淋巴瘤基因克隆性重排检测.ppt
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淋巴瘤基因克隆性重排和 IGHV体细胞超突变检测
专注分子诊断
|
引领精准医学
血液肿瘤（常规肿瘤）检测方案 -MICM综合分子检 测(旌准方案 )
形态学
（Morphology ）
免疫学 （Immunology）
? 免疫组化（IHC） ? 流式细胞术（FCM）
分子生物学 （Molecular）
? 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) ? 毛细管凝胶电泳(CE) ? 荧光实时定量PCR(RTQT-PCR) ? 一代测序(Sanger) ? 二代测序(NGS)
IdentiCloneTM系列产品具有精心优化的标 准化试剂组成，具有 最丰富的阳性对照 ，涵盖 各种T\B细胞重排类型，经过了超过 400例的临 床样本验证 ，按照临床产品的标准进行质检和 质控，反应体系稳定，结果可靠。
专注分子诊断
|
引领精准医学
Biomed-2研究项目
专注分子诊断
|
引领精准医学
专注分子诊断
|
引领精准医学
淋巴细胞克隆性基因重排检测产品特点
1
BIOMED-2 唯 一授权的商品
化试剂
2
全面涵盖各种 T\B细胞重排类
型
3
超过 400 例的临床样本 验证，反应体系稳定，
结果可靠
4
5
可疑淋巴组织增 生性疾病克隆性 分析的“金标准”
最丰富的阳性 对照
Focus On Molecular Diagnosis | Leading Precision Medicine
结果分析
? （单）克隆性：扩增产物电泳在预期大小范围内一或双条带（峰） 送检组织中，淋巴细胞抗原受体基因的重排方式为单一性。表明组织中存在单克隆性增生的细胞群。
? 多克隆性：扩增产物电泳呈弥散涂抹状(smear)或阶梯状(高斯分布） 送检组织中，淋巴细胞抗原受体基因的重排方式为多样性。表明组织中不存在单克隆性增生的细胞群。
血液
肿瘤
细胞遗传学（Cytogenetics）
? 荧光原位杂交（FISH）
辅助诊断
预后分析 指导用药 MRD检测
Focus On Molecular Diagnosis | Leading Precision Medicine
分子检测 -淋巴瘤
Moffitt, A. B. and S. S. Dave (2017). J Clin Oncol 35(9): 955-962.
22q11
专注分子诊断
|
蛋白 TCRα TCRβ TCRγ TCRδ
引领精准医学
基因
TRA TRB TRG TRD
染色体定位 14q11 7q32 7p15
14q11.2
多样性与克隆性
正常淋巴细胞成熟过程 /良性病变 多克隆性
多种 形式的基因重排
恶性淋巴瘤发生的过程
单克隆性
突出 单一 形式的基因重排
IGH, TRB & TRD: V, D, and J IGK, IGL, and TRG: V and J regions
专注分子诊断
|
引领精准医学
淋巴细胞克隆性基因重排检测的临床意义
5%～15%的病例表现复杂，即使做了大量的免疫标志也可能难以鉴别其良恶性，需要进一步的手段区分。 利用分子生物学手段分析Ig和TCR基因的克隆性重排被WHO公认为该疾病诊断手段的重要补充。
淋巴细胞克隆性基因重排检测的目标分子 Ig和TCR--单一 基因重排，即恶性淋巴细胞
B-Cell Receptors (BCR) /Immunoglobulins (Ig)
T-Cell Receptor (TCR)
蛋白 Ig重链 Ig轻链? Ig轻链?
