第五章 慢性和亚慢性毒性作用及其试验方法

4)
以上方法都不能采用时，才采用灌胃法。
四、观察指示
1. 一般健康状况及生长发育状况：如动物的一般表现、 外观形态、体重、采食量、饲料利用率、中毒症状 及死亡情况等。 2. 血液学检验：主要包括红细胞计数、血红蛋白测定、
白细胞分类计数，等等。
3. 生化学检查：主要是肝肾功能的检查
在亚慢性毒性试验中，可在试验开始前，接触被检
其中毒阈剂量（MiE）有90％满足：MiE7天／MiE90天≤5；
有100％满足：MiE7天／MiE90天≤6．2（满足
95％可信限） 但该两试验间LD50之比变动范围较大，不适于预测之用。
第五章 亚慢性和慢性 毒性作用及其试验方法
第一节 概念、试验目的和期限
一、亚慢性毒性试验
1 概念
是使实验动物连续多日接触较大剂量的 化学物的毒性实验。
2 试验的目的
（1）近一步探索受试化学物质的毒性作用和靶器官；
（2）初步估计现有有害作用的最大无作用剂量和中毒阈剂 量；
（3）为慢性毒性试验的剂量设计提供参考；
物后3天、10天进行。然后每隔30天及实验结束时各 进行一次。 慢性毒性试验，每隔3～6个月进行一次即可。
4.
病理学检查：试验结束后，将全部动物处死，或在试 验期中，在各组随即抽取一定只数动物处死，进行病 理学检查。
最好在高剂量组中出现进食量减少、体重下降、增长 迟缓，以及其它中毒症状开始出现时进行，可每隔 3～6个月进行一次。试验期中，自然死亡的动物也都 进行病理学检查，明确死因。
三、受试物给予方式
1) 2) 通常将受试物混入饲料，采用动物自由采食的方式。 若受试物有异味，动物拒食，则可利用动物饥不择 食的特性，将受试物与少量饲料混合制成“药饵”， 夜间只供饮水，不给饲料，早、晚各给一次药饵，
每次一小时。挥发性受试物也适用此法。
3) 若将受试物混入饮水中，要计算每日饮水量。
4）如果仅有急性毒性试验结果，则可将LD50的1／10、1
／50、1／100和1／1000作为剂量分组范围。 一般情 况下，LD50的1／10往往可引起显著中毒；1／100～ 1／50相当于慢性中毒阈剂量；1／1000则低于最大 无作用剂量，按此分组时，实际接触量的100倍也可 考虑在内。 5） 对照组一律喂不含被检物的普通饲料。
在556种不同剂量中：
三个月未出现中毒，三个月后出现的有15种，占2.65％。 由以上结果可以看出，三个月的毒性试验显示绝大多 数化学物质的毒性作用。因此，有人认为，只要进行三 个月的短期毒性试验，并根据以上关系，即可根据三个 月的毒性试验推断两年的毒性作用。
3．还有人将90天毒性试验结果与7天毒性试验结果进行分 析，试验动物为大鼠，被检化学物质共20 种。 分析有如下关系：
量组（此为最高剂量组）。以求得明确的剂量反应 关系。
பைடு நூலகம்
2）受试物如为一化学物质，总的原则应该考虑到希望通
过慢性毒性试验能找出最大无作用量和中毒阈剂量。
3） 如果已进行过亚慢性毒性试验，则以亚慢性毒性中的 中毒阈剂量的1／2～1／5，1／10～1／50,•／50～1 1 ／100作为剂量范围；（即以亚慢性毒性试验中的中 毒阈剂量的1／2～1／5作为高剂量组，并以其1／ 100作为低剂量组，相当于慢性无作用剂量；在中毒 阈剂量的1／10～1／50范围内考虑剂量分组，相当 于中间剂量组）。
中间剂量组以出现轻微中毒效应为度,三组剂量差应
至少大于两倍。
2 慢性毒性试验的剂量要求
