α-酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)活性测定试剂盒说明书

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α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求百奥泰康

α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求百奥泰康

α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)适用范围:该试剂盒用于体外定量测定人血清中α-羟丁酸脱氢酶的活性。

1.1 产品规格试剂1:60mL×5,试剂2:12mL×5;试剂1:60mL×5,试剂2:60mL×1;试剂1:60mL×2,试剂2:12mL×2;试剂1:60mL×2,试剂2:24mL×1;试剂1:80mL×4,试剂2:16mL×4;试剂1:80mL×4,试剂2:64mL×1;试剂1:80mL×2,试剂2:16mL×2;试剂1:80mL×2,试剂2:32mL×1;试剂1:50mL×3,试剂2:10mL×3;试剂1:50mL×3,试剂2:30mL×1;试剂1:40mL×3,试剂2:24mL×1;试剂1:50mL×4,试剂2:20mL×2;试剂1:50mL×4,试剂2:40mL×1;试剂1:60mL×1,试剂2:12mL×1;试剂1:50mL×1,试剂2:10mL×1;试剂1:40mL×1,试剂2:8mL×1;试剂1:500mL×1,试剂2:100mL×1;试剂1:5000mL×1,试剂2:1000mL×1;1.2 组成成分该试剂盒由试剂1(R1)和试剂2(R2)组成。

1.2.1试剂组成试剂1: Tris缓冲溶液≥20.0mmol/Lα-酮丁酸≥3.0mmol/L试剂2:烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)≥1.0mmol/L2.1 外观a) R1应为无色溶液,无混浊,无未溶解物。

b) R2应为无色溶液,无混浊,无未溶解物。

2.2 净含量液体组分不少于标示值。

a -羟丁酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求zsbk

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a -羟丁酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)适用范围:本产品用于体外定量测定人血清中α-羟丁酸脱氢酶的活性。

1.1包装规格干粉型试剂1(R1):10mL×10,试剂2(R2):100mL×1;试剂1(R1):5mL×10,试剂2(R2):50mL×1。

1.2主要组成成分试剂1(R1)干粉:NADH 0.18mmol/L试剂2(R2)液体:磷酸缓冲液(pH7.50,25℃)50mmol/Lα-酮丁酸钠 3.3mmol/L2.1 外观试剂盒中各组件的外观应满足:2.1.1试剂1(R1)应为白色干粉,复溶后应为无色透明溶液,无混浊、无未溶解物。

2.1.2试剂2(R2)应为无色透明溶液,无杂质、无絮状物,外包装完整无破损。

2.2 净含量液体试剂净含量应不少于标示值。

2.3 试剂空白吸光度在波长340 nm(光径1cm)处,试剂空白吸光度(A)应≥1.100;试剂空白吸光度变化率(△A/min)应≤0.002。

2.4准确度用中生试剂和已上市同类试剂分别测定40个在线性范围内不同浓度的样本,在[5,1000]U/L检测范围内,比对两组数据的相关系数(r)及测值的偏差,要求r≥0.975; 在[5,50]U/L区间内,绝对偏差应不超过±5U/L;在(50,1000]U/L区间内,相对偏差应不超过±10%。

2.5分析灵敏度对应于活性为100U/L的α-HBDH所引起的吸光度变化率(△A/min)的绝对值应在0.008~0.025的范围内。

2.6批内瓶间差)应≤5%。

批内瓶间差的变异系数(CV瓶间2.7批间差测试同一样本,批间差(R)应≤6%。

2.8线性范围在[5,1000]U/L范围内,线性相关系数(r)应≥0.990;在[5,50]U/L范围内,线性绝对偏差应不超过±5U/L;在(50,1000]U/L范围内,线性相对偏差应不超过±10%。

a-羟丁酸脱氢酶(a-HBDH)操作规程(SOP)

a-羟丁酸脱氢酶(a-HBDH)操作规程(SOP)

a-羟丁酸脱氢酶(a-HBDH)操作规程(SOP)一、用途本产品用于体外定量测定血清、血浆样品中α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)的活性。

