丙酮酸激酶(Pyruvate kinase,PK)试剂盒说明书
磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法
磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC3310规格：50T/48S产品内容：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体45mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂35mL×1瓶，-20℃避光保存；临用前加入35mL试剂一溶解。
可溶解后分装-20℃保存，避免反复冻融。
试剂三：液体45μL×1支，4℃避光保存；临用前加入蒸馏水按体积比1：120稀释，现用现配；试剂四：液体155μL×1支，4℃避光保存；临用前加入蒸馏水按体积比7：250稀释，现用现配；试剂五：粉剂×1瓶，-20℃避光保存；临用前加入2.5mL蒸馏水充分溶解；可溶解后分装-20℃保存，避免反复冻融。
产品说明：PEPCK（EC 4.1.1.32）广泛存在于动物、开花植物、藻类、部分真菌和细菌中。
该酶催化草酰乙酸转化为磷酸烯醇式丙酮酸,是调节糖异生途径的第一限速酶。
，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化PEPCK催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸和CO2生成NAD+，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映PEPCK活性。
试验中所需的仪器和试剂：紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、粗酶液提取：组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后8000g，4℃，离心10min，取上清，置冰上待测。
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
丙酮酸(PA)含量检测试剂盒说明书 微量法
丙酮酸（PA）含量检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC2205规格：100T/96S产品内容：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体5mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体25mL×1瓶，4℃保存。
丙酮酸钠标准液，1mg/mL：液体1mL×1瓶，4℃保存产品说明：丙酮酸通过乙酰CoA连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢，起着重要的枢纽作用。
丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，在碱性溶液中呈樱红色。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水。
操作步骤：一、丙酮酸提取：1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。
3、血清（浆）样品：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议取0.1mL血清（浆）加入1mL提取液），进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。
4、标准品的准备：将标准品用蒸馏水稀释至100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0g/mL。
二、测定步骤：1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至520nm，蒸馏水调零。
2、在微量玻璃比色皿或96孔板中加入75L标准液或样本和25L试剂一，混匀，静置2min，加入125L试剂二，混匀，于520nm波长处测定吸光值A。
梓醇干预PKM2
·药学研究·梓醇干预PKM2/LDHA表达调控Th17细胞分化的机制研究Δ葛玉＊，陈雪，王福荣，包宇杰，丁鹏，周玲玲 #（南京中医药大学药学院，南京 210023）中图分类号 R965；R285文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2024）01-0015-06DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2024.01.03摘要目的研究梓醇通过干预丙酮酸激酶M2（PKM2）、乳酸脱氢酶A（LDHA）表达进而影响辅助性T细胞17（Th17）分化的机制。
方法从C57BL/6小鼠脾脏中分选出naive CD4+ T细胞，通过加入定向分化刺激剂诱导72 h使naive CD4+ T细胞向Th17细胞分化。
在诱导分化的同时，分别用0（定向对照）、20、40、80μg/mL梓醇对细胞进行处理。
