水稻花药的一种整体染色制片技术1)

合液。 再经二甲苯 （ 二次） 透明。 每步各约需 ２分钟。注意：花药若有棉胶膜，则不可用无 ０ 水酒精脱水，因棉胶溶于无水酒精。在这种情 况下可经下述程序脱水透明〔： 沁 酒精一 ， ９ １ ５ 无水酒精与氯仿 １ １ ： 混合液（ 二次） 一 无水酒 精、 氯仿、 二甲苯 １１ １ ：： 混合液一 二甲苯（ 二 次） ０ ６用稀加拿大树胶在 ３℃ 左右温 箱 中 浸 ． ０ 胶一天。 ７封片：在载玻片上加一滴加拿大 树 胶， ．
１１ ：的染液作花药整体制片。
固定与保存 花药在醋酸甲醇（ ：） １３ 中固定数小时， 然后 换人 ７ ％甲醇保存。 用甲醇代替卡诺（ ：） ０ ３ １固
定剂中的乙醇， 可以减少花粉的收缩。 为了避免花药在以后多次处理中开裂造成
花粉与愈伤组织的遗失，以致影响观察统计的
精确性， 可以采用 Ｂａｄｒ（９６Ｅ提出的棉 ｈｎａ １７）］ ｉ Ｚ
［ 〕 Ｍａｋｙ Ｊ，１５． ｕｒｎ ｄ ｒｙ ｐｒ ６ ｃｅ， ９４ Ｎ ｔ ａ Ｘ ａ ｅ ｅ－ ｅ ｏ ｎ － ｘ ｉ
６ 多 ４ 关（ ） ． －１． 表２。可见用诱变育种方法诱 ０ ７
发小麦矮秆、 抗倒伏突变是很有效的途径。
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ＨｆｐａＢ Ｐｄａｕ ｅＴｏＯ． ｕｕｘ“Ｃｍ ｚｒ Ａ Ｏ １ 仄 Ｔ ａ ｅ ｘｕ ＴＭ３ Ａ ， ｙｙ ３
４自来水换洗三次， ． 每次数十分钟， 直至花
药由浅紫红色转呈蓝色。换洗的方法是静止的
克溶于 １０ ０ 毫升无水酒精与 １ 毫升冰醋酸中。 ０ 硫酸铝钾 ５ 克在 １０ ０ 毫升蒸馏水中加热溶化。 将以上二液混合， 再加 １０ ０ 毫升甘油， 摇匀。去 掉瓶塞， 用纱布包扎瓶口， 置光亮处任其成熟， 直至溶液呈深紫红色， 盖紧瓶塞， 长期保存。
ｂ ｅｄｎ ｉ ｗ ｅｔ Ｉ ｄ ｃｄ ｕａｉｎ ａ ｄ我 ａ ｔ ｒｅｉｇ ｈ ａ． ｕｅ Ｍ ｔｔ ｓ ｎ ｎ ｏ ｎ ｎ
四、 矮秆突变系株高降低与
穗部性状的关系
国内外矮化育种的实践表明，矮生性状往 往同青枯、 早衰、 籽粒批、 品质差等不良性状连 锁在一起，因此必须在茎秆矮化的同时要求籽 粒饱满， 千粒重高。从表 ２资料可见， 所有中选 的矮秆突变系及农大 １９的中高秆类型的突变 ３
Ｉ ｐｏｅ ｅｔ Ｉ Ｅ Ｖｅｎ ， －２１ ｍ ｒ ｍ ｎ． Ａ ｉ ａ ２７ ５． ｖ Ａ ｎ ３ 〔 ］ Ｂ ｇ ｏ Ｔ Ｐ， ｅｒｓ ａ ｇ ｏ ａ Ｓｇｒｊｒｓ ３ ｏｙ， ． Ｓａ ｃ － ｎｚ ， ｕｂ６ｎ－ ａ ｉ Ｍｕ ｚ ｉ