二、临床意义(一)概述α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH),酶编号为EC 1.1.2.30。

主要来源于心肌、肾和红细胞。

其活性表示LDH中能利用α-羟丁酸为反应基质的酶活性,主要为LDH1和LDH2的活性。

(二)临床意义血清а-羟丁酸测定主要用于酮症酸中毒的鉴别诊断及跟踪监护。

同时还可用于心肌梗死、肝脏实质细胞病变、活动性风湿性心肌炎、急性病毒性心肌炎、溶血性贫血等疾病的辅助诊断。

三、检验原理α-酮丁酸+NADH+H+−αα-羟丁酸+NAD+−−-HBDH−→NADH的氧化速率与样品中α-HBDH活性成正比,在340nm波长处,通过连续监测吸光度的下降速率(-△A/min),即可计算出样品中α-HBDH的活性。

四、样品血液样品原则上采集晨起空腹血(禁食12小时);患者处于平静、休息状态,减少患者由于运动、饮食带来的影响;静脉采血时患者应取坐位或卧位;止血带使用后1分钟内采血,回血后立即松开;正确使用抗凝剂;防止溶血;防止过失性采样。

样品运送过程中应防止过度振荡、防止样品容器的破损、防止样品被污染、防止样品及唯一性标志的丢失和混淆,防止样品对环境的污染、水分蒸发。

α-HBDH测定样品为不溶血的血清、血浆(肝素或EDTA 抗凝)。

样品应在低温条件下运输保存,样品中α-HBDH在2~8℃保存可稳定7天。

五、试剂(一)试剂组成不同批号试剂中各组份不能互换。

(二)试剂准备R1和R2试剂为即用型液体试剂,开瓶装载即可使用,用后应及时冷藏保存。

(三)试剂的保存及稳定性1. 不能冰冻试剂。

2. 未开瓶的R1和R2试剂应在2~8℃密闭避光贮存,稳定期为瓶签标示的有效期。

开瓶后的试剂应在2~8℃保存,稳定期为30天。

(四)试剂性能可接受的指标空白吸光度:试剂空白在主波长340nm、副波长405nm 处,10mm光径下,吸光度值≥1.000。

α-HBDH,α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒(α-HBDH)检测标准操作规程

α-HBDH,α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒(α-HBDH)检测标准操作规程

1、方法依据:深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)测定试剂盒(DGKC法)测定方法2、适用范围:适用于人血清或血浆α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)的测定。

3、试剂仪器:3.1 试剂:深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司原装试剂盒。

3.2未开启的试剂盒避光保存于2℃~8℃有效期为一年。

试剂开瓶后应避光保存,在2℃~8℃可稳定28天。

试剂不可冰冻。

3.3 仪器:迈瑞BS-2000M全自动生化分析仪.4、操作程序4.1方法原理在α-HBDH催化作用下,α-酮丁酸被还原为α-羟丁酸,同时NADH被氧化为NAD+。

NAD+的生成引起340 nm处吸光度下降,下降速率与样品中α-HBDH的活性成正比。

α-HBDHα-酮丁酸 + NADH + H+ α-羟丁酸 + NAD+4.2样本要求新鲜血清、肝素抗凝或EDTA抗凝血浆,采集后及时测定,应避免溶血和污染。

样本于2℃~8℃保存可稳定3天。

4.3上机操作4.3.1试剂装载、校准、样品和质控血清分析操作详见“《迈瑞BS-2000M全自动生化分析仪标准操作、维护、保养规程》”。

4.3.2 校准:4.3.2.1 标准液的准备:校准品使用深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司配套冻干品,按说明书要求稀释后分装,-20℃冷冻保存,用前提前15分钟从冰箱中取出,复溶到室温后上机检测。