基因
染色体定位
IGH
14q32
IGK
2p12
IGL
专注分子诊断
|
引领精准医学
基于不同方法的产品系列 -Invivoscribe 公司
基于 PCR 检测技术，简便、快 速、成本较低，所需 DNA 量少， 对DNA 质量要求不高。 灵敏度 高于 10% ，需配制胶，安全清 洁性较差。
基于PCR- 毛细管电泳检测技术， 敏感性高，检测周期较长，结 果更加直观可靠
? 鉴别诊断：明确是淋巴组织反应性还是淋巴细胞恶性增殖 ? 辅助诊断：少见类型淋巴瘤，如肝脾T细胞淋巴瘤 ? 亚类分析：明确是B淋巴恶性增殖还是T细胞恶性增殖 ? 区分同一患者两种淋巴细胞恶性肿瘤，包括复发与继发淋巴瘤 ? 微小残留病灶监测，评估治疗效果或复发风险（NGS方法） ? 细胞免疫治疗监测，监测回输T细胞增殖状况和淋巴组织来源肿瘤细胞清除效果（NGS）
目前市场最被接受的检测方法。 灵敏度无法满足 MRD要求，难 以定量和得到序列。
新兴技Baidu Nhomakorabea，更高灵敏度（ 10-6），更 高分辨率，更高的通量，更广泛的 应用。 但成本高，仪器贵，操作复 杂，时间长。
（IGH, IGK,）（IGL）（TRB ,TRD,）（ TRG）BIOMED-2方
案，唯一授权）
IGHV（依据ERIC指南）
分子检测 检测基因
方法
IG/TCR 基因重排
IGH，IGK， ? GEL (PAGE) IGL，TRB， ? ABI (CE) TRD，TRG ? NGS
? GEL (PAGE)
IGHV超突变
IGH
? ABI (CE)
? NGS
基因突变
EZH2, DNMT3A, IDH2…
? Sanger ? NGS
IGH, IGK, TRB , TRG IGHV
专注分子诊断
|
引领精准医学
从Biomed-2 到Invivoscribe- 唯一授权
Invivoscribe公司的 IdentiCloneTM系列产 品是基于PCR的克隆性检测产品，是BIOMED2唯一授权 的商品化试剂，获得 CE认证，以其 高度的灵敏性和特异性，成为可疑淋巴组织增 生性疾病克隆性分析的“金标准”。
? 无扩增产物：PCR扩增后电泳未见产物 送检组织中的细胞，抗原受体基因无重排（NK，非淋巴细胞）或DNA质量过差。
marker P M H2O S1 S1 S2 S2
Biomed-2研究项目（IGH为例）
专注分子诊断
|
引领精准医学
van Dongen, J. J. M., et al. (2003). Leukemia 17: 2257.
Biomed-2研究项目（IGH为例）
专注分子诊断
|
引领精准医学
van Dongen, J. J. M., et al. (2003). Leukemia 17: 2257.
专注分子诊断
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引领精准医学
血液肿瘤（常规肿瘤）检测方案 -MICM综合分子检 测(旌准方案 )
形态学
（Morphology ）
免疫学 （Immunology）
? 免疫组化（IHC） ? 流式细胞术（FCM）
分子生物学 （Molecular）
? 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) ? 毛细管凝胶电泳(CE) ? 荧光实时定量PCR(RTQT-PCR) ? 一代测序(Sanger) ? 二代测序(NGS)
IdentiCloneTM系列产品具有精心优化的标 准化试剂组成，具有 最丰富的阳性对照 ，涵盖 各种T\B细胞重排类型，经过了超过 400例的临 床样本验证 ，按照临床产品的标准进行质检和 质控，反应体系稳定，结果可靠。
专注分子诊断
|
引领精准医学
Biomed-2研究项目
专注分子诊断
|
引领精准医学
专注分子诊断
|
引领精准医学
淋巴细胞克隆性基因重排检测产品特点
1
BIOMED-2 唯 一授权的商品
化试剂
2
全面涵盖各种 T\B细胞重排类
型
3
超过 400 例的临床样本 验证，反应体系稳定，
结果可靠
4
5
可疑淋巴组织增 生性疾病克隆性 分析的“金标准”
最丰富的阳性 对照
Focus On Molecular Diagnosis | Leading Precision Medicine
结果分析
? （单）克隆性：扩增产物电泳在预期大小范围内一或双条带（峰） 送检组织中，淋巴细胞抗原受体基因的重排方式为单一性。表明组织中存在单克隆性增生的细胞群。
? 多克隆性：扩增产物电泳呈弥散涂抹状(smear)或阶梯状(高斯分布） 送检组织中，淋巴细胞抗原受体基因的重排方式为多样性。表明组织中不存在单克隆性增生的细胞群。
血液
肿瘤
细胞遗传学（Cytogenetics）
? 荧光原位杂交（FISH）
辅助诊断
预后分析 指导用药 MRD检测
Focus On Molecular Diagnosis | Leading Precision Medicine
分子检测 -淋巴瘤
Moffitt, A. B. and S. S. Dave (2017). J Clin Oncol 35(9): 955-962.