采用流式细胞术检测细胞中Th17细胞分化比例，采用比色法检测细胞培养上清液中丙酮酸、乳酸水平，采用实时荧光定量-逆转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）法检测细胞中视黄酸相关孤儿受体γt（RORγt）、PKM2、LDHA mRNA表达情况，采用Western blot法检测细胞中PKM2、LDHA、信号转导和转录激活因子3（STAT3）、磷酸化STAT3（p-STAT3）蛋白表达情况。
结果与定向对照组比较，经20、40、80μg/mL梓醇作用72 h 后，细胞中Th17细胞分化比例分别降低了6.74%、8.41%、9.24%；细胞培养上清液中丙酮酸、乳酸水平，细胞中PKM2、LDHA、RORγt mRNA表达水平以及细胞中PKM2、LDHA蛋白表达水平和STAT3磷酸化水平均显著降低（P＜0.05）。
结论梓醇可通过下调PKM2、LDHA表达来降低糖酵解水平，进而抑制Th17细胞分化。
关键词梓醇；糖酵解；辅助性T细胞17；丙酮酸激酶M2；乳酸脱氢酶AMechanism of catalpol regulating Th17 cell differentiation by interfering PKM2/LDHA expressionGE Yu，CHEN Xue，WANG Furong，BAO Yujie，DING Peng，ZHOU Lingling（School of Pharmacy，Nanjing University of Traditional Chinese Medicine， Nanjing 210023， China）ABSTRACT OBJECTIVE To investigate the mechanism of catalpol affecting the differentiation of helper T cell 17（Th17）by interfering the expressions of pyruvate kinase M2（PKM2）and lactate dehydrogenase A （LDHA）. METHODS The naive CD4+T cells were selected from the spleen of C57BL/6mice，and were differentiated into Th17cells by adding directional differentiation stimulants for 72hours. At the same time，the cells were treated with 0（directed control），20，40and 80μg/mL catalpol. The flow cytometry was used to detect the proportion of Th17 cell differentiation in cells； the colorimetric method was adopted to detect the levels of pyruvate and lactate in cell culture supernatant； mRNA expressions of retinoid-related orphan nuclear receptor gamma t （RORγt），PKM2and LDHA were detected by qRT-PCR method； Western blot was used to detect the expression levels of PKM2，LDHA，signal transducer and activator of transcription 3（STAT3），and phosphorylated STAT3（p-STAT3）proteins in cells. RESULTS Compared with the directed control group，after 72hours of treatment with 20，40，80μg/mL catalpol，the differentiation ratio of Th17cells were decreased by 6.74%，8.41%，9.24%，and the levels of pyruvate and lactate in the cell culture supernatant，the mRNA expressions of PKM2，LDHA and RORγt as well as the protein expressions of PKM2and LDHA and the phosphorylation of STAT3were significantly reduced （P＜0.05）.CONCLUSIONS Catalpol can reduce the glycolysis level by down-regulating the expressions of PKM2 and LDHA， thereby inhibiting the differentiation of Th17 cells.KEYWORDS catalpol； glycolysis； helper T cell 17； pyruvate kinase M2； lactate dehydrogenase A类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种以关节滑膜炎症为主的慢性自身免疫性疾病，也可伴有关节外表现，多发于女性，在中国大陆地区的发病率为0.42%[1]。