4.3.2.2 校准程序:首次使用校准。

当有以下情况时需重新校准:1)换试剂批号或出现质控漂移时;2)当仪器做完保养后;3)仪器进行零件更换时。

每次试验前用准备好的校准品进行校准,校准通过后进行检测。

4.3.2.3 质控:在标本开始之前做质控,质控通过后方能进行标本的检测。

4.3.3 测试基本参数4.4参考范围72~182 U/L(注:各实验室应有自己的参考范围。

)4.5 方法评价线性范围:10~1000U/L。

当样本测定值超过上限时,应将样本用生理盐水稀释,重新测定,结果乘以稀释倍数。

α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求shouyi

α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求shouyi

α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)适用范围:本试剂用于体外定量测定人血清中α-羟丁酸脱氢酶的活性。

1.1产品规格试剂1:3×80ml,试剂2:3×20ml;试剂1:4×60ml,试剂2:4×15ml;试剂1:6×40ml,试剂2:3×20ml;试剂1:2×80ml,试剂2:2×20ml;试剂1:1×80ml,试剂2:1×20ml;试剂1:1×60ml,试剂2:1×15ml 1.2产品组成成分试剂1:Tris缓冲液50mmol/L,酮丁酸3.3mmol/L。

试剂2:NADH 0.18mmol/L。

2.1 外观试剂1、2均为无色透明溶液。

2.2 装量液体试剂的净含量应不少于标示值。

2.3 试剂空白2.3.1试剂空白吸光度A≥1.0(光径1.0cm,波长340nm)。

2.3.2 试剂空白吸光度变化率ΔA/5min≤0.01。

2.4分析灵敏度测定294U/L被测物,吸光度变化率在0.0732/min~0.1032/min范围内。

2.5 准确度采用比对试验,相关系数r≥0.975,相对偏差≤10%。

2.6 精密度2.6.1 重复性变异系数CV≤5%。

2.6.2 批间差批间相对极差≤6%。

2.7 线性区间a)(0,1000]U/L(37℃)。

在规定的线性区间内,测定值与样本浓度值的相关系数(r)应不低于0.990。

b)(0,100]U/L区间内,线性绝对偏差应不超过±10U/L;(100,1000]U/L 区间内,线性相对偏差应不超过±10%。

2.8稳定性原装试剂2~8℃避光保存,有效期12个月,有效期满后两个月内测定结果应符合2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7的要求。

α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求shouyi

α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求shouyi

α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)适用范围:本试剂盒用于体外定量测定人血清中α-羟丁酸脱氢酶的活性浓度。

1.1产品型号/规格1.2产品组成试剂1(干粉):酮丁酸3.3mmol/L,NADH0.3mmol/L。

试剂2:磷酸盐缓冲液50mmol/L。

2.1 外观试剂1为干燥均匀的白色粉末;试剂2为无色透明溶液;试剂盒各组分齐全、完整,液体无渗漏,标签字迹清晰牢固不易脱落,外包装完整无破损。

2.2 装量液体试剂的净含量应不少于标示值。

2.3 试剂空白2.3.1 试剂空白吸光度在37℃、340nm波长、1cm光径条件下,试剂空白吸光度应不小于1.1。

2.3.2. 试剂空白吸光度变化率在37℃、340nm波长、1cm光径条件下,用生理盐水作为样品加入试剂测试时,试剂空白吸光度变化率(ΔA/min)应不大于0.002/min。

2.4 分析灵敏度测定268U/Lα-羟丁酸脱氢酶时,吸光度的变化率在(0.0641±0.0128)/min范围内。

2.5 准确度采用比对试验,相关系数r2≥0.95,相对偏差应不超过±10%。

2.6 精密度2.6.1 重复性用血清样品或质控样品重复测试所得的变异系数(CV)应不大于5.0%。

2.6.2 批内瓶间差试剂(盒)批内瓶间差应不大于5.0%。

2.6.3 批间差试剂(盒)批间相对极差应不大于8.0%。

2.7 线性区间测试血清样本,试剂线性在[10,1000]U/L(37℃)区间内:a) 线性相关系数|r|应不小于0.990;b) [10,100]U/L区间内,线性绝对偏差应不超过±10U/L;(100,1000]U/L 区间内,线性相对偏差应不超过±10%。

