第二篇第一章第二节液体培养基制备及灭菌
实验一 培养基的制备消毒灭菌
(2) 装放待灭菌物品:将已包扎好的物品放入内桶。盖上锅盖,以两
两对称方式同时旋紧螺栓,勿使漏气。
(3) 加热排气:接通热源,同时打开排气阀,待见有大量水汽排出时,
维持3---5min,锅内空气排尽,关上排气阀。另外一种排气方法:先将排气 阀关闭,待加热升温内压达到5磅时再打开排气阀,等到压力表指针回到零, 关闭排气阀。
培养基的作用:微生物分离、培养、增殖、保藏及鉴定。
培养基配制原则
◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆
选择适宜的营养物质 营养物质浓度及配比合适 控制pH条件 控制氧化还原电位
原料来源的选择
根据培养目的不同调配
灭菌处理
2 消毒和灭菌的原理
★ 消毒与灭菌是确保 微生物纯培养 (由一个菌体
生长繁殖的群体)的最基本的实验技术。
高 压 蒸 汽 灭 菌 锅
a 方法:一般121℃(1kg/cm2或15磅/英寸2) 20-30min。 b 适用:耐高温物品如培养基,无菌水,培养皿。 c 注意事项:灭菌开始排净冷空气;
灭菌终了,自然缓慢降压回零;
灭菌结束,趁热取出物品。
三 实验操作步骤
分组操作:分6组,5人1组。
◆ ◆ ◆
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基(第1~2组做,每组600ml) 马铃薯糖琼脂培养基(第3~4组做,400ml) 高氏1号培养基(第5~6组做,200ml)
每组需要做的其它工作
(1)每组包1ml吸管5支(塞棉花)(示范) 。 (2)每组包培养皿2包(每包6个) (示范)。 (3)每组装9ml无菌水5管。 (4)每组装20ml无菌水2瓶(50ml三角瓶,内有玻璃珠)。
(5)装锅灭菌。
高压蒸汽灭菌
(1) 灭菌前的准备:将高压蒸汽灭菌锅的内桶取出,向外锅内加入适
培养基和灭菌
1、无机氮源(快速利用N源):铵盐(如氯化铵、
硫酸铵、硝酸铵、磷酸铵),硝酸盐(如硝酸钠、硝 酸钾)和氨水等。
特点:(1)分解快,能被微生物迅速利用;
(2)引起pH变化。
(NH4)2S04 →2NH3+H2S04
生理酸性物质
NaNO3+4H2→NH3+2H20+NaOH 生理碱性物质
2、有机氮源(慢速利用氮源,多为天然有机 物) :花生饼粉,黄豆饼粉,玉米浆,玉米蛋 白粉,蛋白胨,酵母膏。
2、原理:高温时微生物各种与温度有关的氧化 过程速率增快。
3、特点:时间长、耗热量大,应用不广。一般 用于灭菌后要求保持干燥状态的物料。
(三)湿热灭菌
1、方法: 直接用加压湿蒸汽进行物料或设备容器 的灭菌。用蒸汽将物料升温到115-140℃保持一 定时间,可杀死各种微生物。常用的灭菌条件是 120℃,20-30min。
P、S(可构成细胞物质) Mg、Fe(可作为酶的组成成分或维持酶活性) K、Na(调节细胞渗透压) Cu、Zn、Mn(作为酶的辅基和激活剂)
四、 水:
(1)构成生物体的成分; (2)培养基的组成部分; (3)参与代谢反应; (4)作为代谢反应介质; (5)作为物质传递介质; (6)良好的热导体。
染菌对抗生素生产过程的危害: (1)消耗培养基的营养成分; (2)使培养条件如溶氧、粘度发生变化; (3)有的杂菌会分泌一些对抗生素产生菌有毒或
能使抗生素降解失活的物质,从而造成抗生素产量 大幅度下降; (4)影响后道工序的正常生产、影响产品外观及 内在质量; (5)如果污染了噬菌体,不仅引起产生菌自溶, 而且还会迅速大面积蔓延,严重威胁抗生素的生产。
液体培养基的制备及杀菌
二、淀粉质原料的蒸煮糖化设备
1-圆桶体 2-锥形底 3-顶盖 4-料液进管 5-二次蒸汽出口管 6-料液出管 7-液封阀 8-溢流管
二、淀粉质原料的蒸煮糖化设备
管式连续蒸煮流程
1-输送机 2-斗式提升机 3-贮料斗 4-锤式粉碎机 5-螺旋输送机 6-粉浆罐 7-泵 8-预热锅 9-进料控制阀 10-过滤器 11-泥浆泵 12-单向阀 13-三套管式加热器 14保温管道 15-压力控制阀 16-后熟器 17-蒸汽分离器 18-真空冷凝器 19-蒸汽冷凝器 20-糖化锅
一、糖蜜原料的稀释与澄清
(4)胀缩式糖蜜连续稀释器 ➢主体:立式变径圆筒
➢特点: 中间几次突然收缩直径,糖
液在器内因器径的改变使流速随 之发生改变,促进了糖液的均匀 混合。
一、糖蜜原料的稀释与澄清
(5)变管径式糖蜜连续稀释器
➢ 主体:立式变径圆筒 ➢ 特点:
由几种不同管径的直管段连接而成, 作用原理与胀缩式稀释器相同。
符合糖化的最小容积应使糖化醪在真空糖化罐内平均停留时间 为20min(连续糖化采用40-45min或更长的时间),然后进入 三级真空冷却的第一室。
优点:既是蒸发冷却器,又是糖化器,简化了设备。
二、淀粉质原料的蒸煮糖化设备
糖化曲计量罐
冷
气 液
凝 器
分
离 器
真空糖化罐
真 空 冷 却
1、罐式连续蒸煮流程
二、淀粉质原料的蒸煮糖化设备
粉
浆
蒸
后
煮
熟
罐
器
粉浆泵
蒸
汽
喷
真空冷却器
射
器
液 体 曲水
最
原料混合用水
后
一 个
培养基的配制及灭菌实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基的配制及灭菌实验报告篇一:培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目:培养基的制备与灭菌二、实验目的:1、明确培养基的配置原则,掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理,学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材:1、药品:牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器:三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理:1、培养基的制备包括一下几种成分:(1)水分:主要成分。
(2)n源:包括无机氮和有机氮。
(3)c源:主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
