白血病微小残留病灶
急性髓系白血病微小残留病检测与临床解读
和NGS等方法在患者体内检测不到白血病细胞；部分MRD阴性患者可再 次转为MRD阳性导致晚期复发；部分患者获得临床治愈（图1）。
二、MRD的概念和检测方法
（二）分子学方法检测MRD
2．分子标志检测MRD的技术要求： 应用1 μg RNA逆转录为cDNA，每次反应的cDNA相当于100 ng RNA（约
为200 000个细胞，如果基因表达水平高则需要的细胞数量少）。 对于基于DNA的方法，每次反应需要至少100 ng DNA（约为15 000个细
此外，包括RUNX1、GATA2、CEBPA、DDX41和ANKRD26在内的某些 胚系基因突变与AML发生风险相关，如果把这些基因突变作为MRD评估 的标志，就需要应用DNA测序的方法除外它们是胚系组织（皮肤组织、 毛囊或颊黏膜）来源的突变。
多个MRD分子标志物组合应用可克服单个分子标志物评估MRD的缺陷， 该缺陷包括AML亚克隆的异质性和CHIP的存在对MRD的影响等。
二、MRD的概念和检测方法
二、MRD的概念和检测方法
二、MRD的概念和检测方法
（一）MFC检测MRD
用于MFC评估表型异常白血病细胞的单克隆免疫荧光抗体包括CD34、 CD117、CD13和CD33，跨系表达抗原CD2、CD7、CD19和CD56等。
利用MFC检测MRD的方法包括白血病相关异常表型（LAIP）以及与正常 骨髓细胞表型相鉴别（D-F-N，different from normal），前者是指初诊时 确定患者的LAIP，在随后的治疗过程中利用LAIP进行MRD检测；后者可 用于缺乏初诊LAIP的患者，也可检测治疗过程中出现的抗原漂移 （Antigen shift）。
微小残留灶检测
微小残留灶检测答：微小残留灶检测就是指白血病微小残留病灶。
白血病完全缓解后要定期检测微小残留病灶，白血病，尤其是急性白血病治疗达到完全缓解后，用常规的形态学方法不能检测到明显的白血病细胞，但此时体内仍存在少量的白血病细胞，一般来说，即使白血病达到完全缓解，仍要继续治疗，并定期检测MRD，根据MRD的水平调整治疗方法、方案及治疗时间，从而达到治愈的目标。
以急性白血病为例，初发病时，体内白血病细胞总数达1012以上，化疗后60％以上的成人患者可得到完全缓解（CR），但刚CR 时，即使骨髓及血液查不到明显的白血病细胞，骨髓原始细胞<5％，但体内白血病细胞总数仍有107-9；继续治疗，如果这些MRD不能被清除，最终导致复发，MRD是白血病复发的根源。
MRD的水平是判断治疗效果的关键指标，MRD升高可提前预示恶性血液病的全面复发，因此要定期检测MRD，来帮助选择治疗方式、治疗周期及方案。
目前检测MRD主要采用免疫学、染色体、及基因分析方法。
检测儿童白血病MRD的方法较多，其中定量PCR和FCM分析是最重要的方法，而且二者有很好的一致性，联合使用几乎可以检测出所有患儿的MRD。
FCM多参数分析白血病细胞的免疫表型，覆盖率广，适用于多数ALL患儿的MRD随访。
Borowitz等用FCM分析MRD的研究认为，诱导末期29d时骨髓MRD与预后关系密切，MRD在0.01％~0.1％的患者5aDFS更差。
目前PCR检测MRD的方法很多，其中以实时定量PCR最为敏感，灵敏度可达10-5~10-6，可在诱导缓解治疗结束后分析MRD，预测儿童ALL复发。
基因分析法是最敏感的方法，十万个细胞中有一个恶性细胞都能检测出来。
如果在初发病时检测出恶性细胞有某种（或某些）基因异常，以后可通过检测这些异常基因量来确定MRD。
染色体分析方法是最特异的方法，但敏感性仅能达到百分之一，同基因分析一样，如果在初发病时检测出恶性细胞有染色体异常，以后可通过检测染色体异常来确定MRD。
完全缓解急性白血病患者微小残留病的监测及其临床意义的开题报告
完全缓解急性白血病患者微小残留病的监测及其临床意义的开
题报告
一、研究背景
白血病是血液系统恶性肿瘤疾病之一，特点是骨髓或淋巴组织中存在大量异常细胞，导致正常血细胞受到抑制或代偿性增生，引起贫血、感染和出血等症状，危及生命。
随着白血病治疗的进步，尤其是多种化疗药物和造血干细胞移植等技术的应用，患者的生存期有了显著的提高。
然而，治疗过程中微小残留病的监测却成为了治疗方案制定、疗效判定和预后评估的重要指标。
微小残留病是指在化疗、放疗或干细胞移植等治疗结束后，血液或骨髓中仍存在极少数的癌细胞，虽然病情已经得到缓解，但极易引起复发。
因此，准确监测微小残留病的水平对于制定个性化的治疗方案、评估疗效和预测患者预后至关重要。
二、研究目的
本文旨在探讨完全缓解急性白血病患者微小残留病的监测和临床意义，以期为临床治疗提供参考依据和理论支持。
三、研究内容
1. 微小残留病的概念、类型和分类方法
2. 微小残留病监测的方法、指标和临床应用
3. 微小残留病与疾病预后的关系及其临床意义
4. 微小残留病监测在临床治疗中的应用
5. 微小残留病监测的前景及其存在的问题与挑战
四、研究意义
本文对完全缓解急性白血病患者微小残留病的监测及其临床意义进行了系统的探讨和总结，有利于促进治疗方案的个性化，提高患者的生存率和生命质量。
同时，探索微小残留病监测技术的进展和挑战，为临床医生提供了参考依据。
为了更好地开展研究，需要进一步加强医学科研团队的协作，建立统一的检测标准和质量控制体系，推广微小残留病监测技术的应用。
白血病微小残留检测及其质量控制(流式细胞术)
2. 流式细胞术是直接进行定量，更为精确；而PCR是根据 产物的量进行推算。
3. 流式细胞术检测时可以区别活细胞和经化疗将要死亡的 细胞以及死亡细胞的碎片（而这些死亡的细胞以及细胞 碎片在PCR检测中都可能形成阳性信号）。
上 海 市 临 床 检 验 中 心
Shanghai Centre for Clinical Laboratory
Fluorescent Standard
Obtain Results
Troubleshoot Maintenance
Color Compensation
Generate Report
FAIL
Process/ Method Control
PASS
Test Reimbursement
上 海 市 临 床 检 验 中 心
Shanghai Centre for Clinical Laboratory
Elaine Coustan-Smith, etal. Clinical importance of minimal residual disease in childhood acute lymphoblastic leukemia. Blood. 2000, 96(8):2691-2696
流式细胞术检测白血病MRD原理
利用抗原表达的差异，以直观的方式区分白血病 细胞和正常的骨髓细胞（正常生理状态下和骨髓重建期）
跨系表达的抗原 质的差异 时相混乱的抗原 与染色体异常相关的抗原 抗原表达量异常高 量的差异 抗原表达量异常低
上 海 市 临 床 检 验 中 心
Shanghai Centre for Clinical Laboratory
差异
白血病流式报告解读
白血病流式报告解读白血病是一种由于造血系统恶性克隆增生导致的恶性疾病，其发病率逐年上升。
流式细胞术是一项常用的检测手段，能够对白血病患者的血液样本进行细胞分析，并提供重要的诊断和治疗指导信息。
根据白血病流式报告，我们可以看到以下几个关键指标。
1. 免疫表型分析免疫表型分析是流式细胞术最重要的应用之一。
通过检测细胞膜上的特定免疫标记物，可以确定细胞的类型和分布。