2.8稳定性2.8.1复溶稳定性试剂复溶后2~8℃避光保存稳定3天,到稳定期后的样品检测试剂空白、准确度、线性区间应符合2.3、2.5、2.7的要求。

2.8.2效期稳定性原包装试剂2~8℃避光保存有效期12个月,到效期后的样品检测试剂空白、准确度、线性区间应符合2.3、2.5、2.7的要求。

α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求kemei

α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求kemei

α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)适用范围:本试剂盒用于体外定量测定人血清中α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)的活性。

1.1包装规格试剂1:2×60ml 试剂2:2×15ml试剂1:5×60ml 试剂2:5×15ml1.2主要组成成分试剂1主要组分:α-酮丁酸钠 4.5mmol/L试剂2主要组分:NADH 1.45 mmol/L2.1外观2.1.1试剂1应为无色溶液,无混浊,无未溶解物。

2.1.2试剂2应为无色溶液,无混浊,无未溶解物。

2.2装量液体试剂的净含量应不少于标示值。

2.3试剂空白2.3.1试剂空白吸光度:α-HBDH试剂盒在波长340nm处测定试剂的吸光度值,应不小于1.1000。

2.3.2试剂空白吸光度变化率:α-HBDH试剂盒在波长340nm处测定试剂的空白吸光度变化率,每分钟的变化值应不大于0.002。

2.4分析灵敏度测试120U/L α-羟丁酸脱氢酶时,吸光度变化率应不小于0.01。

2.5准确度用本公司α-HBDH试剂盒和已上市公司α-HBDH试剂盒同时测定40个临床样本,用线性回归方法计算两组结果的线性相关系数(r2)应不小于0.95,在[25,1000]U/L区间内,线性相对偏差应不超过±10%。

2.6精密度2.6.1重复性重复测试(180±18)U/L的样本,所得结果的变异系数CV应不大于5%;2.6.2批间差测试(180±18)U/L的样本,所得结果的批间相对极差应不大于10%。

2.7线性范围α-HBDH试剂盒在[25,1000]U/L范围内,线性相关系数(r)应不小于0.990;a)在[25,100]U/L区间内,线性绝对偏差应不超过±10U/L;b)在(100,1000]U/L区间内,线性相对偏差应不超过±10%。

2.8稳定性原包装的试剂盒在2℃~8℃避光保存,有效期为12个月。

谷氨酸脱氢酶(GLDH)测定试剂盒(α-酮戊二酸底物法)产品技术要求百奥泰康

谷氨酸脱氢酶(GLDH)测定试剂盒(α-酮戊二酸底物法)产品技术要求百奥泰康

谷氨酸脱氢酶(GLDH)测定试剂盒(α-酮戊二酸底物法)适用范围:该产品用于体外定量测定人血清或血浆中谷氨酸脱氢酶的活性。

1.1 产品规格试剂1:60mL×2,试剂2:20mL×2 ;试剂1:60mL×1,试剂2:20mL×1;试剂1:45mL×2,试剂2:15mL×2;试剂1:45mL×1,试剂2:15mL×1;试剂1:30mL×1,试剂2:10mL×3;试剂1:30mL×2,试剂2:10mL×6;试剂1:300mL×1,试剂2:100mL×1;试剂1:15mL×1,试剂2:5mL×1;试剂1:3000mL×1,试剂2:1000mL×1;192人份(试剂1:51mL,试剂2:17mL);1.2组成成分2.1 外观试剂R1为无色澄清液体;试剂R2为无色或淡黄色澄清液体.2.2 净含量液体试剂的净含量应不少于标称量。

2.3 试剂空白2.3.1试剂空白吸光度空白吸光度应≥0.8000。

2.3.2 空白吸光度变化率试剂空白吸光度变化率(ΔA/min)应≤0.02。

2.4 分析灵敏度浓度为30 U/L时,其吸光度变化率应≥0.00502.5线性在[1,120] U/L范围内,线性相关系数r≥0.990,在[1,40] U/L范围内绝对偏差应不超过4 U/L,在(40,120] U/L范围内相对偏差应不超过±10%。

