肿瘤标志物筛选策略与新肿瘤标志物

GP73
▪ GP73是存在于高尔基体的一种跨膜蛋白。
▪ 2000年Kladney研究表明，在正常的人体肝组织 中，GP73主要由胆管上皮细胞表达，而肝细胞 表达很少甚至不表达。肝细胞受到病毒感染后可 引起GP73的表达上调。
▪ 2005年Block等发现，在肝癌患者血清中GP73水 平显著升高。在一项研究中，与肝硬化患者相比， 144例肝癌患者的血清GP73水平显著升高。 GP73诊断肝癌的敏感性为69%，特异性为75%。
▪ 电喷雾电离质谱术
ESI （ Electrospray ionisation ）
单克隆抗体技术
单克隆抗体技术的核心是用骨髓瘤 细胞与经特定抗源免疫刺激的B淋巴细胞 融合得到杂交瘤细胞，杂交瘤细胞既能 象骨髓瘤细胞那样在体外无限增殖，又 具有B淋巴细胞产生特异性抗体的能力。
单克隆抗体技术
1.使用肿瘤细胞免疫动物后，得到的杂交瘤 细胞产生的抗体，反过来寻找抗原。
差异比较
组织芯片
是生物芯片技术的一个重要分支，是将 许多不同个体组织标本以规则阵列方式排 布于同一载玻片上，进行同一指标的原位 组织学研究。
1 组织芯片制备过程
①选取所需蜡块,常规切片做HE 染色,显微镜下 确定目标区并做定位标记。
②采用组织芯片仪在受体蜡块上打孔,并精确排成 微孔阵列。
③在做标记的蜡块上钻取组织柱,按设计方案移到 受体蜡块上。
④把设计好的蜡块放入温箱,根据蜡质,调定温箱 温度,在半融状态下取出,室温冷却,放入4 ℃冰 箱中备用。
⑤借助特定切片辅助系统—粘着包被带卷片系统, 对组织芯片蜡块连续切片。切片厚度2～ 3μm , 一般可切片50～100 张。
各种不同低、中、高密度组织芯片
1,2是低密度组织芯片（组织点<200）。3,4,5,6是中密度组织芯片(组织点200-600)。7,8 是高密度组织芯片(组织点>600)
蛋白质差异表达比较 Proteomics
1.Expression proteomics (表达蛋白组学)
The study of global changes in protein expression
2.Cell-map proteomics （细胞图谱蛋白组学）
The systematic study of proteinprotein interactions through the isolation of protein complexes
基因芯片
基因芯片的测序原理是杂交测序方法， 即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进 行核酸序列测定的方法，在一块基片表面 固定了序列已知的核苷酸的探针。
DNA芯片
6400点的基因芯片
（面积 12X14 mm)
蛋白质差异表达比较
▪ 二维电泳 ▪ 蛋白质比较研究的质谱相关技术 ▪ SELDI蛋白质芯片技术
▪ 肿瘤相关性抗原(tumor-associated antigen,TAA)
肿瘤细胞和正常组织细胞都表达的抗原物质，只是 其含量在细胞癌变时明显升高，仅表现为量的变化， 无严格肿瘤特异性，如胚胎抗原，分化抗原等。
理想的肿瘤标志物
1. 灵敏度高：可以用于肿瘤早期发现、早期诊断 2. 特异性好：肿瘤为阳性，而非肿瘤时为阴性 3. 能对肿瘤进行定位：具有器官特异性 4. 与疾病的严重程度：肿瘤大小，分期有关 5. 监测肿瘤的疗效 6. 监测肿瘤的复发 7. 预测肿瘤的预后
一、临床前探索性研究
▪ 寻找新的肿瘤标志物 研究标本 1.肿瘤组织与非肿瘤组织 2.肿瘤细胞株与正常细胞株 研究使用的方法技术 1. 组织芯片 2. 基因芯片 3. 蛋白质差异表达比较 4. 单克隆抗体技术
一、临床前探索性研究
▪ 寻找新的肿瘤标志物 研究标本 1.肿瘤组织与非肿瘤组织 2.肿瘤细胞株与正常细胞株 研究使用的方法技术 1. 组织芯片 2. 基因芯片 3. 蛋白质差异表达比较 4. 单克隆抗体技术
▪ 理想是美好的，道路是曲折的
理想状态
实际状态
肿瘤太狡猾
▪ 肿瘤细胞异质性大 ▪ 肿瘤的发生发展过程复杂 ▪ 多基因多因素参与
理想肿瘤标志物任重而道远！
肿瘤标志物的筛选和研发策略
肿瘤标志物的筛选和研发策略
▪ 美国国立癌症研究员制定的五个阶段 一、临床前探索性研究 二、临床方法检测已有疾病 三、纵向回顾性分析研究 四、前瞻性筛查研究 五、控癌研究
2.在肿瘤细胞中验证
新肿瘤标志物
1.HE4 2.GP73 3.Her-2 4. Pepsinogen 5.S100 6.PRO-GRP
HE4
▪ 属于乳清酸性4-二硫化中心（WFDC）蛋 白家族.
▪ HE4首先在附睾远端的上皮中被发现，并 且最初认为它是一种与精子成熟相关的蛋 白酶抑制剂。一
▪ 分泌型HE4已经在卵巢癌患者的血清中检 测到有高水平表达。
肿瘤标志物研究策略 及新肿瘤标志物
肿瘤标志物
肿瘤细胞所产生或分泌的某种蛋白质或其它物质，与肿 瘤的存在和发展密切关系。 可用于肿瘤的筛查、诊断、治疗疗效监测和预后判断。
Байду номын сангаас▪ 常见分类法:
蛋白类 糖蛋白类 酶类 激素类 核酸类
▪ 肿瘤特异性抗原(tumor specific antigen, TSA) 仅存在于某种肿瘤细胞表面，而不存在于相应正常 组织细胞或其它肿瘤细胞表面的抗原。
每年有很多新的肿瘤标志物报道 期待更多的新的肿瘤标志物
二维电泳
双向凝胶电泳是利用不同蛋白质的物理、化学性质的差异，把复杂 蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上展开。 第一向等电聚焦: 等电点 第二向SDS-PAGE：分子量
蛋白质比较研究的质谱相关技术
▪ 基质辅助激光解吸电离技术MALDI (Matrix-assisted laser desorption/ionization)