ｓｎ Ｂ ａ ｄ ａ ｎ ｒ Ｄ． １ ６ ． ａ ｔｔ ｎ ｕ ｏ ， ｎ Ｂ ｇ ａａ ， ９ 人ｄ ｐａ ｉ ｓ － ． ９ ｏ ｔ
水稻花药的一种整体染色制片技术”
杨 弘远 周 嫦
（ 汉 大 学 生 物 系） 武
朱至清等（９ ８１ １ ７）１ ＇ 提出的花药整体制片法，
人保存液中。
染色与制片 １ 换人 ５ 界甲醇， ２ 分钟。 ． ０ 约 ０
在小麦、 黑麦、 玉米等植物的花药培养工作中都
已证明是研究雄核发育的一项有用的技术。但 水稻花粉孚尔根反应不明显，因而有必要探索 其它整体染色方法。通过试验，我们发现爱氏
图 １ 单核靠边期的花 粉。 ．
２ 活体花药中的小抱子分裂 （ ． 后期） 分裂轴垂 ，
直于花粉壁。 ３ 离体培养花药 中的二 核花粉。 由于分裂 轴改 ． 变为与花粉壁 成切向， 形成两个均等 的子核。 斗 培养花药 中的 多细胞花粉粒。 ． ， 低倍 镜下的整体花 药，示其 中包含的许多大 ． 小不 等的愈伤组织。
５ ． ３７
系１３， ８ １２， ３的千粒重均高于原 ３５ １６， ４ １５ ０ ０ １
品种。在 Ｍ， 代对一些有希望的中高秆型进行 ｍｅ ｔ ｉ ｗ ｅ ｔ ｄ ｒｖｓ ｎ ｔｅ ｅｔｉ ｎｓ ｈａ ａ ａ ｉ ｏ ｏ ｈ ｓ ｌ ｄ ｎ ｎ ｅ ｉ ｆ ｐ ｏ 了初步产量鉴定 （ 鉴定圃为 ５ 行区， 行长 ５米， ｐｏｌ ． ｒｄ ａ， ） ６． ｒｂ ｍ Ｈｅ ｉｓ （０ ：５ ｅ ｅｔ ４ ７ ａ Ｂ， ． １６． ｏｙｅＨ Ｍ ａＴ ａ ． ｙ Ｂ 行距 ３ 厘米， ０ 重复 ２ 。鉴定的结果， ４ 次） 这 个 ［ ］ Ｍｏｓｅａ Ｂ Ｃ， ９５ Ｉ ｕｅＨｅ ＴｎＯ ｙ ｏａｏ ｎ ｅｏｕ ＯＴ ＆ｍ ｉ ｉ －ａｅｎ ｆ ａｍｆ ｍ ｎｑ ＣＰａ Ｉ ｅＲ ｍ ｐｉｗ Ｈ ｏ ｉ ｉ 中高秆突变系的产量，折合亩产比原品种增加 ｍ６ａ １６ ｕＡ ＲＴ ｅ ｙ ｙｅ Ｈ Ｃ Ｌ ｐ Ａ ； Ａ Ｃ ＨＭ ｎｇｉ ６ Ｔ Ｉ ８ Ｏ ｅ ａ － ｉ Ｍ ＰＢ ｃ
［ ］ Ｗｏ， Ｃ Ｋ ｎａ， Ｆ， ９ Ｇｎｔ ａａ － ４ ｏ Ｓ ． ｏｚｋ Ｃ ．１６． ｅ ｃ ｌ ． ， ． ９ ｅ ｉ ｎｙ
ｓｓ ｓｏｔ ｕｍ ｔｎ ｓ ｄ ｃｄ ｙ ｉ ｏ ｈ ｒ－ ｌ ｍｕａ ｔ ｉ ｕ ｅ ｂ ＥＭＳ ｆ ｃ ｎ ｉ ｎ