2.6精密度变异系数(CV%)应≤8%。

2.7 批间差不同批号之间测定结果的相对极差应≤10%。

2.8准确度回收试验:回收率90%-110%。

2.9稳定性原包装试剂,在2℃~8℃下有效期为12个月,取失效期的试剂盒检测其试剂空白、分析灵敏度、线性、精密度、准确度应分别符合2.3、2.4、2.5、2.6、2.8的要求。

α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求aiweide

α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求aiweide

α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)适用范围:用于体外定量测定人血清中α-羟丁酸脱氢酶的活性1.1包装规格a) 试剂1:2×45mL,试剂2:1×18mL;b) 试剂1:4×50mL,试剂2:2×20mL;c) 试剂1:2×100mL,试剂2:2×20mL;1.2主要组成成分1.2.1试剂1主要组分1.2.2 试剂2主要组分2.1 外观试剂1:无色澄清液体;试剂2:淡黄色澄清液体。

2.2 试剂装量应不低于试剂瓶标示装量。

2.3 试剂空白2.3.1试剂空白吸光度在340nm波长处测定试剂空白吸光度,应>1.1。

2.3.2试剂空白吸光度变化率在340nm波长处测定其空白吸光度变化率|△A/min|<0.002。

2.4 分析灵敏度测定HBDH含量为100U/L的样品时,其△A/min应为0.0224~0.0274。

2.5 线性范围2.5.1在[25,750] U/L范围内,线性回归的确定系数应不低于0.990;2.5.2测试浓度在[25,100] U/L范围内,线性绝对偏差应不超过±10 U/L;测试浓度在(100,750] U/L范围内,线性相对偏差应不超过±10%。

2.6测量精密度2.6.1重复性:用三个水平的样本重复测试其变异系数(CV)应不超过5%。

2.6.2批间差:抽取3个不同批号的试剂,对同一份样本进行重复测定,相对极差≤10%。

2.7 准确度以证参考物质为检测样本时,测定结果相对偏差不超过±15%。

2.8稳定性取在2℃~8℃条件下贮存达到18个月的试剂进行检测,应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7的要求。

谷氨酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮戊二酸底物法)产品技术要求baiding

谷氨酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮戊二酸底物法)产品技术要求baiding

谷氨酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮戊二酸底物法)适用范围:用于体外定量测定人血清中谷氨酸脱氢酶的含量。

1.1 规格1.2 组成:2.1 外观2.1.1试剂1:无色液体,无浑浊,无不溶物。

2.1.2试剂2:无色至淡黄色液体。

2.1.3包装外观应整洁,标签字迹清晰,不易脱落。

2.2 净含量液体试剂的净含量不低于标示体积。

2.3 试剂空白2.3.1试剂空白吸光度试剂空白吸光度≥0.8。

2.3.2试剂空白吸光度变化率试剂空白吸光度变化率(ΔA/分)≤0.02。

2.4 分析灵敏度样本浓度为30U/L时,吸光度变化率(ΔA/分)≥0.0030。

2.5 线性在[4,120] U/L的范围内,线性相关系数r≥0.990。

测试浓度在[4,40] U/L时,绝对偏差应不超过±4 U/L;测试浓度在(40,120] U/L时,相对偏差应不超过±10%。

2.6 精密度2.6.1重复性用高、低2个浓度的样本测试试剂盒,各重复测试10次,其变异系数(CV)应不大于10%。

2.6.2批间差用样本分别测试3个不同批次的试剂盒,每个批次测试3次,其相对极差(R)应不大于10%。

2.7 准确度与已上市产品进行对比试验,在[4,120] U/L的范围内,线性相关系数r≥0.975。

测试浓度在[4,40] U/L时,绝对偏差应不超过±4 U/L;测试浓度在(40,120] U/L时,相对偏差应不超过±10%。

2.8 效期稳定性原包装试剂盒在2℃~8℃密封避光保存条件下有效期为12个月。

有效期满后3个月内测试,应满足2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7的要求。

人酮戊二酸脱氢酶(-KGDHC)酶联免疫吸附测定试剂盒

人酮戊二酸脱氢酶(-KGDHC)酶联免疫吸附测定试剂盒

人α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDHC)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书本试剂盒仅供体外研究使用!预期应用ELISA法定量测定人尿液或其它相关生物液体中α-KGDHC含量。