丙酮酸测定试剂盒(乳酸脱氢酶法)产品技术要求jiuqiang
丙酮酸测定试剂盒（乳酸脱氢酶法）适用范围：用于体外定量测定人体血清中丙酮酸（PYR）的含量，临床主要用于糖尿病引起的酮症酸中毒的辅助诊断。
1.1包装规格包装规格见表1表1 包装规格1.2主要组成成分主要组成成分见表2。
表2 主要组成成分注：不同批号的校准品、质控品赋值有差异，具体赋值详见靶值单。
2.1 外观试剂1为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂2为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；校准品为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；质控品为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。
2.2 净含量试剂的净含量应不少于标称量。
2.3 试剂空白吸光度A340nm下测定空白吸光度应≥0.5000。
2.4 准确度回收试验：在临床样本中加入一定体积的校准品溶液，进行测定，回收率在90%～110%之间。
2.5 分析灵敏度样品浓度为200 µmol/L时，其吸光度变化在0.0400～0.1200之间。
2.6 线性区间在[30，1000]µmol/L区间内，线性相关系数r≥0.990，在[30，150]µmol/L区间内绝对偏差应不超过±15µm ol/L，在(150，1000]µmol/L区间内相对偏差应不超过±10%。
2.7 测量精密度2.7.1 重复性对高、低不同浓度的同一血清样本或质控品重复测定10次，其测定值的变异系数（CV％）应不大于10％。
2.7.2 批间差随机抽取三批试剂盒的批间相对极差（R）应不大于10%。
2.8 稳定性试剂盒在2℃～8℃密封避光保存，有效期为12个月。
在试剂盒有效期满后一个月以内，应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7.1的要求。
2.9 校准品溯源性按GB/T 21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求，提供所有产品校准的来源、赋值过程以及测量不确定度，试剂盒校准品溯源至Sigma公司。
人丙酮酸激酶( PK)酶联免疫分析试剂盒 使用说明书
人丙酮酸激酶（PK）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供体外研究使用!预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中丙酮酸激酶（PK）含量。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗PK抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗PK抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的PK呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200U/L，做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释）后，分别稀释为200U/L，100U/L，50U/L，25U/L，12.5U/L，6.25U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为标准浓度0U/L，临用前15分钟内配制。
如配制50U/L标准品：取0.3ml（不要少于0.3ml）100U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf 管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3.样品稀释液：1×20ml。
4.检测稀释液A：1×10ml。
5.检测稀释液B：1×10ml。
6.检测溶液A：1×120μl（1:100）临用前以检测稀释液A1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100μl/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
7.检测溶液B：1×120μl/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B1:100稀释。
稀释方法同检测溶液A。
8.底物溶液：1×10ml/瓶。
磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)试剂盒说明书
货号：MS3500 规格：100管/96样磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK)试剂盒说明书微量法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：PEPCK（EC 4.1.1.32）广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，催化草酰乙酸转化为磷酸烯醇式丙酮酸，是调节糖异生途径的关键酶。