(4)无机盐:如nacl、Kh2po4等。
微量元素:cu、K、mg、s、p、Zn。
有些还需要添加“生长因子”,通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的,选用不同的培养基,但有机物总量不得超过15%,盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类:按成分:天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态:固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途:基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌,防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌:用理化手段杀灭一切微生物的营养体,包括芽孢和孢子,在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
(1)高压蒸汽灭菌:将物品放入封闭的加压灭菌器,加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽,将冷空气排尽,压力上升,使水沸点变高,导致菌体蛋白质变性,一般0.1mpa、121℃、15~30min可以彻底灭菌,本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基,110℃、30min。
(2)干热灭菌:微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温,所以含水量小,不利于蛋白质受热变性,所以温度高,时间长。
(3)紫外灭菌:诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DnA复制。
(4)过滤除菌:实验室中用微孔滤膜(孔径一般为0.22μm)。
除病菌需更小。
五、实验步骤:1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gnacl放入烧杯,加入100mL水,用玻璃棒搅匀溶解,移入三角瓶,并加入1.5g琼脂。
发酵工程第章-培养基的制备与灭菌
A、凝固培养基 :即遇热可融化,冷却后则凝固的固 体培养基
B、非可逆性凝固培养基:指有血清凝固成的固体培 养基或由无机硅胶配成的凝固后即不能再融化的固体 培养基
C、天然固体培养基:由天然固体状基质直接制成的 培养基,如麸皮,米糠,木屑等
D、滤膜:是一种坚韧且带有无数微孔的醋酸纤维薄 膜,把它制成圆片状覆盖在营养琼脂或浸有培养液的 纤维衬垫上,形成了具有固体培养基性质的培养条件。
第二节 淀粉水解糖的制备
一、淀粉水解糖的制备方法 1、酸解法: 定义:以酸(无机酸或有机酸)为催化剂,在高温高
压下将淀粉水解为葡萄糖的方法. 优点:设备要求简单,水解时间短(20min),设备
生产能力大 缺点:高温高压下进行,设备要求耐腐蚀、耐高温、
耐高压,副反应多,对原料要求严格,淀粉颗粒不宜 过大,淀粉乳浓度不能过高。
第五节 培养基灭菌
一、消毒与灭菌在发酵工业中的应用 消毒:指用物理和化学方法杀死物料、容器、器具内
外的病源微生物。一般只能杀死营养细胞而不能杀死 细菌芽孢。 灭菌:用物理或化学方法杀死或除去环境中所有微生 物,包括营养细胞、细菌芽孢和孢子。 消灭杂菌和防止杂菌污染
二、灭菌方法:干热灭菌、湿热灭菌、物理灭 菌(射线、微波等)、化学灭菌(各种化学药 品);
功能:构成菌体、含氮代谢物;
3.无机盐
磷酸盐、钾盐、钙盐等矿物盐 铁、锰、钴等微量元素
功能:构成菌体,参与酶的组成,维持酶活性, 调节渗透压,调节pH值,维持氧化还原电位;
4.特殊生长因子:硫胺素、生物素、对氨基苯甲 酸、肌酸等
功能:酶的辅助部分,维持生命活动;
5.发酵的促进剂与抑制剂
发酵培养基中某些成分的加入有利于调节产物 的形成,而并不促进微生物的生长,这些物质 包括前体、促进剂和抑制剂
培养基的配制及灭菌实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基的配制及灭菌实验报告篇一:培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目:培养基的制备与灭菌二、实验目的:1、明确培养基的配置原则,掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理,学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材:1、药品:牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器:三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理:1、培养基的制备包括一下几种成分:(1)水分:主要成分。
(2)n源:包括无机氮和有机氮。
(3)c源:主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
(4)无机盐:如nacl、Kh2po4等。
微量元素:cu、K、mg、s、p、Zn。
有些还需要添加“生长因子”,通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的,选用不同的培养基,但有机物总量不得超过15%,盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类:按成分:天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态:固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途:基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌,防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌:用理化手段杀灭一切微生物的营养体,包括芽孢和孢子,在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
