透明质酸高产菌株选育研究

培 养 ２ 。观 察 各 菌 落在 血 琼 脂 平 板 上 的 形 态 和 溶 ４ｈ
新 鲜水 牛 鼻粘 膜 ， 自南 京 市 江 宁 区某 养 牛 专 业 采
户新 宰杀水 牛 ， ２ 共 ４份 。 １ ２ 培养 基 ． （ ） 心浸 液培 养基 １脑
收 稿 日期 ：０ ｇ １ — ２ ２Ｏ一 １ ７
血 性 ， 接 种 针挑 起 看 粘 度 。选 取 与 文 献 Ｅ ３ 述 类 用 ３描
似 的 菌株 ， 兰 氏染 色 镜 检 ， 进 行 链 球 菌 Ｃ群 生 化 革 并 反 应鉴 定 。
１ ． ， 萄 糖 ２ ０ｇ Ｎａ １ ． ， 脂 ２ ． ， 蒸 ０ ０ｇ 葡 ． ， Ｃ ０ｇ 琼 ５ ００ｇ 加
馏 水 至 １０ ０ ０ ｍＬ， ｐ 值 至 ７ ０ １ １ 下 灭 菌 ２ 调 Ｈ ． ，２℃ Ｏ
ｍｉ ｎ。
（ ） 琼脂 平板 培养 基 ２血
将 灭菌 后 的脑 心浸 液培 养 基 冷 却 至 ５ ℃ ， 无 菌 ０ 在 条 件 ຫໍສະໝຸດ Baidu 加入 １ 新 鲜 无 菌 脱 纤 维 羊 血后 倒 入 平 板 冷 ０
透 明质 酸 （ ａｕ ｏ ｉ ａｉ ， Ｈｙ ｌｒｎｃ ｃ ＨＡ） 是 以 Ｎ～ ｄ ， 乙酰 氨
牛脑 浸 粉 １ ． ， 心 浸 粉 １ ． ， 蛋 白胨 ００ ｇ 牛 ００ ｇ 胰
基 葡萄 糖胺 和 葡 萄糖 醛 酸 为 单 位 ， １ ３糖 苷 键 和 由 ，一
１ ４糖 苷键 连 接 的 高 分 子 直 链 酸 性 粘 多 糖 ， 泛存 ，一 广 在 于高等 动物 的结 缔组 织及 部 分细 菌 内＿ 。 由于 其 溶 １ ］ 液 具有 高粘性 和独 特 的粘 弹 性 而 广 泛 应用 于 临床 、 诊 断、 化妆 品等 领域 。 ］ ’ 透 明质 酸 的 生 产 方 法 主 要 有 提 取 法 和 发 酵 法 两 种 。 由于组织 提取 成 本较 高 、 艺 复杂 ， 工 因此 应用 更 多 的是 以链 球菌 为发 酵 菌种 的微 生物 发酵 法 ＿ 。 目前 透 ３ ］ 明质 酸 的产 生菌 主要 为 链 球 菌 Ａ 群 和 Ｃ群 。其 中链 球菌 Ａ 群具 有人 致病 性 ， 以一般 采 用链 球 菌 Ｃ群 为 所 发酵 起始 菌 株 。国外 发 酵 法 ＨＡ 生 产 已达 产 业 化 阶 段， 但我 国利 用 发 酵 法 生 产 ＨＡ 的技 术 仍 不 成 熟 ， 关 键是 没有 高 产 ＨＡ 的 菌 种 。所 以 从 自然 界 寻 找 ＨＡ
却。
（ ） 子培 养基 ３种
葡 萄 糖 １ ． ， 母 膏 １ ． ， 肉 膏 １ ． ， ０ ０ｇ 酵 ００ｇ 牛 ０ ０ｇ Ｍｇ Ｏ４・７ ． ， Ｏ４ ． ， 蒸 馏 水 至 Ｓ Ｈ２ ２ ０ ｇ Ｋ２ Ｏ ＨＰ ０ ｇ 加 ２ １０ ０ ０ｍＬ， ｐ 值 至 ７ ０ １ １ 下 灭 菌 ２ ｎ 冷 却 调 Ｈ ． ，２ ℃ ０ｍｉ， 至 常温 ， 在无 菌条 件 下加 入 １ 小 牛血 清 。 ０