Ｔ ｉｉｕ ａ ｓｉｕ ， Ｉ ｕ ｅ Ｍ ｕ ａ ｉｎ 讯 Ｐｌｎｔ． ｒｔｃｍ ｅｔｖｗ ． ｍ ｎｄ ｃｄ ｔｔｏ ａ ｓ
Ｉ Ａ ｉｎ ａ ５ １ ５ ５ ＡＥ Ｖ ｅｎ ， － ５ ． ５
［ ］ Ｓａａｃ － ｇｏｚ， Ｔ， ６． ｕｅ ｍ － ５ ｅｒｓａ ｉＭｕｎｚａ Ｇ ． １ ４ Ｉｄｃｄ ｕ ． ９ ｎ
ｔｔ ｎ ｂｅｄｎ ｆｒ ｄ ｉｇ ｓ ｔｎ ｅ Ｔ ｅ ａｉ ｉ ｒｅｉｇ Ｌ ｇｎ ｒ ｉ ａ ｃ． ｏ ｎ ｏ ｏ ｅｓ ｈ ｕｅ Ｉ ｄ ｃｄ ｔｔ ｎ 伽 ｐａ ｔ ｒｅｉｇ ｓ ｏ ｎ ｕｅ ｍｕａｉ ｆ ｏ ｌｎ ｂｅｄ ． ｎ
集， 便于观察统计。 效果
爱氏苏木精是一种良好的整体染 色剂〔 ３ １ Ｏ 我们的试验表明，用此法不需分色即可显示水 稻活体与离体花药中的花粉构造（ 见图） 。活体 花药中的液泡化单核与二核花粉染色清晰；充 实花粉虽可显示细胞核， 但细胞质染色嫌深， 反 差不够好。离体培养花药用此法制片可以透过 药壁统计花药中的多细胞花粉粒与愈伤组 织， 也可以观察早期多细胞花粉粒中的细胞核数目
藏：在载玻片上整齐பைடு நூலகம்加几小滴树胶，每滴刚 好容纳一枚花药。用镊尖压碎花药，使花粉密
布在各滴树胶的范围内。稍加静置，当树胶略 显凝稠时，再加一滴树胶于其间。轻轻覆上盖
１ ）工作 中得到曾子申、 徐树华同志热倩支援， 特此致谢。
３ ５
玻片。这样，一张盖玻片下可以分别封藏数枚 花药的花粉，彼此不致混淆，而且花粉比较密
７７ ８１ － ．
与分布情况。 参 考 文 献
［ 〕 朱至清、 １ 孙敬 三、 王敬驹：１７ ， 小麦 雄核发育 的细胞 ９６
学研究。植物学报， ０６ １ ２： －１０ ［ ］ Ｂ ａ ｄｒ Ｎ． １７． ｅ ｅ ｂｙｓｅｏ ｉ－ ２ ｈ ｎａｉ Ｎ． ９６ Ｐ ｌｎ ｒｏ－ ｌｉ ｎ ， ， ｏ ｍ ｃ ｄ
ｄｅ ｗｉｈ ａ ｉｔｏ － ｄ ｅｄ ｕ ｕ ｉｓ ｔ ｒ ｄａｉｎ ｉ ｕ ｅ ｄ ｒ ｍ ｗｈ ａ ｍｕ ｎ ｅ ｔ －
ｔｎｓ Ｉ ｄ ｃｄ ｔｔ ｎ ｉ Ｐ ａｔ． Ｅ ａ ｔ． ｕ ｅ Ｍｕａｉ ｓ ｎ ｏ ｎ ｌｎｓ Ｉ Ａ Ａ Ｖｉ ｎ ， ９ １． ｅ ａ ６ －７ ７ ｎ ９
临用前， 用冰醋酸与 ５ ％酒精的等量混合 ０ 液稀释原液，使之进一步酸化 。原液与醋酸酒 精的比例可以是 ４ １ ２ １ １１ ：， 或 ：。我们通常用 ：
浸泡， 不用流水冲洗。
５经过 ５ 并、７ 形、 ５ ９ 关，０ 务（ ． ０ ０ ８ 多、 ５ １０ 二
次）酒精脱水，换人无水酒精与二甲苯 １１ ：混