在白血病患者中，免疫表型分析可以帮助鉴别不同的细胞系，如淋巴细胞白血病和骨髓细胞白血病。
2. 异常细胞群分析通过流式细胞术，我们可以分析样本中的异常细胞群。
在白血病患者中，异常细胞群的存在可以提供重要的诊断线索。
例如，在急性淋巴细胞白血病中，常见的异常细胞群为早幼B细胞和早幼T细胞。
而在急性髓细胞白血病中，异常细胞群则包括早幼髓细胞和原始髓细胞。
3. 异常免疫表型分析流式细胞术还可以通过检测细胞的免疫表型异常来帮助白血病的诊断和分类。
例如，在B淋巴细胞慢性淋巴细胞白血病中，CD5和CD23的共表达异常是其诊断的关键特征之一。
而在骨髓异常增生综合征中，CD34和CD117的共表达异常则是其诊断的重要标志。
4. 异常细胞比例分析流式细胞术可以通过测定样本中异常细胞的比例来评估疾病的严重程度。
在白血病患者中，异常细胞比例的增加通常与疾病进展和预后不良相关。
因此，通过流式细胞术的异常细胞比例分析，可以提供白血病患者的预后评估和治疗指导。
5. 微小残留病灶检测流式细胞术还可以用于微小残留病灶的检测。
在白血病患者接受治疗后，流式细胞术可以检测微小残留病灶的存在，从而评估治疗的疗效和预后。
通过流式细胞术的微小残留病灶检测，可以及早发现复发风险，采取相应的治疗措施。
白血病流式报告的解读可以通过免疫表型分析、异常细胞群分析、异常免疫表型分析、异常细胞比例分析和微小残留病灶检测等指标来进行。
这些指标不仅可以帮助白血病的诊断和分类，还可以评估疾病的严重程度、预后和治疗效果。
急性白血病完全缓解期检测微小残留病的临床意义
㊃论㊀㊀著㊃∗通讯作者急性白血病完全缓解期检测微小残留病的临床意义赵㊀兰,许惠利∗(上海健康医学院附属嘉定区中心医院血液科,上海,201800)摘㊀要:㊀目的㊀探讨急性白血病(acute leukemia,AL)获得完全缓解(complete remission,CR)后检测微小残留病(minimal residual disease,MRD)的临床意义㊂方法㊀所有患者初诊时均进行骨髓免疫分型检测,从首次诱导缓解治疗结束后第14天开始,每3个月检测一次MRD,并动态监测,同时进行骨髓形态学检查㊂结果㊀MRD <10-4复发率为22．2%,MRD >10-3复发率为77．8%,MRD >10-2复发率为100%㊂结论㊀经过20例患者的MRD 检测显示:MRD <10-4的复发率低,MRD ﹥10-3的复发率高,MRD ﹥10-2提示近期复发㊂因此,MRD 对早期复发的判断㊁及早干预治疗和治疗方案的选择有着明显的指导意义㊂关键词:㊀急性白血病㊀完全缓解㊀微小残留病㊀临床意义[中图分类号]㊀R733．7㊀㊀㊀㊀[文献标志码]㊀A㊀㊀㊀㊀[文章编号]1009-6213(2021)02-0193-03Clinical Significance of Detecting Minimal Residual Diseases in Complete Remission of Acute LeukemiaZHAO Lan,XU Hui-lI ∗(Department of Hematology,Jiading District Central Hospital Affiliated Shanghai University of Medicine &Health Sciences,Shanghai,201800,China)Abstract :㊀Objective ㊀To investigate the clinical significance of detecting microresidual disease(MRD)after complete remission of acute leukemia(AL)．method ㊀All patients were tested for bone marrow immunotyping at the first consultation．From the 14th day after the first induced remission treatment,MRD was tested every 3months,and dynamically monitored．Bone marrow morphology was also performed．Results ㊀MRD <10-4relapse rate of 27%,MRD >10-3recurrence rate is 82%,MRD >10-2The relapse rate of is 100%．Conclusion ㊀The MRD test of 20patients showed that the recurrence rate of MRD <10-4was low,the recurrence rate of MRD >10-3was high,and MRD >10-2suggested a recent recurrence．Therefore,earlydiagnosis,early intervention treatment and treatment options have obvious guiding significance．Key words :㊀Acute leukemia;Complete remission;Minimal residual disease;Clinical significance㊀㊀急性白血病(acute leukemia,AL)确诊时体内的白血病细胞数量大约为1010~1012,随着支持治疗的加强㊁多药联合方案的应用㊁大剂量化疗和HSCT 推广,AL 达到完全缓解(complete remission,CR)期较前有所提高,此时体内的白血病细胞数量降至108~109㊂据国外文献报道,大剂量化疗后完全缓解率约为50%~80%㊂CR 后复发是目前急性白血病面临的难题之一㊂近年来研究发现,微小残留病(minimal re-sidual disease,MRD)与白血病复发密切相关,体内残留的白血病细胞,为疾病复发的根源㊂为争取患者长期无病生存(disease-free survival time,DFS)和痊愈,必须对AL 患者的治疗方案进行优化,同时对MRD 进行动态监测,实时评估疗效,指导治疗及评价预后[1]㊂本研究通过对20例急性白血病缓解后的病人进行MRD 动态监测及分析,评价MRD 在指导治疗及早期预测复发的意义㊂1㊀资料与方法1．1㊀一般资料㊀收集20例患者均为上海健康医学院附属嘉定区中心医院2010年8月至2012年12月住院病人,统计截止日期为2018年12月底㊂根据㊃391㊃㊀血栓与止血学2021年第27卷第2期WHO MICM分型法确诊的AL患者,其中急性髓系白血病(AML)18例,急性淋巴细胞白血病(ALL)2例,年龄17~80岁,平均年龄为44岁,男10例,平均年龄为42．6岁,女10例,平均年龄为55岁㊂1．2㊀治疗方案㊀AML诱导缓解方案采用标准DA (柔红霉素+阿糖胞苷)㊁HA(高三尖杉酯碱+阿糖胞苷)㊁IA(去甲氧柔红霉素+阿糖胞苷)方案,ALL诱导缓解方案采用CVDP方案㊂巩固化疗AML采用DA㊁MA㊁HA㊁HD-Ara-C等,ALL采用CVDP㊁MA㊁HD-MTX 等方案,缓解期定期常规鞘注预防中枢神经系统白血病(CNSL)㊂1．3㊀临床完全缓解标准参照‘实用内科学“(第十五版)急性白血病CR 标准㊁成人急性髓系白血病中国诊疗指南(2017年版)㊁中国成人急性淋巴细胞白血病诊断与治疗指南(2016年版)㊂1．4㊀研究方法1．4．