一，其它两个 技术是微刺激和自然周期试管 婴儿技术。 近十余年来，IVM技术遍布 全世界，对于一种不用或减少 卵巢刺激，提高患者舒适度的 治疗理念，人们一直在努力尝 试更好的体外培养条件，以获 得更高的成功率
（图：胚胎发育的不同阶段）
三、卵母细胞体外成熟技术的优化和 临床应用评估
1、卵母细胞体外成熟技术的优化
培养液的优化： 将未成熟的小窦状卵泡从人体内取出后，卵母细胞所处环境即发 生变化，与其直接接触的培养液成分将对卵母细胞的发育、成熟、 受精能力等产生重要的影响。
适当添加促性腺激素Gn 有助于获取高质量的IVM的卵母细胞 添加促性腺激素释放激 可促进人IVM的卵母细胞的成熟和排卵 素GnRHa 添加表皮生长因子EGF 添加减数分裂抑制剂 添加cAMP因子 可增加人IVM的成功率 可延迟IVM的卵母细胞减数分裂的恢复 可促进减数分裂的发生，有利于IVM的卵 母细胞的发育
添加卵泡刺激素 （FSH）培养
添加人绒毛膜促性 腺激素（hCG）培养
联合使用FSH和hCG 当体外培养卵母细胞时，联合使用FSH和hCG可进一步 提高获卵数、卵母细胞成熟率、种植率和临床妊娠率
三、卵母细胞体外成熟技术的优化和 临床应用评估
一般来讲，未成熟卵子需要在体外培养24～48小时，国际报道 的成熟率可以达到60～75%。这些体外成熟卵子可以体外受精 发育成胚胎，进行宫腔移植。
体外培养至成熟
卵母细胞的体外成 熟技术(IVM)是一项辅助 生殖技术，简单地讲就 是，将卵巢小卵泡中的 未成熟卵子取出，放在 模拟体内卵泡微环境的 培养液中进行体外培养 到成熟阶段，排出第一 极体，再进行体外授精 技术帮助受精，体外受 精过程与体内成熟的卵 子大同小异。
第二步： 体外受精
第三步： 胚胎移植
卵巢多囊综合征 （PCOS）患者
目 前 应 用
卵巢高度反应有卵巢过度 刺激综合征（OHSS）病史
卵巢不适于药物刺激而本 身又没有成熟卵泡生长 对自然周期IVF治疗同时取 出其余小卵泡（IVF/IVM）
Байду номын сангаас
一、卵母细胞体外成熟的定义、应用及其 发展现状
3、体外成熟技术安全吗？
这同样也是我们医护人员们最为关心 的问题。 IVM出生的孩子遍布世界各地， 目前全世界大概有5000～10000名体外成熟 卵试管婴儿健康成长。其妊娠率可达到与 体内成熟卵相当（35～50%）。结果表明， 较其他辅助生殖技术，IVM技术并没有增加 子代异常的风险 但是，毕竟卵母细胞体外成熟技术， 将使卵子暴露于体外条件更长时间，理论 上增加了卵子受培养环境影响的风险，在 基因编程、表观遗传学、伦理学等方面， 还需要更加深入的研究和探索。因此目前 该技术只是适用于特殊人群，还没有普及 到每一例试管婴儿
二、卵母细胞体外成熟的机理及其调控
与自然状态下和 传统的IVF等辅助生殖 技术中卵母细胞成熟 方式不同，IVM未成熟 卵母细胞的减数分裂 在体外完成，该过程 受如下多种因素影响： 1、取卵方式与时间 2、体外培养方法 3、IVM实施方案
取 卵方式 与时间
卵母细 胞体外 成熟
体 外培养 方法
卵母细胞体外成熟的 机制与临床应用
我将从以下三个方面陈诉：
一、卵母细胞体外成 熟的定义、应用及其 发展现状 二、卵母细胞体外成 熟的机理及其调控 三、卵母细胞体外成 熟技术的优化和临床 应用评估
一、卵母细胞体外成熟的定义、应用及其 发展现状 IVM Treatment
1、什么是卵母细胞的 第一步：取出 未成熟卵母细胞 体外成熟技术？
二维培养
三维培养
“两步法”
3、IVM实施方案 • 根据Gn使用情况，将IVM实施方案大致分为以下几种：
经典IVM方式 最早的IVM技术方案中不加入任何Gn。当卵泡直径达 到10～12 mm而未形成优势卵泡时结束培养。该方案 不仅适用于PCOS患者，还适用于排卵正常的个体 FSH对卵泡发育和卵母细胞成熟十分重要，FSH水平不 足或缺乏会影响排卵。在培养时加入小剂量FSH可增加 获卵数、体外培养成熟率以及妊娠率。一般在体外培 养的第3天加入100～150 U的FSH，连续3d至卵泡达到 10～12 mm 在培养时，加入hCG（一般为10000 U）有助于卵母细 胞减数分裂的恢复，并能够增加妊娠率。
培 养液添 加成分
1、取卵方式与时间
IVM取卵方式：
直接从阴道采集 从手术切除的体外卵巢组织上采集
IVM的卵母细胞恢复能力受 阴道采集时抽吸压力和针头型号 的影响：较高吸取压力（大约为 56 mm Hg）和较粗针头有利于 卵母细胞恢复。有文献报道，将 卵母细胞采集针反复在卵巢基质 上抽吸的过程中逐渐增加抽吸压 力，可采集到更多卵泡。
100um
2、体外培养方法
• 体外培养方法可分为如下几类：
微滴（一维）培养 将卵泡直接放在培养皿中进行一维法培养时，不 利于卵母细胞与其周围颗粒细胞之间的相互作用， 且卵泡因重力作用而失去三维结构，进而影响卵 母细胞生长
利用颗粒细胞或STO细胞在培养皿底部铺饲养层可 构建二维培养环境 在海藻酸钠水凝胶等特殊材料包裹后，包埋培养 可构造三维立体结构的卵泡培养环境 在三维培养环境中培养窦前卵泡至窦状卵泡阶段， 随后去除部分卵泡，使细胞密度降低，从而促进 卵母细胞生长，并最终获取成熟卵母细胞。