(1)高压蒸汽灭菌:将物品放入封闭的加压灭菌器,加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽,将冷空气排尽,压力上升,使水沸点变高,导致菌体蛋白质变性,一般0.1mpa、121℃、15~30min可以彻底灭菌,本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基,110℃、30min。
(2)干热灭菌:微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温,所以含水量小,不利于蛋白质受热变性,所以温度高,时间长。
(3)紫外灭菌:诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DnA复制。
(4)过滤除菌:实验室中用微孔滤膜(孔径一般为0.22μm)。
除病菌需更小。
五、实验步骤:1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gnacl放入烧杯,加入100mL水,用玻璃棒搅匀溶解,移入三角瓶,并加入1.5g琼脂。
实验二培养基的制备消毒与灭菌
编辑课件
培养基配制实验原理
❖培养基是人工配制的适合微生物生长繁 殖或积累代谢产物的营养基质。
❖人工制备培养基的目的,在于给微生物 创造一个良好的营养条件。
编辑课件
培养基配制要素
❖营养:碳源、氮源、能源、生长因子、 水分和无机盐;
❖适宜的酸碱度(pH值)和一定缓冲能力; ❖一定的氧化还原电位;
• 当含盐类的液体和含盐的琼脂中大量的盐类泼 洒在工作腔体,要立即换水,冲洗腔体,仔细 擦干锅盖垫圈上的水滴。否则它们会带来腐蚀 和变质。
• 要检查压力表上的指数为“0 Mpa”后才能打 开锅盖。
• 外来物质(金属、液体)不能堵塞通风孔,否 则会引起装置故障、起火、短路。 编辑课件
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过滤除菌
❖ 因此,与湿热灭菌相比,干热灭菌所需温度要 高(160~170℃),时间要长(1~2h), 但干热灭菌温度不能超过180℃,否则,包器 皿的纸或棉塞就会烧焦,甚至引起燃烧。
编辑课件
高压蒸气灭菌
❖ 高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的灭菌锅 内,通过加热,使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。 待水蒸气急剧将锅内冷空气从排气阀中趋尽,关闭排气 阀,继续加热。由于水蒸气无法排出,增加了灭菌锅内 的压力,从而使沸点增高,得到高于100℃的温度。导 致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌目的。
• 过滤除菌是通过机械作用滤去液体或气体
中细菌的方法。根据不同的需要选用不同 的滤器和滤板材料。
• 此法除菌的最大优点是可以不破坏溶液中
各种物质的化学成分,但由于滤量有限, 所以一般只适用于实验室中小量溶液的过 滤除菌。
编辑课件
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紫外线灭菌
紫外线灭菌是用紫外线灯进行的。波长为200~300 nm的紫外线都有杀菌能力,其中以260nm的杀菌力 最强。
培养基的制备实验报告_2
培养基的制备实验报告(文章一):培养基的制备与灭菌实验报告xx师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目培养基的制备与灭菌姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心培养基的制备与灭菌(一)、目的要求1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2. 掌握培养基的配置原则和方法。
3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。
(二)、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基:是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌:主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内,通过加热,使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。
待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽,关闭排气阀继续加热。
此时蒸汽不溢出,压力增大,沸点升高,获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性,而达到灭菌的目的。
(三)、实验材料1. 药品:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。
2. 仪器及玻璃器皿:天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
3. 其他物品:药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。
(四)、操作步骤(一)玻璃器皿的洗涤和包装1.玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。
将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中.用毛刷刷洗,然后用自来水及蒸馏水冲净。
移液管先用含有洗涤剂的水浸泡,再用自来水及蒸馏水冲洗。
洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。