1㊀标本及仪器㊀抽取诱导治疗或强化治疗后患者的骨髓液进行骨髓涂片行细胞形态学分析,同时取EDTA抗凝骨髓液约3ml进行MRD检测㊂标本统一按照要求送达上海复旦大学新培晶临床分子研究中心,仪器采用美国BD公司FACS Calibur流式细胞仪㊂1．4．2㊀主要试剂㊀单克隆抗体购自美国BD公司,利用三色荧光(PE㊁FITC㊁PerCP)抗体直接标记法标记㊂1．4．3㊀MRD检测㊀所有患者初诊时均进行骨髓免疫分型检测,从首次诱导缓解治疗结束后第14天开始,每3个月检测一次MRD,并动态监测,同时进行骨髓形态学检查,收集100000个细胞㊂1．4．4㊀检测MRD的同时测定外周血血小板(PLT)计数和骨髓巨核细胞(MK)的变化判断白血病预后㊂2㊀结㊀㊀果2．1㊀MRD水平与复发的关系(表1)表1㊀20例AL患者CR后MRD水平与复发之间的关系MRD<10-492722．2% MRD<10-392277．8% MRD<10-2220100．0%㊀㊀MRD<10-4组一例M2患者,染色体检查示t(8;21),AML1/ETO融合基因表达㊂自认为预后良好,化疗未满三年即放弃治疗,回单位上班,9个月后复发㊂另一例M4患者CR近五年,行MRD检测提示MRD> 10-2,骨髓涂片原始细胞5%,随访骨髓检查,两个月后骨髓涂片原始细胞>20%㊂2．2㊀PLT㊁MK水平与复发的关系(表2)表2㊀PLT、MK水平与复发的关系MRD水平血象WBC Hb Plt骨髓象骨髓增加度原始细胞幼巨颗粒巨产板巨MRD<10-4CR5．8121133活跃0．5122314 MRD<10-4复发9．991133极度活跃2410189 MRD<10-3CR6．1113119活跃0．8132112 MRD<10-3复发11．18579极度活跃45978 MRD<10-2CR7．0104106活跃2．5111411 MRD<10-2复发10．57665极度活跃57753㊀㊀根据表1经过20例患者的MRD检测显示:MRD <10-4的复发率低,MRD﹥10-3的复发率高,MRD﹥10-2提示近期复发㊂因此,对早期复发的判断㊁及早干预治疗和治疗方案的选择有着明显的指导意义,并初步取得了良好的效果㊂根据表2急性白血病CR期,血小板在正常值㊁巨核细胞数量明显增加,以颗粒㊁产板巨增加为主㊂复发时血小板㊁巨核细胞总数减少,以幼巨㊁颗粒巨为主,产板巨减少明显㊂3㊀讨㊀㊀论AL患者初发时体内约有1012个白血病细胞,经过化疗后杀伤4个对数级后即可达到临床完全缓解(complete remission,CR),实际体内还有约108个白血病细胞,如果白血病细胞对化疗药物敏感,体内白血病细胞可以降得更低,例如白血病细胞﹤105㊂然而,目前常规检测白血病细胞数量为骨髓涂片计数的方法,原始细胞﹤5%即认为CR,实际体内残留的白血病细胞数无法计算㊂易造成AL患者的治疗不足或过度治疗㊂治疗不足易造成复发,过度治疗易出现致命性并发症[2]㊂因此,AL治疗后体内有多少残留白血病细胞,巩固治疗如何实施成为目前AL治疗的瓶颈㊂新近提出的微小残留病(minimal residual disease, MRD)是指恶性血液病经过治疗达到血液学完全缓解㊃491㊃㊀Chinese Journal of Thrombosis and Hemostasis2021Vol27No2㊀后体内残存的通过形态学等传统方法无法检测到的任何水平的微量肿瘤状态[3-4]㊂MRD能准确定量残留白血病细胞数,敏感度达到10-4~10-5㊂而基于MRD指导下的个体化治疗可以使不同危险度分层组中的患者避免过度治疗或治疗不足,以提高患者的长期生存率[5]㊂临床根据MRD水平高低,可以判断AL 患者对治疗的反应和预后,同时能早期预测复发,为早期干预提供有力依据㊂研究表明:MRD可作为AL 缓解和治愈的标准[6]㊂本研究中,我们对AL病人进行FCM(flow cytom-etry)的白血病细胞标记,然后观察AL患者经过治疗获得CR后骨髓中MRD的变化情况,定期监测CR病人的MRD变化情况,根据其变化选用合适的治疗方案㊂MRD作为白血病独立的预后因素,使AL的缓解标准由细胞水平提升到分子水平[7]㊂本研究的目的就是探讨MRD在监测AL复发前期的改变和及时干预治疗的应用价值㊂参照国外研究现状:San Miguel等根据MRD检测水平将AML获得CR的患者分为4组,即:MRD< 10-4㊁10-4~10-3㊁10-3~10-2㊁>10-2,随访观察发现,各组3年复发率分别为:0㊁14%㊁45%㊁85%[8]㊂Coustan Smith等应用多参数FCM研究MRD与预后的关系,发现以MRD检测10-4为标准,其5年复发率<10-4以下组为6．1%㊁>10-4以上组高达23%[9]㊂意大利学者Renato Bassan．等根据MRD结果分为:MRD阴性(﹤10-4)㊁MRD阳性(﹥10-4)[10]㊂MRD阴性者结束巩固治疗后进入为期2年的维持治疗㊂MRD阳性患者最好接受异基因干细胞移植,不能接受干细胞移植者,可以进行强化治疗+自身外周血干细胞支持㊂国内研究现状:在过去的10年中,随着FCM水平的不断提高,特别是8~10色MP-FCM在MRD检测中体现出敏感性高㊁特异好㊁适用范围广的优势,MRD的FCM检测从小规模样本的临床研究发展到大规模样本的临床验证,目前已成为恶性血液病临床疗效判断和预后分层的重要依据㊂初治AL患者经标准化疗后,虽然5年生存率达到40%~50%,但部分患者在2~3年内相继复发,其根源是患者体内残留的白血病细胞㊂学术界一致推荐把MRD检测作为白血病个体化治疗和预后判断的重要依据㊂与传统的形态学比较其创新点是能精确地定量残存白血病细胞数,敏感度达到10-4~10-5,而且该方法具有快捷㊁简便㊁敏感㊁特异的特点,值得推广和应用㊂参考文献[1]㊀MAURILLO L,BUCCISANO F,SPAGNOLI A.Monitoring ofminimal residual disease in adult acute myeloid leukemia u-sing peripheral blood as an alternative source to bone mar-row.HAEMATOLOGICA,2007[2]㊀M.J.BOROWITZ,M.DEVIDAS,S.P.HUNGER,et al.Clinical significance of minimal residual disease in child-hood acute lymphoblastic leukemia and its relationship toother prognostic factors:a Children s Oncology Group stud-y.Blood,June15,2008;111(12):5477-5485. [3]㊀HOKLAND P,OMMEN HB,MULE MP,et al.Advancing theMinimal Residual Disease Concept in Acute Myeloid Leuke-mia[J].Semin Hematol,2015,52(3):184-192. [4]㊀OSSENKOPPELE GJ,SCHUURHUIS GJ.MRD in AML:Itis time to change the definition of remission[J].Best PractRes Clin Haemetol,2014,27(3-4):265-271.DOI:10.1016/j.beha.2014.10.008.