测定原理：，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化PEPCK催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸和CO2NADH氧化生成NAD+，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映PEPCK活性。
自备实验用品及仪器：分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体18 mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体16.5uL×1支，4℃保存；试剂三：粉剂×1支， -20℃保存；试剂四：粉剂×1支，-20℃保存；样本的前处理：1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、工作液的配制：临用前将试剂二和试剂三转移到试剂一中混合溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
3、试剂四的配制：临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
丙酮酸激酶缺乏症,丙酮酸激酶缺乏症的症状,丙酮酸激酶缺乏症治疗【专业知识】
丙酮酸激酶缺乏症,丙酮酸激酶缺乏症的症状,丙酮酸激酶缺乏症治疗【专业知识】疾病简介丙酮酸激酶(pyruvate kinase，PK)缺乏症是发生频率仅次于G-6-PD缺乏症的一种红细胞酶病。
疾病病因一、发病原因1.生化变异型 PK是一分子量为60kD由完全相同或基本相同的亚单位组成的四聚体，在哺乳动物组织中有4种异构酶：L、R、M1和M2。
R型异构酶(R-PK)只存在于成熟的红细胞。
R-PK 用聚丙烯酰胺凝胶电泳后分成两种成分，Rl-PK为一同源四聚体(L2L2)，R1-PK主要存在于原始红细胞和网织红细胞，而R2-PK则主要存在于成熟红细胞。
L-型PK存在肝脏，与R-PK非常相似但不完全相同，M1型存在于肌肉、心脏和脑，M2-PK存在于白细胞和血小板，幼稚细胞中也有M2-PK。
在PK缺乏症的某些患者的红细胞已发现有M2-PK的存在，PK突变型的异质性可以解释PK缺乏表型的大范围变异性。
古典的PK缺乏，除酶活性减低外其余酶的特性均无异常。
起先认为仅只是结构正常的酶产生过少而已，但进一步研究证明存在有仅影响催化活性的酶分子结构改变。
显然，大部分PK突变都伴有结构异常蛋白，而这些蛋白在电泳速度、残留活性、底物亲和度、动力学特征、热稳定度、核苷酸特异性、ATP抑制、变构激活或最适pH方面均不同。
2.遗传方式 PK缺乏症为常染色体隐性遗传。
但偶有呈常染色体显性遗传家系的报道。
一般来说，只有纯合子或复合杂合子才会出现溶血性疾患。
杂合子患者尽管红细胞中有葡萄糖中间产物改变，但无贫血表现。
PK缺乏症杂合子的检出率为0.24%～2.20%。
大部分PK缺乏症患者为复合杂合子，真正的纯合子很少。
3.分子生物学 M2型PK基因定位于15q22 -qter，L型和R型PK基因定位于1q21。
L和R型为异构调节，由用两个组织特异性启动子的同一个基因所转录编码的L型和R型仅只在前2个外显子有差异;M1和M2也是由同一基因所编码，由于剪接的不同而产生两种分别翻译成这种PK的mRNA。
丙酮酸测定试剂盒(乳酸脱氢酶法)产品技术要求zhongshengbeikong
丙酮酸测定试剂盒（乳酸脱氢酶法）适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中的丙酮酸含量。
1.1规格液体双剂型试剂1（R1)：60mL×2, 试剂2（R2)：15mL×2；试剂1（R1)：60mL×1, 试剂2（R2)：15mL×1；试剂1（R1)：40mL×1, 试剂2（R2)：10mL×1；选配校准品：1mL×1；选配质控品（2个水平）：1mL×2。
1.2 规格划分说明根据净含量划分规格。
1.3 主要组成成分试剂盒由试剂1（R1）液体、试剂2（R2）液体、校准品液体（选配）和质控品液体（选配）组成。
1.3.1 试剂1（R1）主要组分：三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲液 100mmol/L还原型辅酶（NADH） 0.35mmol/L1.3.2 试剂2（R2）主要组分：乳酸脱氢酶(LDH) 300U/L1.3.3 校准品主要组分（水基质）：丙酮酸 150～250μmol/L（每批定值）1.3.4 质控品主要组分（水基质）：丙酮酸定值范围：水平1：60～180μmol/L，水平2：180～380μmol/L（每批定值）。
2.1 外观a) 试剂1（R1）应为无色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损；b) 试剂2（R2）应为无色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损；c) 校准品应为无色或淡黄色澄清液体，无混浊，无未溶解物，外包装完整无破损；d) 质控品应为无色或淡黄色澄清液体，无混浊，无未溶解物，外包装完整无破损。
2.2 净含量液体试剂净含量应不少于标示值。