1）首先要确定最低最高剂量组 原则上希望有1～2个高剂量组在实验期间能出现明显 中毒，另有1～2个低剂量组不出现明显中毒，一般 设计3个剂量组，必要时另设一个溶剂对照组，即无
作用剂量组、阈剂量组、发生较轻微毒性效应的剂
二、剂量分组
1 亚慢性毒性试验的剂量要求
1） 所用上限剂量能使动物出现明显中毒表现和使某些组 织器官或系统呈现一定的功能障碍或病理变化， 但 在试验期中动物不致很快死亡，一般在LD50的1／
20～1／5范围内考虑最高剂量或以急性毒性阈剂量
为其最高剂量。 2）应至少设三个染毒剂量组及一个正常对照组，必要时 再加一个溶剂对照组。 3）最低剂量组应相当于亚慢性的阈剂量或NOEL水平；
（4）由于亚慢性毒性试验中所用剂量较大，某些病理或生 化等改变出现迅速，可为慢性毒性试验筛选敏感指标；
（5）亚慢性毒性试验也常用于研究毒物代谢及中毒机理。
二、慢性毒性试验
1 概念
是使实验动物生命大部分时间或终生接触被检化学 物质的毒性试验。
2 试验的目的
观察长期反复摄入低剂量被检化学物质可能对机体造成 的损害，并确定其最大无作用剂量。
5. 脏器系数 ： 即脏器重量与体重之比，也称脏体比。 其中肝体比与肾体比已成常规。其它脏体比视情况而 定。
此外，还可根据具体情况参考有关资料选用其它有意义的 指示，如心电图、肌电图、脑电图等等，以及行为和 免疫功能方面的指标
第三节
慢性毒性试验的简化问题
1． 有人曾就33种化学物质试验结果进行分析，所用动物： 大鼠和狗。观察指标：36项。发现有如下关系：（此种关系 有95％可靠性）。 90天与2年的最大无作用量之比小于9； 90天与2年的中毒阈剂量之比小于6
第二节 试验设计
一、实验动物
1 实验动物 种别的选择
（1）对被检物质的代谢过程基本与人类相似， （2）如无法掌握这一情况，应尽量选用敏感动物。根据 要求应有一种啮齿动物（大鼠或小鼠）和一种非啮 齿动物（如狗或猴）。 （3）目前至少要求用一种啮齿动物全面系统进行，对于
了解较少的新化学物质，根据传统经验可选用大鼠，
2．有人分析了82份化学物质毒性试验报告，共涉及化合
物类型122种，剂量556种及多种观察指标。试 验动物有：
小鼠、大鼠、鸡、豚鼠、地鼠、猪、狗、猴。
结果表明
122种化合物中： 三个月未出现中毒症状，但在三个月后呈现中毒表现的 有三种，占2.45％； 三个月内出现中毒症状，但在三个月后以更低剂量也出现 中毒者8种占6.56％；
因大鼠对一般化学物质的反应和代谢过程大多与人 近似，食性亦和人相近。
2 实验动物的年龄要求
慢性、亚慢性毒性试验中，动物应为初断乳者。 大鼠约为出生后4周，体重50g左右；
小鼠3周，体重10g左右；
品系应明确一致，体重 不能相差过多，最好在10％范 围内。
3 实验动物数目
一般在两年慢性毒性试验中，啮齿类动物每组应有 25只左右，对照组最好雌雄各50只，希望试验结束 时， 每组至少尚有动物10只。 狗和猴在实验开始时每组雌雄各4～8只即可。
在此基础上，制定出人体每日容许摄入量和食物中允许 含量或最高残留量。
三、亚慢性和慢性毒性试验的期限
亚慢性毒性试验一般进行3～6个月；
慢性试验进行6个月以上，或更长（2～3年）。
o 世界卫生组织将三个月以内的毒性试验称为短期毒
性试验（short term test）。
o 相当于上述亚慢性毒性试验。3～6个月的实验称为 长期毒性试验（long term test）， o 更长时间观察动物终生者称为终生毒性试验（life span test ）。例如小鼠一年半，大鼠两年