小鼠结肠癌肝转移模型的构建

ByDONGCP2015-03-17

C6-/-转基因小鼠肠癌脾肝转protocol

研究目的

以C6-/-转基因小鼠为受试动物，评价补体系统抑制后对鼠CT26.WT肠癌脾肝转移模型的影响。试验动物

C6-/-转基因小鼠。小鼠以C6-/-转基因小鼠与C57BL6Crossbreed十代以上。

实验材料

麻醉剂：水合氯醛（或者戊巴比妥钠替代），生理盐水

注射器：1ml注射器，2-5ml注射器

手术器械：固定班，胶带，止血钳，眼科镊，手术缝合针

术后：青霉素，电热毯（也可以无），纱布

试验方法

1, 小鼠肠癌CT-26细胞悬液的制备。取对数生长期细胞，用0.25% 胰蛋白酶消化收集细胞，PBS或者无血清培养基洗涤重悬制成单细胞悬液。台盼蓝染色测定活细胞率≥95%，细胞浓度为：1X10^7/只。个人感觉是70-80%细胞活力最强。注意将收集好的细胞放置于冰盒内。

2，小鼠麻醉与固定。麻醉剂水合氯醛，一次配制10ml（10ml生理盐水融入0.38g水合氯醛）。注射时候按照0.01ml/g体重注射。麻醉后用胶带固定在手术展板上。20g可以考虑0.25ml腹腔注射。

3，脾脏注射切脾组小鼠左上腹行横切口约6mm，逐层剥离进腹后于腹外侧找到柳叶状脾脏，小心显露脾脏，使脾上托于切口外用1ml注射器5号针头从脾上极进针约3mm，注意进针与脾脏平行，将肿瘤细胞悬液注入至脾被膜下，每只缓慢注入细胞浓度为1X10^7/ml细胞悬液0.2ml,可见注射部位脾被膜发白肿胀，待白色肿胀被膜消退后拔出针头压迫止血2分钟（结扎脾蒂,切除脾脏）查无出血，逐层关腹。黄色字体步骤为切除脾脏方案的操作

3，仔细缝合，两层缝合。缝合后伤口用青霉素涂敷。也可追加青霉素溶液注射，注射单位参考青霉素说明书。

注意：术中保持脾脏表面湿润，用5ml注射器滴加生理盐水。

术后小鼠的保暖工作对生存有一定影响。可以用电热毯辅热。