２换入爱氏苏木精稀释液，染色 １ 天。 ． －２
染液只需淹没材料即可。材料在此染液中不致 过度染色， 不需分色。 ３蒸馏水换洗三次， ． 每次数十分钟， 直至彻 底洗去材料中的余色。
苏木精 （ｈｌ ＇ ｈ ａｘｌ）整体染色效果 Ｅｒｃ ｓ ｔ ｙｎ ｉ ｈ ｅ ｏ ｉ ｍ
较好， 现介绍如下： 染液的配制 爱氏苏木精原液的配制方法是：苏木精 ２
（ 上接第 ３ 页） ０ 上）的指标进行鉴定的。１７ 年春季气候比较 ９８ 湿润， 在抽穗、 灌浆后遇到了大风和暴雨， 在大 风暴雨后的第二天在田间进行了目测鉴定，原 品种农大 １９ 有芒白４ ３， 号等倒伏很厉害， 而稳
定的矮秆突变系均未倒伏， 或只有轻微倾斜。
参
考
文
献
汇 ］ 徐成满：１６， １ ９４ 快中子作用下获得有 益的冬小麦 突 变 体。遗传学集刊， ： －７． ５５ ３ ５ ［ ］ ｏ ｊｖ ， ， ｒｊ ｉ Ｓ， ７． ｔｔ ｎ ２ Ｂ ｒ ｅｉ Ｋ． Ｂ ｏ ｖ ， １ ２ Ｍ ａｉ ｓ ｏ ｃ ｏ ｅｃ ． ９ ｕ ｏ
ｓｒｙ ｔｏ ｆｒ ａａｆｎ ｅｔ ｎｎ ． ｔｉ ｐａ ｍｅｈ ｄ ｏ ｐ ｒｆｉ ｓｃｉ ｉｇ Ｓ ａｎ ｏ Ｔ ｃｎ ｌ ｙ ５ ： ４－ ２ ６ ｅｈ ｏ ｇ ， ２ ５ ４ ． ｏ １
【 ］ ｏａｓ ， Ａ， ０ Ｐａｔ ｉ ｏ ｃｎｑｅ ３ Ｊｈｎｅ Ｄ ｎ ． １４． ｎ Ｍ ｃ ｔ ｈ ｉ ， ． ９ ｌ ｒｅ ｕ ｐ ５， Ｍ Ｇａ －ｉ Ｂ ｏ Ｃ ｍ ａｙ Ｎ ｗ ． ７． ｒｗＨｌ ｏｋ ｏ ｐｎ， ３ ９ ｃ ｌ ｅ
胶喷膜技术。这对培养中、后期的花药尤有必
铺匀。 将数枚花药整齐地排列在树胶中， 加上盖 玻片， 用铅笔的橡皮头轻压盖玻片， 使花药略微
变扁，以便观察。也可以如下进行花粉粒的封
要。水稻花药较小， 喷膜不方便， 我们对原法作
了如下修改：将花药从固定液或保存液中逐个 地轻轻镊出， 在滤纸上稍微吸干， 迅速在棉胶溶 液 （ 外棉胶溶于 ３ ７乙醚与无水酒精混 合 液 １ ： 中） 中蘸一下， 再在滤纸上吸干一下， 使花药表 面形成一层棉胶薄膜 （ 切忌内部干燥） ，立即转
Ｙ ｏ ｋ ＆ Ｌｏ ｒ ｎｄｏ ｎ．
［ ］ Ｓ ａｍ ， Ｋ． １７． ｒｍ ｓ ｅ ｃ ｉ ｅ ４ ｈｒ ａ Ａ ． ， ２ Ｃ ｏ ｏｏ Ｔ ｈ ｑ ｓ ９ ｈ ｍ ｅｎ ｕ ，
ｐ １５ Ｂ ｔ ｒ ｒｈ， ｎ ｏ ； ｎｖｒｉ Ｐ ｒ ． ． ｔ ｗｏｔｓ Ｌｏｄ ｎ Ｕ ｉｅｓ ｙ ａｋ ４ ｕｅ ｔ Ｐ ｅｓ Ｂａｔ ｒ． ｒｓ， ｌｍｏｅ ｉ