[5]㊀WOOD BL.Principles of minimal residual disease detectionfor hematopoietic neoplasms by flow cytometry[J].Cytome-try B Clin Cytom,2016,90(1):47-53.DOI:10.1002/cyto.b.21239.[6]㊀AL-MAWALI,D.GILLIS,I.LEWIS The Role of Multipa-rameter Flow Cytometry for Detection of Minimal ResidualDisease in Acute Myeloid Leukemia Am J Clin Pathol,Janu-ary1,2009;131(1):16-26.[7]㊀D.CAMPANA Minimal Residual Disease in Acute Lympho-blastic Leukemia Hematology,December1,2010;2010(1): 7-12.[8]㊀SAN-MIGUEL JF,VIDRIALES MB,L6PEZ-BERGESC,etal.Early Immunophenotypical evaluation of minimal residualdisease in acute nueloicl.Leukemia identifies different pa-tient risk groups and may contribute to postinduction treat-ment stratification.Blood.2001,98(6):1746-1751. [9]㊀COUSTAN-SMITH E.BEHM FG,SANCHEZ J,et al.Immu-nological detection of minimal residual disease in childrenwith acute lymphoblastic ncet.1998.351(9102):550-4.[10]RENATO BASSAN.et al.Improved risk classification forrisk-specific therapy based on the molecular study of mini-mal residual disease(MRD)in adult acute lymphoblasticleukemia(ALL) 2009by The American Society of He-matology(收稿日期:2020-10-20)㊃591㊃㊀血栓与止血学2021年第27卷第2期。
急性髓系白血病微小残留病灶的检测
急性髓系白血病微小残留病灶的检测袁靖;朱明清;戴兰;沈文红;金力蕾;白霞;阮长耿【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2015(12)A01【摘要】目的探讨流式细胞术（FCM）检测急性髓系白血病（AML）患者微小残留病灶的特点及临床意义。
方法对60例急性髓系白血病（AML）患者采用CD45／SSC双参数散点图设门的方法进行四色流式细胞术微小残留病灶的动态监测。
结果60例急性髓系白血病（AML）患者异常免疫表型的出现频率为：交叉系列抗原表达占35％，抗原缺失占55％，抗原过度表达占6．7％，不同期抗原共表达仅占3．3％。
结论利用流式细胞术（FCM）能够对AML患者进行MRD动态监测，对治疗评估、预测预后及提示复发有重要意义。
【总页数】3页(P163-165)【关键词】急性髓系白血病;流式细胞术;微小残留病灶;免疫表型【作者】袁靖;朱明清;戴兰;沈文红;金力蕾;白霞;阮长耿【作者单位】苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所,江苏苏州215006【正文语种】中文【中图分类】R733.71【相关文献】1.多参数流式细胞仪在检测急性髓系白血病微小残留病灶中的运用 [J], 魏佳(综述);李惠民(审校)2.CD7抗原在急性髓系白血病微小残留病灶检测中的应用研究 [J], 栾春来;孟君霞;何孜岩;张晓南;唐广;陈杰甫;武永强3.流式细胞术动态监测微小残留病灶在急性髓系白血病中的意义 [J], 孙丽丽;李慧波;孔德胜;陈文佳;徐秉岐;李英花4.急性髓系白血病微小残留病灶检测方法的建立及其应用 [J], 赵佳琪;李伟静;王旭;郑亮亮;宋玉国5.急性髓系白血病患者WT1基因表达水平及其在微小残留病灶监测中的临床意义[J], 宁可;王海峰;徐莉;李丽宁因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
《急性髓系白血病微小残留病检测与临床解读中国专家共识》PPT课件
微小残留病检测可以检测患者体内残 留的白血病细胞，有助于预测患者的 复发风险，为制定个性化治疗方案提 供依据。
微小残留病检测在巩固治疗中的应用
监测病情变化
在巩固治疗期间，通过微小残留病检测可以实时监测患者病情变化，及时发现复发迹象，调整治疗方 案。
指导治疗决策
根据微小残留病检测结果，医生可以判断患者是否需要继续巩固治疗或调整治疗方案，提高治疗效果 。
《急性髓系白血病微小残留病检测 与临床解读中国专家共识》
2024-01-08 汇报人：xxx
contents
目录
• 引言 • 急性髓系白血病概述 • 微小残留病检测方法及原理 • 微小残留病检测结果解读 • 微小残留病检测在急性髓系白血病治疗
中的应用 • 微小残留病检测的挑战与展望 • 总结与建议
共识由国内急性髓系白血病领域 的临床专家、实验室检测专家以 及方法学专家共同组成。
制定流程
通过文献回顾、专家讨论和会议 研讨等方式，对急性髓系白血病 MRD检测的相关问题进行深入探 讨，并最终形成共识意见。
证据等级和推荐强
度
根据现有研究证据的质量和数量 ，对共识意见进行证据等级和推 荐强度的评估，以确保共识的科 学性和实用性。
未来发展方向及展望
技术创新
多学科合作
继续研发高灵敏度、高特异性的检测技术 ，提高微小残留病检测的准确性。
加强临床医学、生物学、生物信息学等多 学科的交叉合作，推动微小残留病检测技 术的快速发展。
标准化与规范化
普及与应用
建立统一的检测标准和规范，提高不同实 验室和检测方法之间结果的可比性和一致 性。
灵敏度与特异性
当前微小残留病检测方法在灵敏度和特异性方面仍存在一 定局限性，难以准确检测出低水平的残留病灶。
分子生物学技术在白血病诊断中的应用
分子生物学技术在白血病诊断中的应用白血病是一种由于骨髓或淋巴系统中白血细胞恶性增生导致的血液系统疾病。
分子生物学技术在白血病的诊断和治疗中发挥了重要作用。
本文将从以下几个方面介绍分子生物学技术在白血病诊断中的应用。
一、基因突变检测白血病的发生与基因突变密切相关。
分子生物学技术可以检测白血病相关基因的突变，如BCR-ABL、FLT3、NPM1等。
其中，BCR-ABL基因突变是慢性髓性白血病的典型突变，可以通过荧光原位杂交（FISH）和聚合酶链式反应（PCR）等技术进行检测。
FLT3基因突变与急性髓性白血病的预后密切相关，可以通过PCR和基因测序等技术进行检测。
NPM1基因突变是急性髓性白血病中最常见的突变，可以通过PCR和基因测序等技术进行检测。
二、白血病细胞克隆性检测白血病细胞的克隆性检测是白血病诊断的重要指标之一。
分子生物学技术可以检测白血病细胞的克隆性，如PCR和FISH技术可以检测白血病细胞的克隆性，从而确定白血病的诊断和预后。
三、微小残留病灶检测微小残留病灶是指在治疗后，白血病细胞仍然存在但数量非常少的情况。