2.3 试剂空白吸光度在波长340nm（光径1cm）处，试剂空白吸光度（A）应≥0.5。
2.4 准确度测定丙酮酸纯品,回收率在80%～120%范围内。
2.5 分析灵敏度对应于浓度为200μmol/L的丙酮酸所引起的吸光度差值（△A）的绝对值应在0.05～0.3的范围内。
丙酮酸激酶缺乏症 病情说明指导书
丙酮酸激酶缺乏症病情说明指导书一、丙酮酸激酶缺乏症概述丙酮酸激酶缺乏症（pyruvate kinase deficiency）简称PK缺乏症，是无氧糖酵解通路中红细胞酶缺陷所致的最常见的溶血性贫血。
其发生频率仅次于葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺陷。
丙酮酸激酶缺乏症是常染色体隐性遗传疾病。
常见有慢性溶血性贫血、新生儿黄疸、胆石症等症状。
英文名称：pyruvate kinase deficiency。
其它名称：PK缺乏症。
相关中医疾病：暂无资料。
ICD疾病编码：暂无编码。
疾病分类：暂无资料。
是否纳入医保：部分药物、耗材、诊治项目在医保报销范围，具体报销比例请咨询当地医院医保中心。
遗传性：丙酮酸激酶缺乏症是常染色体隐性遗传疾病。
发病部位：全身。
常见症状：慢性溶血性贫血、新生儿黄疸、胆石症。
主要病因：基因缺陷。
检查项目：体格检查、血常规、血涂片、血生化、骨髓涂片、红细胞渗透脆性试验、红细胞自体溶血试验、红细胞丙酮酸激酶活力测定、红细胞包涵体试验、骨髓切片组织病理。
重要提醒：丙酮酸激酶缺乏症是常染色体隐性遗传疾病，重者可因贫血而死亡，需早诊断早治疗，有家族史者需做产前筛查。
临床分类：暂无资料。
二、丙酮酸激酶缺乏症的发病特点三、丙酮酸激酶缺乏症的病因病因总述：丙酮酸激酶缺乏症是常染色体上的丙酮酸激酶基因缺陷，导致丙酮酸激酶不能正常合成，从而发生的溶血性贫血疾病。
基本病因：常染色体上的丙酮酸激酶基因缺陷是引起丙酮酸激酶缺乏症的基本病因，磷酸烯醇式丙酮酸在丙酮酸激酶的作用下转换为丙酮酸，同时使ADP（腺苷二磷酸）转化为ATP（腺苷三磷酸）以供应能量。
所以丙酮酸激酶缺乏可使ATP 产生减少，使红细胞内能量缺失和脱水，发生溶血。
危险因素：有丙酮酸激酶缺乏症家族史者，丙酮酸激酶缺乏症发生的风险增加。
诱发因素：有些成年人以往健康，进入老年期、妊娠期或历经感染、过度疲劳等情况引发溶血症状。
四、丙酮酸激酶缺乏症的症状症状总述：丙酮酸激酶缺乏症是常染色体上的丙酮酸激酶基因缺陷，导致丙酮酸激酶不能正常合成，从而发生的溶血性贫血疾病。
丙酮酸激酶测定试剂盒使用说明
丙酮酸激酶测定试剂盒使用说明分光光度法货号:BC0540规格:50管/48样产品内容：提取液：60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体45mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1支，-20℃保存；试剂三：粉剂×1支，-20℃保存；临用前每支加入 1.5mL双蒸水充分溶解备用，用不完的试剂仍4℃保存一周；试剂四：液体×1支，4℃保存；临用前每支加入900µL双蒸水充分溶解备用，用不完的试剂仍4℃保存一周。
产品说明：PK（EC2.7.1.40）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化糖酵解过程中的最后一步反应，是糖酵解过程中的主要限速酶之一，也是产生ATP的关键酶之一，因此测定PK 活性具有重要意义。
PK催化磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成ATP和丙酮酸，乳酸脱氢酶进一步催化NADH和丙酮酸生成乳酸和NAD+，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映PK活性。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本的前处理1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500-1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或者200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1:5-10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
二、测定步骤及加样表：1.分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2.工作液的配置：临用前将试剂二转移至试剂一中，充分溶解待用；现配现用。
丙酮酸激酶和丙酮酸羧化酶的作用
丙酮酸激酶和丙酮酸羧化酶的作用
丙酮酸激酶和丙酮酸羧化酶是两种酶，它们在细胞内参与三羧酸循环（也称为Krebs循环）的代谢过程中。
丙酮酸激酶（Pyruvate Kinase）在糖酵解途径中的聚合酵母中起调节酶作用。
丙酮酸激酶通过催化丙酮酸磷酸化反应，将丙酮酸转化为乳酸或乙醇。
这个酶对维持细胞内丙酮酸/乳酸平衡起着重要作用，同时也是糖酵解途径中生成ATP的一个关键酶。
丙酮酸羧化酶（Pyruvate Carboxylase）是通过催化丙酮酸羧化反应，在三羧酸循环中将丙酮酸转化为草酮酸。
丙酮酸羧化酶在生物体能量代谢中起重要作用。