实验原理用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗α-KGDHC抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗α-KGDHC抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB 显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的α-KGDHC呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1.酶联板:一块(96孔)2.标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为100ug/ml,做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释)后,分别稀释成100ug/ml,50ug/ml,25ug/ml,12.5ug/ml,6.25ug/ml,3.12 ug/ml,1.56ug/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0ug/ml,临用前15分钟内配制。

如配制50 ug/ml标准品:取0.5ml(不要少于0.5ml)100ug/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。

3.样品稀释液:1×20ml。

4.检测稀释液A:1×10ml。

5.检测稀释液B:1×10ml。

6.检测溶液A:1×120μl(1:100)临用前以检测稀释液A1:100稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100μl/孔),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。

如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。

7.检测溶液B:1×120μl/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B1:100稀释。

谷氨酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮戊二酸底物法)产品技术要求huayu

谷氨酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮戊二酸底物法)产品技术要求huayu

谷氨酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮戊二酸底物法)适用范围:用于体外定量测定人血清中谷氨酸脱氢酶的活性。

1.1 产品型号/规格试剂1:1×30 ml,试剂2:1×10 ml;试剂1:2×30 ml,试剂2:2×10 ml;试剂1:4×30 ml,试剂2:4×10 ml;试剂1:8×30 ml,试剂2:8×10 ml;试剂1:1×45 ml,试剂2:1×15 ml;试剂1:2×45 ml,试剂2:2×15 ml;试剂1:3×50 ml,试剂2:2×25 ml;试剂1:1×60 ml,试剂2:1×20 ml;试剂1:2×60 ml,试剂2:2×20 ml;试剂1:2×90 ml,试剂2:2×30 ml;试剂1:2×90 ml,试剂2:3×20 ml;试剂1:4×90 ml,试剂2:4×30 ml;试剂1:2×15 ml,试剂2:2×5 ml ;试剂1:4×15 ml,试剂2:4×5 ml ;试剂1:8×15 ml,试剂2:8×5 ml ;试剂1:16×15 ml,试剂2:16×5 ml。

校准品:1 ml/瓶×1瓶(选配)1.2 主要组成成分试剂1:三乙醇胺缓冲液50 mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA) 3.0 mmol/L醋酸铵120 mol/L二磷酸腺苷(ADP)≥1.35 mmol/L烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)0.25 mmol/L乳酸脱氢酶(LDH)≥2 U/L试剂2:三乙醇胺缓冲液8.0 mmol/Lα-酮戊二酸 40 mmol/L校准品(选配):Tris缓冲液100 mmol/L Proclin-300 0.5‰谷氨酸脱氢酶目标浓度100.00U/L注:校准品浓度具有批差异性,具体浓度见校准品瓶签。

α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求wantaiderui

α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求wantaiderui

α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮丁酸底物法) 适用范围:用于体外定量测定人血清中α-羟丁酸脱氢酶的活性。