分子生物学技术可以检测微小残留病灶，如实时荧光定量PCR技术可以检测微小残留病灶，从而评估治疗效果和预后。
四、药物敏感性检测分子生物学技术可以检测白血病细胞对药物的敏感性，从而指导临床治疗。
例如，PCR技术可以检测BCR-ABL基因的药物敏感性，从而指导慢性髓性白血病的治疗。
总之，分子生物学技术在白血病诊断和治疗中发挥了重要作用。
基因突变检测、白血病细胞克隆性检测、微小残留病灶检测和药物敏感性检测等技术的应用，可以提高白血病的诊断准确性和治疗效果，从而改善患者的预后。
微小残留病灶检测判断急性淋巴细胞白血病预后的临床研究
微小残留病灶检测判断急性淋巴细胞白血病预后的临床研究作者：彭丽萍来源：《中国医学创新》2015年第31期【摘要】目的：探讨微小残留病灶（MRD）检测对急性淋巴细胞白血病（ALL）预后判断的临床价值。
方法：选取本院收治的120例ALL患者作为研究对象，于诱导缓解治疗第33天、维持治疗第3个月分别对患者进行骨髓MRD检测，统计MRD阳性及阴性患者不同危险度及不同治疗时期的复发情况，同时比较诱导缓解治疗第33天不同骨髓缓解状况下MRD水平。
结果：诱导缓解治疗第33天以及维持治疗第3个月，高危组的MRD阳性率均显著高于中危组及低危组，差异有统计学意义（P【关键词】微小残留病灶；急性淋巴细胞白血病；预后；复发【Abstract】 Objective：To investigate the clinical value of the detection of minimal residual disease （MRD） in the prognosis of acute lymphoblastic leukemia （ALL）. Method：120 patients with ALL were selected as the research objects，they were treated in the induction of remission in thirty-third days and maintenance therapy in the third months with bone marrow MRD detection， the MRD positive and negative patients with different risk and treatment period of relapse were compared. At the same time，the different bone marrow MRD levels of the induction of remission in thirty-third days were compared.Result：The induction of remission in the treatment of the thirty-third days and maintenance therapy in the third months， MRD positive rate of high risk group was significantly higher than that in middle risk group and low-risk group， the differences were statistically significant（P【Key words】 Minimal residual disease； Acute lymphoblastic leukemia； Prognosis；RecurrenceFirst-author’s address：People’s Hospital of Pingxiang City in Jiangxi Province，Pingxiang 337000，Chinadoi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.31.009近年来，随着白血病化疗、靶向治疗及干细胞移植技术的不断发展，急性淋巴细胞白血病（Acute lymphoblastic leukemia，ALL）的治愈率得到显著提高，部分发达国家已经超过80%，但仍有20%的患者存在复发，复发后的治愈率则显著下降[1]。
《急性髓系白血病微小残留病检测与临床解读中国专家共识》PPT课件
技术挑战与改进方向
灵敏度与特异性
提高检测方法的灵敏度和特异性，减少假阳性和假阴 性结果。
多参数检测
开发能够同时检测多种标志物的技术，提高检测的全 面性和准确性。
标准化与质量控制
建立标准化的操作流程和质量控制体系，确保检测结 果的准确性和可重复性。
临床解读的困难与对策
其他检测技术
免疫学技术
利用免疫学原理，通过特异性抗体与 白血病细胞结合，实现对微小残留病 的检测。包括免疫荧光、免疫组化等 方法。
细胞遗传学技术
新兴技术
包括基于新一代测序技术的基因突变 检测、基于质谱技术的蛋白质组学分 析等，为微小残留病的检测提供了新 的手段。
利用染色体核型分析、FISH等技术对 白血病细胞的遗传学异常进行检测， 从而评估微小残留病的情况。
临床解读
深入探讨了微小残留病检测结果与预后的关系，以及如何根据检测结 果调整治疗方案。
专家建议
针对目前存在的问题和挑战，提出了具体的改进措施和建议，包括完 善检测标准、提高检测灵敏度、加强临床与实验室沟通等。
展望未来发展趋势
技术创新
随着科技的不断发展，新的检测技术将不断涌现，如单细 胞测序、液体活检等，有望提高微小残留病检测的准确性 和灵敏度。
缺点
对操作人员技术要求较高，且抗体选择和标记方法可能影响检测结果 。
分子生物学技术检测
原理
利用PCR、RT-PCR等分子生物学技术对白血病特异性基因 或融合基因进行扩增和检测，从而实现对微小残留病的分
子水平监测。
优点
具有高灵敏度、高特异性等优点，能够在分子水平上检测 白血病细胞的残留情况。
缺点
可能受到样本质量、引物设计等因素的影响，且部分方法 操作复杂、成本较高。
微小残留病灶(MRD)监测在慢性淋巴细胞白血病(CLL)中的应用进展
404复2孝旅（医学版）F u d an U n iv J M ed S ci2019 May, 46(3)微小残留病灶(MRD)监测在慢性淋巴细胞白血病(CLL)中的应用进展任雨虹(综述）刘澎△(审校）(复旦大学附属中山医院血液科上海200032)【摘要】慢性淋巴细胞白血病（chronic lymphocytic leukemia,CLL)是西方国家最常见的成人白血病，在我国的 发病率也日益增加。
近年来针对CLL的新药层出不穷，微小残留病灶(minimal residual disease，MRD)监测逐渐 成为评估疗效的重要手段。
本文总结了目前常用的MRD检测方法，包括流式细胞学和基于PCR法的分子学检 测，并介绍了其在初治CLL疗效评价、预后评估和在移植后CLL复发预警方面的应用进展。