2.灭菌前玻璃器皿的包装(1)培养皿的包扎:培养皿由一盖一底组成一套,可用报纸将几套培养皿包成一包,或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内,加盖灭菌。
包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。
(2)移液管的包扎:在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉),它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内,并防止菌液等吸入口中。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告篇一:培养基的制备与灭菌实验报告陕西师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目培养基的制备与灭菌姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心培养基的制备与灭菌一、目的要求1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2. 掌握培养基的配置原则和方法。
3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。
二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基:是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌:主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内,通过加热,使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。
待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽,关闭排气阀继续加热。
此时蒸汽不溢出,压力增大,沸点升高,获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性,而达到灭菌的目的。
三、实验材料1. 药品:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。
2. 仪器及玻璃器皿:天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
3. 其他物品:药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。
四、操作步骤(一)玻璃器皿的洗涤和包装1.玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。
将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中.用毛刷刷洗,然后用自来水及蒸馏水冲净。
移液管先用含有洗涤剂的水浸泡,再用自来水及蒸馏水冲洗。
洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。
2.灭菌前玻璃器皿的包装(1)培养皿的包扎:培养皿由一盖一底组成一套,可用报纸将几套培养皿包成一包,或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内,加盖灭菌。
包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。
(2)移液管的包扎:在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉),它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内,并防止菌液等吸入口中。
实验五 培养基的制作以及灭菌
实验五培养基的制作以及灭菌生物科学贺冰冰 040012010025 周二 9、0 节一、实验目的:1 学习培养基的配制原理和一般方法步骤2 掌握高压蒸汽灭菌的原理方法3 了解干热灭菌的原理方法二、实验原理:1 培养基的原理培养基(medium)是用人工的办法将多种营养物质按微生物生长代谢的需要配制成的一种营养基质。
由于微生物种类繁多,对营养物质的要求各异,加之实验和研究的目的不同,所以培养基在组成成分上也各有差异。
但是,不同种类或不同组成的培养基中,均应含有满足微生物生长发育且比例合适的水分、碳源、氮源、无机盐、生长因素以及某些特需的微量元素等。
配制培养基时不仅需要考虑满足这些营养成分的需求,而且应该注意各营养成分之问的协调。
按照配制培养基的营养物质来源,可将培养基分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基三类.按培养基外观的物理状态可将培养基分成三类,即液体培养基、固体培养基和半固体培养基.按照培养基的功能和用途,可将其分为基础培养基、加富培养基、选择培养基、鉴别培养基等.牛肉膏蛋白胨培养基是细菌学研究最常用的天然培养基。
在配方中不加琼脂时称之为肉汤培养基。
加入琼脂配制的固体培养基一般用于细菌的分离、培养和计数等.2 灭菌的原理(1) 干热灭菌用干燥热空气杀死微生物的方法称为干热灭菌。
通常将灭菌物品置于鼓风干燥箱内,在160℃~170℃加热1~2h。
灭菌时间可根据灭菌物品性质与体积作适当调整,以达到灭菌日的。
玻璃器皿(如吸管、培养皿等)、金属用具等凡不适于用其他方法灭菌而又能耐高温的物品都可用此法灭菌;但是,培养基、橡胶制品、塑料制品等不能使用干热灭菌。
注意事项:(1)灭菌的玻璃器皿切不可有水。
有水的玻璃器皿在干热灭菌中容易炸裂。
(2)灭菌物品不能堆得太满、太紧,以免影响温度均匀上升。
(3)灭菌物品不能直接放在电烘箱底板上。
以防止包装纸或棉花被烤焦。
(4)灭菌温度恒定在160~170℃为宜。
温度超过180℃棉花、报纸会烧焦甚至燃烧。
培养基的配制及灭菌
培养基的配制及灭菌一.实验目的1.三角瓶,培养皿,试剂瓶,试管,枪尖盒等仪器的清洗。