亿 与 生 物 Ｚ 狸 ２１， Ｉ ７ ｏ３ ００Ｖ ． ． ｏ２ Ｎ
Ｃｈ ｍｉ ｒ ＆ Ｂｉｅ ｇ ｎ ｅｒ ｇ ｅ ｓ ｙ ｔ ｏ ｎ ｉｅ ｉ ｎ
田
透 明质 酸 高产 菌株 选 育研 究
叶倩 文 。 陆洋 ， 新松 卢 李
（ 东南大 学化 学化 工 学院 生物 材料 和 药物释 放 实验 室 ， 苏 南京 ２ １ ８ ） 江 １ １ ９
将 新鲜 的 水 牛 鼻 粘 膜 接 人 １ 蛋 白 胨 溶 液 中 ，
１ 实 验
１１ 材料 ．
３ ℃ 、 ５ ・ ｉ 下 摇 床 培养 １ 。将培 养 液梯 度 ６ １０ｒ ｒ ｎ ａ ２ｈ
稀 释 至不 同 浓 度 分 别 涂 布 于 血 琼 脂 平 板 上 ， ６ 下 ３℃
（ ） 酵培养 基 ４发
高产 菌株 已成 为发 酵 法生 产 ＨＡ 的研究 热 点＿ 。 ４ ］ 作者从 新 鲜 的水 牛鼻粘 膜 分离筛 选 出 １ ５株菌 株 ，
经生 化反应 鉴定 其 中 ５株 为透 明质 酸 产生 菌 。对 ＨＡ 产量 最高 的菌 株 的发 酵 液 精 提 物进 行 红外 吸收 光 谱 、 核磁 共振 、 紫外 吸 收 光 谱 分 析 ， 对 其 进 行 超声 波 ／ 并 紫 外线 复合诱 变 ， 明质 酸产 量大 幅提 高 。 透
葡 萄糖 １ ． ， 母 膏 ２ ． ，Ｍｇ Ｏ ０ ０ｇ 酵 ００ｇ Ｓ ・７ ＨＯ ２ ０ｇ Ｋ２ Ｏ ２ ０ｇ 加蒸 馏水 至 １ ０ ． ， ＨＰ ４ ． ， ０ ０ｍＬ， ｐ 值 调 Ｈ
至 ７ ０１ １ ． ，２ ℃下 灭 菌 ２ ｎ ０ｍｉ 。 １ ３ 菌 种 的分 离筛 选 ． １ ３ １ 初筛 ． ．
＼
摘 要 ： 新 鲜 水 牛 鼻 粘 膜 分 离 筛选 得 到 １ 菌 株 ， 生 化 反 应 鉴 定 其 中 ５ 为 透 明 质 酸 （ 从 ５株 经 株 ＨＡ） 生 茵 。 对 产 量 最 产 高 的 茵株 Ｂ发 酵 液 精 提 物 进 行 红 外 吸 收 光谱 （Ｒ）核 磁 共 振 （ Ｃ Ｉ 、 ” ＮＭＲ） 紫 外 吸 收 光 谱 （ 、 ＵＶ） 析 ， 明 其 发 酵 液 精 提 物 分 证
确 为 ＨＡ。 菌株 Ｂ 经超 声 波／ 紫外 线 复合 诱 变 处 理后 ， ＨＡ 产 量 由 ｏ ７ ３ｇ・Ｌ １ 高到 １ ４ Ｌ 。 ． ９ 啊提 ． ６ｇ・ ＿ 。 关 键 词 ： 明质 酸 高 产 茵株 ； 透 筛选 ； 定 ； 理诱 变 鉴 物
中 图分 类 号 ： Ｑ ２ ． Ｔ ９１７ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ：６２ ４ ５ ２ １ ） ３ ０ １ ０ １ ７ —５ ２ （ ０ ０ ０ ～０ ５ － ４