【关键词】慢性淋巴细胞白血病(CLL);微小残留病灶(MRD);监测【中图分类号】R733, 72 【文献标识码】B doi： 10. 3969/j.issn.1672-8467. 2019. 03. 019 Progress of minimal residual disease (MRD) monitoring inchronic lymphocytic leukemia (CLL)REN Yu-hong, LIU PengA(Department o f Hematology，Zhongshan H ospital，Fudan University ’Shanghai 200032,China)【Abstract】Chronic lymphocytic leukemia (CLL) is the commonest adult leukemia in Western countries. Recent years has witnessed an increasing incidence rate in China. Since new agents have been developed over the decades»minimal residual disease (MRD) monitoring became an efficient way to assess the treatment effect. Here we reviewed the common methods to test MRD including flow cytometry and molecular detection methods based on PCR technique. Also we introduced the progress of MRD monitoring in response and prognostic assessment in newly-treated CLL patients and early relapse detection in CLL patients after allogenic stem cell transplantation.【Key words】chronic lymphocytic leukemia (CLL) ；minimal residual disease (MRD) ; monitoring * This work was supported by the National Natural Science Foundation of China (81570123).慢性淋巴细胞白血病（chronic lymphocyticleukemia，CLL)是一种成熟B淋巴细胞克隆增殖性 肿瘤，以淋巴细胞在外周血、骨髓、脾脏和淋巴结聚 集为特征，在西方国家的年发病率为4.2/10万，80 岁以上人群年发病率甚至超过30/10万[1]。
白血病要定期检测微小残留 不要轻视它
白血病微小残留病是指在白血病经诱导化疗获完全缓解后或是骨髓移植治疗后，体内仍雍留有少量白血病细胞的状态。它是衡量患者病情缓解程度以及病情是否复发的重要指标。
白血病微小残留病对患者的意义
1、检测白血病在经过治疗后是否缓解，以及缓解的程度，以便调整治疗方案;
由此可见，白血病患者在经过治疗后，虽然已经达到完全缓解，但也不能轻次复发。
因此，即便经过化疗已经达到完全缓解的程度，白血病患者也要继续巩固治疗。中医药在对于白血病缓解之后针对微小残留病的消除上面作用是非常明显的。
首先，中药治疗白血病可帮助患者减轻化疗药物所产生的毒副作用;
其次，通过中草药的调理可以增加患者自身的免疫力，增加对疾病的抵抗力，提升治疗过程中病情的缓解。
2、监测白血病是否存在复发的迹象，可尽早进行干预
3、检测白血病微小残留病，确定是否达到治愈的目标。
急性白血病经治疗达到完全缓解后，很多患者就认为已经治好了，从而忽略了对病情的监测。需要提醒的是，即便白血病完全缓解后，大多数患者体内都存在或多或少的微小残留病，而这是白血病复发的根源。而化疗在理论上可以完全消灭微小残留病，但是实际上很难做到。
白血病微小残留病灶
MRD 检测在AML中的应用
❖ 评价AML治疗预后因素
❖ 诱导治疗后白血病细胞负荷减少程度及达到 CR时间被认为是提示预后的独立因素
❖ MRD检测目的：预示分子学复发,尽早解救治疗
特殊遗传学改变的AML
❖ 最常见的三种染色体改变及融合基因
- t8;21q22;q22
AMLI-ET0
- t15;17q22;q11-22 PML-RARA
Imatinib一线治疗12个月分子生物学治疗反应与无 进展生存
% 无疾病进展
100
98%
90
90%
80
75%
70
60
50
p<0.001
40
下降>=3对数级 30
20
下降<3对数级
n=136 n= 94
10
获得完全细胞遗传学治疗反应 n=
0 0 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 33 36 39 42 45 48 51
Burnett AK,et al.Blood1999;93:4131
巩固治疗结束后MRD状态与复发的关系
RT-PCR RT-PCR
P
+
-
N
7
69
3yr
57%
Relapse
27%
0.006
Italian GIMEMA-AIEOP Trial——AIDA protocol Breccia M,et
al.Haematologica2004;89:29
to the 75%-percentile of the expression level of the respective fusion transcript
血液病微小病灶残留（MRD）检测的意义。
血液病微小病灶残留（MRD）检测的意义。
核心提示：白血病初诊时，患者体内的白血病数量为10的12方～10的13方。
诱导治疗缓解后，虽然骨髓常规检查时显微镜下已经看不到白血病细胞了，但患者体内的白血病细胞仍然有10的8方～10的9方，这就是微小残留白血病（minimalresidualdisease，MRD）。
白血病初诊时，患者体内的白血病数量为10的12方～10的13方。
诱导治疗缓解后，虽然骨髓常规检查时显微镜下已经看不到白血病细胞了，但患者体内的白血病细胞仍然有10的8方～10的9方，这就是微小残留白血病（minimalresidualdisease，MRD）。
所以白血病需要多次巩固和强化治疗以进一步减少体内白血病的数量。
研究表明，如果治疗第33天的MRD能达10-4以下，今后复发的可能性就非常小了。
如果MRD到第12周还在10-4以上，复发的可能性就较大。
那么，如何检测MRD呢？目前常用的方法有多种，对儿童白血病来说，主要有两种方法：流式细胞学检测和PCR方法检测。
美国StJude儿童研究医院（美国治疗儿童白血病最好的医院）主要采用流式细胞学检测，而欧洲最大的儿童白血病协作组则主要采用PCR方法检测。
但不管用什么方法检测，前提都必须是：在初诊时需要找到该患者白血病细胞特有的标志，打个比方，A患儿的白血病细胞有一个三角形的标志，B患儿的白血病细胞有一个圆形的标志，那么在今后的MRD追踪检测时，对A患儿就去找三角形的标志，对B患儿就去找圆形的标志。
所以如果在初诊时没有确定该患儿特有的白血病标志，那么在缓解后也就没有办法做MRD检测了。
大家看到这里，可能觉得“MRD检测不难啊”。
其实不然，白血病细胞绝不像我举例的那么简单，因为每个患者白血病细胞的特异标志不尽相同，并且白血病细胞上还带有很多正常细胞的标志以逃脱机体的免疫监视。
所以如何确定白血病细胞特有的标志最为关键。
如果白血病细胞有特异的染色体易位或融合基因，那就相对比较容易确定和监测。
白血病生物标志物
白血病生物标志物
白血病生物标志物是指可以用于诊断和监测白血病的生物分子或细胞特征，包括以下几类：
1. 染色体异常：白血病患者细胞的染色体异常可以帮助诊断白血病，例如染色体易位、缺失、乘法、倒位等。
2. 形态学特征：通过显微镜观察血液或骨髓中异形细胞的形态、大小、核质比等特征，可以帮助诊断白血病。