在人体中，丙酮酸羧化酶主要分布于肝脏、肾皮质和下丘脑中的神经元。
丙酮酸羧化酶催化的反应需要生物素（Biotin）作为辅酶，同时也需要ATP和CO2的参与。
综上所述，丙酮酸激酶将丙酮酸转化为乳酸或乙醇，起到了糖酵解生成ATP和维持丙酮酸/乳酸平衡的作用；而丙酮酸羧化酶则将丙酮酸转化为草酮酸，参与三羧酸循环的代谢过程。
M2PK(pyruvateKinaseM2)丙酮酸激酶M2
M2-PK（pyruvate Kinase M2）丙酮酸激酶-M2S-0101R◆兔抗人、大鼠、小鼠M2-PK多克隆抗体◆200ul/1200.00 1ml/4200.00 (100ug/200ul 500ug/1ml)亲和纯化抗体◆WB=1:300-600 Elisa=1:500-1500 IP=1:50-150 IHC=1:300-600◆M2 分布于初上描述以外的其他组织（尤以肾脏最多）以及胎儿个组织。
PK业是一种癌胚蛋白，在恶性肿瘤中，增高的都是M2型。
抗体动物种属来源缩写：R-兔、M-小鼠、r-大鼠、Sh-山羊、H-人M2-PK（pyruvate Kinase M2）丙酮酸激酶-M2S-0102M◆兔抗人、大鼠、小鼠M2-PK多克隆抗体◆200ul/1200.00 1ml/4200.00 (100ug/200ul 500ug/1ml)亲和纯化抗体◆WB=1:300-600 Elisa=1:500-1500 IP=1:50-150 IHC=1:300-600◆M2 分布于初上描述以外的其他组织（尤以肾脏最多）以及胎儿个组织。
PK业是一种癌胚蛋白，在恶性肿瘤中，增高的都是M2型。
抗体动物种属来源缩写：R-兔、M-小鼠、r-大鼠、Sh-山羊、H-人Melan-A/MarT-1 黑色素-AS-0051R◆兔抗人、大鼠、小鼠黑色素-A多克隆抗体◆0.2ml /1000.00 1ml/2900.00 (100ug/0.2ml 500ug/1ml)亲和纯化抗体◆WB=1:300-600 Elisa=1:500-2000 IP=1:50-100 IHC=1:300-600◆Melan-A/MART-1是分化肿瘤抗原类别中具有代表性的成员，它表达于正常的黑色素细胞和大多数原发及转移的黑色素瘤中。
抗体动物种属来源缩写：R-兔、M-小鼠、r-大鼠、Sh-山羊、H-人MTR-1A(Melatonin receptor-1A) 褪黑素受体（松果体素受体）S-0027R◆兔抗人、大鼠、小鼠褪黑素受体多克隆抗体◆0.2ml /1000.00 1ml/2900.00 (100ug/0.2ml 500ug/1ml)亲和纯化抗体◆WB=1:300-600 Elisa=1:500-1500 IP=1:50-150 IHC=1:300-600◆黑色素是一种广泛存在于多个组织中并具重要正理活动的激素，分子量为38kDa。
丙酮酸激酶和丙酮酸羧化酶的作用
丙酮酸激酶和丙酮酸羧化酶的作用
丙酮酸激酶（pyruvate kinase）和丙酮酸羧化酶（pyruvate carboxylase）是两种参与丙酮酸代谢的关键酶。
丙酮酸激酶是一种催化丙酮酸以磷酸化反应产生磷酸烯醇式丙酮酸（phosphoenolpyruvate，PEP）的酶。
这个反应也是糖酵解途径的最后一步，产生高能磷酸化物质，同时生成一个分子的ATP。
丙酮酸激酶的活性受到一系列调节因子的影响，包括磷酸化状态、底物浓度等。
丙酮酸羧化酶是一种催化丙酮酸以ATP为辅助的辅基，羧化成草酰乙酸（oxaloacetate）的酶。
这个反应是丙酮酸的反向转化，也是某些细胞中异源糖新生途径的重要步骤。
草酰乙酸是某些代谢途径的关键中间产物，可进一步产生葡萄糖或合成脂肪酸和胆固醇等。
丙酮酸羧化酶的活性受到底物浓度和某些代谢物的调节。
丙酮酸激酶缺乏症的病因治疗与预防
丙酮酸激酶缺乏症的病因治疗与预防中文名:丙酮酸激酶缺乏症英文名:pyruvatekinasedeficiency丙酮酸激酶(pyruvatekinase，PK)缺乏症的发生频率仅次于G-6-PD红细胞酶一种红细胞酶疾病。
现已证实PK缺乏症是由PK基因异常主要是由基因异常引起的PK少数基因突变患者缺失或插入ATP缺乏是PK缺乏导致溶血的因素PK活性测定是诊断本病的主要手段。
一、病因1、生化变异型PK一分子量为60kD哺乳动物组织中有四种异构酶，由完全相同或基本相同的亚单位组成：L、R、M1和M2。
R型异构酶(R-PK)只存在于成熟的红细胞中。
R-PK电泳后用聚丙烯酰胺凝胶分为两种成分，Rl-PK同源四聚体(L2L2)，R1-PK它主要存在于原始红细胞和网织红细胞中R2-PK主要存在于成熟的红细胞中。
L-型PK肝脏，和R-PK非常相似但不完全相同，M1肌肉、心脏和大脑中存在型，M2-PK白细胞和血小板也存在于幼稚细胞中M2-PK。
在PK一些缺乏症患者的红细胞已经被发现M2-PK的存在，PK可以解释突变的异质性PK缺乏大范围的表型变异性。
"古典"的PK缺乏，除了酶活性降低外，其他酶的特性没有异常。
一开始，人们认为只有结构正常的酶产生过少，但进一步研究证明，酶分子结构的变化只影响催化活性。
显然，大多数PK电泳速度、残留活性、底物亲和度、动力学特性、热稳定性、核苷酸特异性等突变都伴有结构异常蛋白，ATP抑制、变构激活或最合适pH不同的方面。
2、遗传方式PK缺乏症是常染色体的隐性遗传。
但偶尔会有关于常染色体显性遗传系统的报告。
一般来说，溶血性疾病只发生在纯合子或复合杂合子中。
虽然红细胞中的葡萄糖中间产物发生了变化，但杂合子患者没有贫血。
PK缺乏杂合子的检出率为0.24%～2.20%。