1.1包装规格试剂1:60mL×8 、试剂2:48mL×2;试剂1:65mL×3 、试剂2:39mL×1;试剂1:50mL×4 、试剂2:20mL×2;试剂1:50mL×1 、试剂2:10mL×1;试剂1:100mL×2 、试剂2:20mL×2;试剂1:20mL×1 、试剂2:4mL×1;2400 测试/盒(试剂1:70mL×4 、试剂2:14mL×4);1680 测试/盒(试剂1:99mL×2 、试剂2:20mL×2);1260 测试/盒(试剂1:50mL×3 、试剂2:9mL×3);840 测试/盒(试剂1:50mL×2 、试剂2:10mL×2);1260 测试/盒(试剂1:50mL×3 、试剂2:10mL×3);900 测试/盒(试剂1:25mL×2 、试剂2:5mL×2);1200 测试/盒(试剂1:70mL×2 、试剂2:14mL×2);960 测试/盒(试剂1:50mL×4 、试剂2:10mL×4);1640 测试/盒(试剂1:64mL×3 、试剂2:39mL×1);600 测试/盒(试剂1:50mL×1 、试剂2:9mL×1)。

1.2组成成分试剂1:磷酸盐缓冲液(pH 7.5) 50mmol/Lα-氧代丁酸 2.3mmol/L试剂2:还原型辅酶Ⅰ 0.194mmol/L2.1试剂装量应不低于试剂瓶标示装量。

2.2外观试剂1:无色澄清液体;试剂2:无色澄清液体。

2.3试剂空白2.3.1试剂空白吸光度测定温度:37℃;测定波长:340nm;比色杯光径:1.0cm;其空白吸光度应>1.2。

α-酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)活性测定试剂盒说明书

α-酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)活性测定试剂盒说明书

货号: QS2100 规格:50管/48样α-酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)活性测定试剂盒说明书紫外分光光度法正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义:α-KGDH(EC 1.2.4.2)广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中,是三羧酸循环调控关键酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰辅酶A。

测定原理:α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和辅酶A生成琥珀酰辅酶A、二氧化碳和 NADH,NADH 在340 nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。

自备实验用品及仪器:紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:试剂一:50mL×1瓶,-20℃保存;试剂二:10mL×1瓶,-20℃保存;试剂三:1mL×1支,-20℃保存;试剂四:液体55.5mL×1瓶,4℃保存;试剂五:粉剂×1支,4℃保存;试剂六:粉剂×1支,4℃保存;试剂七:粉剂×1支,4℃保存;试剂八:粉剂×1支,4℃保存;试剂九:粉剂×1支,-20℃保存;试剂十:粉剂×1支,-20℃保存;临用前加入2.1mL蒸馏水充分混匀待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

工作液的配制:临用前把试剂五、试剂六、试剂七、试剂八和试剂九转移到试剂四中混合溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

样本的前处理:组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:①称取约0.1g组织或收集500万细菌或细胞,加入1mL试剂一和10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

②将匀浆600g,4℃离心5min。

③弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。

④上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的α-KGDH(此步可选做)。

α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求lideman

α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求lideman

α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)适用范围:本产品用于体外定量测定人血清中α-羟丁酸脱氢酶的含量。

1.1 规格试剂1(R1):4×80mL,试剂2(R2):4×16mL;试剂1(R1):2×400mL,试剂2(R2):2×80mL;试剂1(R1):5×60mL,试剂2(R2):5×12mL;试剂1(R1):2×72mL,试剂2(R2):1×36mL;试剂1(R1):3×40mL,试剂2(R2):3×8mL;试剂1(R1):2×80mL,试剂2(R2):2×16mL;试剂1(R1):1×20mL,试剂2(R2):1×6mL;试剂1(R1):2×60mL,试剂2(R2):2×12mL;试剂1(R1):4×60mL,试剂2(R2):4×12mL;试剂1(R1):1×1000mL,试剂2(R2):1×200mL;试剂1(R1):1×5000mL,试剂2(R2):1×1000mL;试剂1(R1):2×12mL,试剂2(R2):2×2.4mL;试剂1(R1):5×12mL,试剂2(R2):5×2.4mL;试剂1(R1):10×12mL,试剂2(R2):10×2.4mL;试剂1(R1):20×12mL,试剂2(R2):20×2.4mL;试剂1(R1):2×15mL,试剂2(R2):2×3mL;试剂1(R1):5×15mL,试剂2(R2):5×3mL;试剂1(R1):10×15mL,试剂2(R2):10×3mL;试剂1(R1):20×15mL,试剂2(R2):20×3mL;320T:试剂1(R1):83mL,试剂2(R2):16.6mL;校准品(选配):1×5mL;5×5mL;20×5mL。