3. 免疫学特征：白血病患者细胞的免疫学特征包括表面抗原、细胞因子受体、免疫球蛋白等，这些特征可以用于鉴别不同类型的白血病。
4. 分子遗传学特征：从白血病细胞中检测出的分子遗传学特征，如基因突变、表达改变、DNA甲基化等，可以辅助诊断白血病、预测预后以及选择治疗方案。
5. 微小残留病灶（MRD）：在治疗完白血病后，通过检测微
小残留病灶的存在与否，可以评估治疗效果和预测复发风险。
常用的MRD检测方法包括流式细胞术、聚合酶链反应等。
6. 血液学指标：白血病患者血液学指标常常异常，如白细胞计数、血红蛋白水平、血小板计数等，可以用于评估疾病活动程度和预测预后。
白血病患者的护理常规
白血病患者的护理常规白血病（1eukemia）是一类造血干细胞的恶性克隆性疾病，因白血病细胞自我更新增强、增殖失控、分化障碍、凋亡受阻，而停滞在细胞发育的不同阶段。
在骨髓和其他造血组织中，白血病细胞大量增生累积，使正常造血受抑制并浸润其他器官和组织。
根据白血病细胞的成熟程度和自然病程,将白血病分为急性和慢性两大类。
在恶性肿瘤所致的死亡率中，白血病居第6位（男性）和第8位（女性），但在儿童及35岁以下成人中则居第1位。
【病因与发病机制】可能与病毒感染、自身免疫功能异常、X射线、苯及其衍生物、遗传因素等有关。
一、急性白血病急性白血病（A1）是造血干细胞的恶性克隆性疾病，发病时骨髓中异常的原始细胞及幼稚细胞大量增殖并抑制正常造血，广泛浸润肝、脾、淋巴结等各种脏器。
国际上常用的法美英FAB分类法将A1分为急性淋巴细胞白血病（A11）和急性髓系白血病（AM1）。
A11又分为3个亚型，包括11型，12型，13型。
AM1又分为8个亚型，包括急性髓细胞白血病微分化型（Mo）、急性粒细胞白血病未分化型（M1）、急性粒细胞白血病部分分化型（M2）、急性早幼粒细胞白血病（AP1,M3）、急性粒一单核细胞白血病（M）、急性单核细胞白血病（M5）、急性红白血病（Mg）、急性巨核细胞白血病（M）。
【临床表现】A1起病急缓不一。
急者可以表现突然高热，类似“感冒”,也可以是严重出血。
缓慢者常为脸色苍白、皮肤紫瘢，月经过多或拔牙后出血难止而就医时被发现。
1.贫血常为首发症状，呈进行性加重，半数患者就诊时已为重度贫血。
2.发热白血病本身能引起发热，但大多数由继发感染所致，主要表现为持续低热或高热甚至超高热，可伴畏寒、出汗等。
感染可发生在各个部位，以口腔炎、牙龈炎、咽峡炎最常见。
长期应用抗生素者，可出现真菌感染。
3.出血出血可发生在全身各部位，以皮肤瘀点、瘀斑、鼻出血、牙龈出血、月经过多为多见。
眼底出血可致视力障碍，严重时发生颅内出血而导致死亡，AP1易并发DIC而出现全身广泛性出血。
微小残留病变检测在急性淋巴细胞白血病治疗中的意义
微小残留病变检测在急性淋巴细胞白血病治疗中的意义摘要】微小残留病变检测（MRD）在急性淋巴细胞白血病治疗中发挥重要的作用，它可以提高临床结果的精确度。
MDR检测的目的是提高分子生物学水平的CR标准，为临床判断、治疗以及预后等方面提供正确的诊断。
微小残留病变检测在急性淋巴细胞性白血病的检查诊断中得到全面的应用，本文对白血病微小残留病的定义、方法学及临床应用进行综述，探究微小残留病变检测在急性淋巴细胞白血病治疗中的重要意义。
【关键词】微小残留病变检测急性淋巴细胞白血病临床意义【中图分类号】R55 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）19-0131-02微小残留白血病（minimal residual disease，MRD），是指经过化疗后使患者的病情处于良好的控制程度，但是骨髓中仍存在形态上不能检测到的白血病细胞，造成白血病的复发几率。
所以提高MRD的检测率才能提高治疗的成功率[1]。
目前，评价MRD的标准基本上已经一致：在AML和ALL患者形态学正常的骨髓中，通过流式细胞仪检测到的最具有评估预后价值的指标为白血病细胞数在0.028％左右。
现报道，微小残留病变检测在急性淋巴细胞白血病治疗中的意义。
1.急性淋巴细胞白血病特征急性淋巴细胞白血病的发病对象一般都是年纪比较小的儿童，男性患者居多，发病高峰年龄在四岁左右。
据研究，导致急性淋巴细胞白血病主要因素是骨髓、脾脏以及淋巴结无限增殖。
儿童白血病早期都患有严重的贫血，他们的临床症状表现为：全身发热、呕吐恶心、惊厥昏迷、口腔牙龈以及颅内大出血、肝脾和淋巴结部位肿大等。
急淋的治疗主要包括：诱导治疗、巩固治疗、庇护预防、维持和加强治疗。
我们可以根据患者病情的严重程度和转化程度，再及时选择可行性的治疗方案，提高完全缓解率[2]。
2.微小残留病变检测在急性淋巴细胞白血病中的临床应用核型分析、荧光原位杂交（FISH）、流式细胞术（FCM）以及Southern blot等方法组成MDR检测的重要方法。
mrd评分标准
mrd评分标准
MRD（微小残留病）的评分标准主要是根据骨髓液检测结果来确定，是血液肿瘤的评估标准。
MRD检测结果小于0.1%为正常状态，说明体内不存在微小残留病灶，已经实现了临床治愈，病情复发的可能性比较低。
而MRD结果大于0.1%则提示体内存在对治疗无任何反应或抗药性的变异细胞，后期复发率相对较大。
对于急性淋巴细胞白血病患者，治疗期间需要接受大化疗，每次大化疗后都会进行MRD检测，以评估治疗效果和确定最佳的治疗方案。
目前这项技术是最近几年才有的，可以更准确地判断病人体内的坏细胞情况，给医生确定最后的治疗方案提供参考。
此外，在骨髓穿刺检查结束后，应当做好局部护理，注意卧床休息，防止感染。
疾病治疗期间也需养成良好的饮食和生活习惯，有助于疾病恢复。
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Initial Therapy of AML
Diagnosis
• Complete remission (CR) must be attained to cure patient • CR defined as:
— Clearance of peripheral blood & bone marrow of leukemic blasts — Reconstitution of normal hematopoiesis — Resolution of leukemic infiltrates
白血病细胞负荷
初次诊断 --- 1012 形态学缓解 --- 1010以下 分子学缓解 --- 约106-107
Acute leukemia and CML
Concept of minimal residual disease (MRD)
Cell number
1012 1010
Morphological detection limit
在PCR反应体系中加入荧光基 团，利用荧光信号累积实时监 测整个PCR进程，最后通过标 准曲线对未知模板进行定量分 析的方法。 实现了PCR从定性到定量的飞 跃，它以其特异性强、灵敏度 高、重复性好、定量准确、速 度快、全封闭反应等优点成为 了分子生物学研究中的重要工 具 目前real-time Q-PCR实验成本 比较高，且各实验室标准不一， 从而也限制了其广泛的应用。
inv(16)(p13q22)/t(16;16) CBFP-MYHII
见于约10%AML患者，主要为M4EO
带有该染色体融合基因者化疗缓解率高，但
中枢神经系统白血病的发生率也较高 定性测定其阳性对预后评估并无价值，甚至 有矛盾结果，同AML1-ETO,定量PCR显示出 对提示长期预后的作用