大部分PK复合杂合子是缺乏症患者，真正的纯合子很少。
三、分子生物学M2型PK基因定位于15q22-qter，L型和R型PK基因定位于1q21。
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货号：MS2201 规格：100管/96样丙酮酸激酶（Pyruvate kinase，PK）试剂盒说明书
微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
PK（EC 2.7.1.40）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化糖酵解过程中的最后一步反应，是糖酵解过程中的主要限速酶之一，也是产生ATP的关键酶之一，因此测定PK活性具有重要意义。
测定原理：
PK催化磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成ATP和丙酮酸，乳酸脱氢酶进一步催化NADH和丙酮酸生成乳酸和NAD+，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映PK活性。
自备实验用品及仪器：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成和配制：
提取液：100mL×1瓶，4℃保存;
试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；；
试剂二：粉剂×1支，-20℃保存；
试剂三：液体17μL×1支，4℃保存；
样本的前处理：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
（1）在试剂二瓶中加入17mL试剂一和1mL蒸馏水充分溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
（2）在试剂三中加入1mL蒸馏水充分溶解，冰上放置备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
（3）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、10μL试剂三和180μL试剂二，混匀，立即记录340nm处20s时的吸光值A1和 2min20s后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。
PK活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
第1页，共2页
1、血清（浆）中PK活力的计算:
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PK（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T=1608×ΔA
2、组织、细菌或细胞中PK活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PK（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr （2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PK（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W× V样÷V样总)÷T=1608×ΔA÷W （3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PK（nmol/min /104cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=3.216×ΔA
V反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、血清（浆）中PK活力的计算:
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PK（nmol/min /mL）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T=3216×ΔA
2、组织、细菌或细胞中PK活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PK（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr （2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PK（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W× V样÷V样总)÷T=3216×ΔA÷W （3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PK（nmol/min /104cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=6.432×ΔA
V反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
第2页，共2页。