α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求sainuopu

α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求sainuopu

α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)适用范围:用于体外定量测定人体血清中α-羟丁酸脱氢酶的活性。

1.1试剂盒包装规格试剂1:1×25ml,试剂2:1×5ml;试剂1:2×60ml,试剂2:2×12ml;试剂1:3×40ml,试剂2:3×8ml;试剂1:4×60ml,试剂2:4×12ml;试剂1:2×400ml,试剂2:1×160ml;试剂1:1×10L,试剂2:1×2L;试剂1:2×40ml,试剂2:2×8ml;试剂1:2×60ml,试剂2:2×15ml;试剂1:2×40ml,试剂2:2×10ml。

校准品(选配,冻干品):1×1ml,1×3ml,1×5ml。

1.2试剂盒主要组成成分2.1 外观液体双试剂:试剂1无色澄清液体;试剂2无色至浅黄色澄清液体。

校准品:冻干品,溶解后为淡黄色液体。

2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。

2.3 试剂空白2.3.1试剂空白吸光度在37℃、340nm波长、1cm光径条件下,试剂空白吸光度应不小于1.1。

2.3.2试剂空白吸光度变化率在37℃、340 nm波长、1cm光径条件下,用生理盐水作为样品加入试剂测试时,试剂空白吸光度变化率(ΔA/min)应不大于0.002。

2.4 分析灵敏度测定活性为100U/L的样本时,吸光度变化率(ΔA/min)应不小于0.010。

2.5 线性范围测试血清样本,试剂线性在[25,750]U/L(37℃)区间内:a)线性相关系数|r|应≥0.990;b)[25,100]U/L区间内,线性绝对偏差不超过±10U/L;(100,750)U/L区间内,线性相对偏差应不超过±10%。

2.6 重复性重复测试两份高低浓度的样本,所得结果的重复性(变异系数,CV%)应不大于5%。

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货号:MS2100 规格:100管/96样α-酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)活性测定试剂盒说明书
微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
α-KGDH(EC 1.2.4.2)广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中,是三羧酸循环调控关键酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰辅酶A。

测定原理:
α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和辅酶A生成琥珀酰辅酶A、二氧化碳和 NADH,NADH 在340 nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。

自备实验用品及仪器:
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:
试剂一:100mL×1瓶,-20℃保存;
试剂二:20mL×1瓶,-20℃保存;
试剂三:1.5mL×1支,-20℃保存;
试剂四:液体20mL×1瓶,4℃保存;
试剂五:粉剂×1瓶,-20℃保存;
试剂六:粉剂×1支,-20℃保存;
样本的前处理:
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:
1、称取约0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研
钵匀浆。

2、将匀浆600g,4℃离心5min。

3、弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。

4、上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的α-KGDH(此步可选做)。

5、在步骤④的沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,
超声3秒,间隔10秒,重复30次),用于线粒体α-KGDH活性测定。

测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2、样本测定
(1)在试剂五中加入18mL试剂四充分溶解,置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min;现配现用;
(2)在试剂六中加入1mL蒸馏水,充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
(3)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、10μL试剂六和180μL试剂五,混匀,立即记录340nm处20s时的吸光值A1和 2min20s后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。

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α-KGDH活性计算:
(1)按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

α-KGDH活性(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

α-KGDH(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=325×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

α-KGDH活性(nmol/min/104cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.65×ΔA
V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入提取液体积,0.202 mL;T:反应时间,2min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

b.用96孔板测定的计算公式如下
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活性单位。

α-KGDH活性(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活性单位。

α-KGDH活性(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=650×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活性单位。

α-KGDH活性(nmol/min/104cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=1.3×ΔA
V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:96孔板光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入提取液体积,0.202 mL;T:反应时间,2min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

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