Prognostic relevance of fusion gene expression levels at diagnosis. Overall survival (OS) and event-free survival (EFS) for patients separated according to the 75%-percentile of the expression level of the respective fusion transcript
t(8;21)(q22;q22)
AMLI-ET0
最为常见的AML染色体异常,见于12-15%AML患者,主要为 M2b,少数见于M4和儿童ALL,并常见于年轻人
可伴有其他染色体异常,最常见为X或Y染色体缺失 携有该染色体的白血病细胞可分化至较成熟粒细胞,对化疗敏 感性较好，是克隆性染色体异常中预后相对较好的一类，但 仍有大于1/3患者最后复发 监测AML1-ETO是否阳性对提示长期预后意义有限，近年来 QRT-PCR定量监测其动态变化已显示出价值
MRD 检测在AML中的应用
评价AML治疗预后因素
诱导治疗后白血病细胞负荷减少程度及达到
CR时间被认为是提示预后的独立因素
MRD检测目的：预示分子学复发，尽早解救治疗
特殊遗传学改变的AML
最常见的三种染色体改变及融合基因
- t(8;21)(q22;q22) AMLI-ET0 - t(15;17)(q22;q11-22) PML-RARA - inv(16)(p13q22)/t(16;16) CBFP-MYHII *约占所有AML染色体改变的20%，具有以上改变者预 后良好 ,但仍 有10-30%治疗失败
血液学复发 CT
血液学复发 CT+allo-SCT 3 died; 2 in CCR(62,74) 血液学复发 CT+ASCT 2 died of the disease
结论:MRD持续阳性者宜尽早移植
维持治疗期间和以后的MRD监测
MDR监测适合于高危组患者，低危组患者似乎不需要监测 目前推荐：高危组患者巩固治疗后1年内每1-2个月检测1次， 第2、3年每3个月1次 目前常用非定量RT-PCR，Q-RT-PCR的临床应用价值有待 确定，但认为动态监测融合基因定量变化可为评估预后提 供有益信息，便于调整治疗方案 巩固治疗后RT-PCR持续阴性与长期生存密切相关 一旦转为阳性提示即将血液学复发，需及时治疗
Remission Induction Post-remission Therapy
Consolidation Chemotherapy
SCT
定义
Minimal residual disease(MRD)---微小残留病
指白血病诱导化疗完全缓解后或者骨髓移植后残留在体内少 量白血病细胞的状态,可能是导致白血病复发的根源
优点：FISH具有安全、快速、灵敏度高、探针能长期保存、 能同时显示多种颜色等优点,不但能显示中期分裂相,还能显 示于间期核.
Interphase and metaphase FISH demonstrating a variant of the Philadelphia chromosome. The genes that are rearranged are: BCR(green on chromosome 22)/ABL (orange on chromosome 9) The Ph’ translocation appears as dual fusion (yellow) signals.
染色体核型分析
常用染色体显带技术检测出染色体畸变,但其
成功率依赖于标本中分裂象细胞的数量多少， 从而使得检测结果各不相同，且敏感度较低， 约1：20
FISH fluorescence
in situ hybridization
用荧光素标记染色体特异性探针和特异性基因的DNA探针， 通过与间期细胞核DNA或中期染色体DNA原位杂交识别染色 体数目和结构的异常，可以进行定性、定位和相对定量分析 。
实验室 标准化基线 MMR 数 值*
Adelaide
80%
0.08%
London
Seattle
45%
15%
0.045%
0.015%
* 获得主要分子生物学治疗反应时BCR-ABL转录本绝对数量
Imatinib一线治疗12个月分子生物学治疗反应与无 进展生存
100
90 80 70
98% 90% 75%
RT-PCR 逆转录聚合酶链反应技术
利用染色体易位形成的 肿瘤特异融合基因或基 因重排作为分子靶，在 引物作用下，通过聚合 酶链反应，短时间内将 特异性序列扩增百万倍， 然后用凝胶电泳显示出 来 优点：特异性、灵敏度 大大提高（可达10-5— 10-6）
QRT-PCR---荧光实时定量PCR
% 无疾病进展
60
50 40 30 下降>=3对数级 下降<3对数级
p<0.001
n=136 n= 94 n=138
20
10 0
获得完全细胞遗传学治疗反应
0 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 33 36 39 42 45 48 51 随机分组后时间（月）
QRT-PCR在AML中的应用
BCR-ABL转录本上升预示疾病复发
BCR-ABL转录本对数级下降
BCR-ABL not detected 与丢失完全细胞遗传学治疗反应比较；分 子生物学监测可更早提示疾病复发 BCR-ABL detected
基线
1.0
丢失完全细胞遗传学治疗反应
供体淋巴细胞回输
MCR CCR
Ph染色体转阴
2.0 3.0 4.0
Burnett AK，et al.Blood1999;93:4131
巩固治疗结束后MRD状态与复发的关系
RT-PCR （+） RT-PCR （-）
P
N
3yr Relapse
7
57%
69
27% 0.006
Italian GIMEMA-AIEOP Trial——AIDA protocol Breccia M,et
106
PCR detection limit
I
Time
检测MRD的意义
根据细胞负荷调整缓解后化疗方案
更早发现药物耐药性 更早预测白血病复发 评价骨髓移植净化效果 为实验研究提供依据
MRD主要检测方法
一、染色体核型分析 二、荧光原位杂交--- FISH 三、流式细胞仪---FCM 四、聚合酶链反应技术---PCR 五、其他：细胞培养技术，免疫荧光等
其他染色体异常 t(9; 11 )(p21-22;q23) MLL-AF9 t(9;22)(q34;q11) BCR-ABL t(6;9)(p23;q34) DEK-CAN
APL-t(15;17)(q22;q11-22)
90-95%
PML-RAR α
PML-RARα(+)患者在诱导或巩固治 疗后阶段可达转为阴性 PML-RAR α持续阳性或由阴转阳则预示即将 发生血液学复发 巩固及维持治疗阶段监测融合基因对调整治 疗方案有指导意义 但是融合基因持续阴性并不代表不会复发
Karyotype showing the Philadelphia chromosome. 46,XX,t(9;22)(q34.1;q11.2)
Figure 5: Detection of PML-RARa gene fusion by interphase FISH: Left: S-FISH (one wild type PML, one wild type RARa, and one yellow fusion signal); Right: D-FISH (one wild type PML, one wild type RARa, and two yellow fusion signals).