22q11
专注分子诊断
|
蛋白 TCRα TCRβ TCRγ TCRδ
引领精准医学
基因
TRA TRB TRG TRD
染色体定位 14q11 7q32 7p15
14q11.2
多样性与克隆性
正常淋巴细胞成熟过程 /良性病变 多克隆性
多种 形式的基因重排
恶性淋巴瘤发生的过程
单克隆性
突出 单一 形式的基因重排
IGH, TRB & TRD: V, D, and J IGK, IGL, and TRG: V and J regions
专注分子诊断
|
引领精准医学
淋巴细胞克隆性基因重排检测的临床意义
5%～15%的病例表现复杂，即使做了大量的免疫标志也可能难以鉴别其良恶性，需要进一步的手段区分。 利用分子生物学手段分析Ig和TCR基因的克隆性重排被WHO公认为该疾病诊断手段的重要补充。
淋巴细胞克隆性基因重排检测的目标分子 Ig和TCR--单一 基因重排，即恶性淋巴细胞
B-Cell Receptors (BCR) /Immunoglobulins (Ig)
T-Cell Receptor (TCR)
蛋白 Ig重链 Ig轻链? Ig轻链?
基因
染色体定位
IGH
14q32
IGK
2p12
IGL
专注分子诊断
|
引领精准医学
基于不同方法的产品系列 -Invivoscribe 公司
基于 PCR 检测技术，简便、快 速、成本较低，所需 DNA 量少， 对DNA 质量要求不高。 灵敏度 高于 10% ，需配制胶，安全清 洁性较差。
基于PCR- 毛细管电泳检测技术， 敏感性高，检测周期较长，结 果更加直观可靠
? 鉴别诊断：明确是淋巴组织反应性还是淋巴细胞恶性增殖 ? 辅助诊断：少见类型淋巴瘤，如肝脾T细胞淋巴瘤 ? 亚类分析：明确是B淋巴恶性增殖还是T细胞恶性增殖 ? 区分同一患者两种淋巴细胞恶性肿瘤，包括复发与继发淋巴瘤 ? 微小残留病灶监测，评估治疗效果或复发风险（NGS方法） ? 细胞免疫治疗监测，监测回输T细胞增殖状况和淋巴组织来源肿瘤细胞清除效果（NGS）
目前市场最被接受的检测方法。 灵敏度无法满足 MRD要求，难 以定量和得到序列。
新兴技Baidu Nhomakorabea，更高灵敏度（ 10-6），更 高分辨率，更高的通量，更广泛的 应用。 但成本高，仪器贵，操作复 杂，时间长。
（IGH, IGK,）（IGL）（TRB ,TRD,）（ TRG）BIOMED-2方
案，唯一授权）
IGHV（依据ERIC指南）
分子检测 检测基因
方法
IG/TCR 基因重排
IGH，IGK， ? GEL (PAGE) IGL，TRB， ? ABI (CE) TRD，TRG ? NGS
? GEL (PAGE)
IGHV超突变
IGH
? ABI (CE)
? NGS
基因突变
EZH2, DNMT3A, IDH2…
? Sanger ? NGS
IGH, IGK, TRB , TRG IGHV
专注分子诊断
|
引领精准医学
从Biomed-2 到Invivoscribe- 唯一授权
Invivoscribe公司的 IdentiCloneTM系列产 品是基于PCR的克隆性检测产品，是BIOMED2唯一授权 的商品化试剂，获得 CE认证，以其 高度的灵敏性和特异性，成为可疑淋巴组织增 生性疾病克隆性分析的“金标准”。
? 无扩增产物：PCR扩增后电泳未见产物 送检组织中的细胞，抗原受体基因无重排（NK，非淋巴细胞）或DNA质量过差。
marker P M H2O S1 S1 S2 S2
Biomed-2研究项目（IGH为例）
专注分子诊断
|
引领精准医学
van Dongen, J. J. M., et al. (2003). Leukemia 17: 2257.
Biomed-2研究项目（IGH为例）
专注分子诊断
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引领精准医学
van Dongen, J. J. M., et al. (2003). Leukemia 17: 2257.