2.三角瓶棉塞的制作,三角瓶,吸管,培养皿,试剂瓶,试管,枪尖盒的包装与灭菌。
3.高温蒸汽灭菌原理的学习。
4.LB和MacConkey培养基的制作与灭菌。
二.实验原理1.高温灭菌的原理:由于培养基配置过程中并非是无菌操作,所以要通过立即灭菌来防止配制过程中混入的杂菌利用培养基中的营养物质进行繁殖从而破坏培养基的性能。
高压蒸汽灭菌是生物试验应用最广,效果最好的一种湿热灭菌法。
在密闭的蒸锅内,其中的蒸汽不能外溢,压力不断上升,使水的沸点不断提高,从而锅内温度也随之增加。
在0.1MPa的压力下,锅内温度达121℃。
在此蒸汽温度下,可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。
注意:①使用高压蒸汽灭菌前一定要完全排除锅内空气,使锅内全部是水蒸气,灭菌才能彻底。
否则在同一压力下,锅内实际温度和理想温度就会有差距,不能达到最好灭菌效果。
②在使用灭菌锅前切勿忘记加水,水加至与三角搁架相平,以防灭菌锅烧干而引起炸裂事故。
③使用完后要等到压力降为零再打开锅盖,否则会因为锅内外压力不平衡而导致棉塞蹦出造成污染,也容易伤害到操作者。
2.培养基的配置原理:微生物的生长依赖于可利用的营养物质和适宜的生长环境。
培养基是用于培养,转移,贮存微生物的固体,半固体或液体的营养物质。
培养基中含有微生物所需的全部营养物质,包括碳源、氮源、能源、无机盐、水分和生长因子。
适宜的pH对微生物的生长是必不可少的。
培养基的物理状态有三种:液体、半固体和固体。
这些培养基的主要区别是在固体和半固体培养基里面加了固化剂------琼脂。
当将琼脂加入溶液中时,在98℃能融化成有一定粘性的液体。
并在42℃凝固。
琼脂具有的特性有:不易被微生物降解;接近无色等。
对于固体培养基需要加入琼脂量约为 1.4%~1.6%,半固体培养基加入约0.6%~0.8%。
培养基在配制过程中容易受到污染,因此必须进行灭菌,同时不能将培养基中的营养物质破坏。
大学实验报告,细菌的培养
大学实验报告,细菌的培养(文章一):培养基的制备与灭菌实验报告xx师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目培养基的制备与灭菌姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心培养基的制备与灭菌(一)、目的要求1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2. 掌握培养基的配置原则和方法。
3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。
(二)、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基:是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌:主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内,通过加热,使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。
待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽,关闭排气阀继续加热。
此时蒸汽不溢出,压力增大,沸点升高,获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性,而达到灭菌的目的。
(三)、实验材料1. 药品:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。
2. 仪器及玻璃器皿:天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
3. 其他物品:药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。
(四)、操作步骤(一)玻璃器皿的洗涤和包装1.玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。
将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中.用毛刷刷洗,然后用自来水及蒸馏水冲净。
移液管先用含有洗涤剂的水浸泡,再用自来水及蒸馏水冲洗。
洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。
2.灭菌前玻璃器皿的包装(1)培养皿的包扎:培养皿由一盖一底组成一套,可用报纸将几套培养皿包成一包,或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内,加盖灭菌。
包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。
(2)移液管的包扎:在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉),它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内,并防止菌液等吸入口中。
培养基制备实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基制备实验报告篇一:培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目:培养基的制备与灭菌二、实验目的:1、明确培养基的配置原则,掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理,学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材:1、药品:牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器:三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理:1、培养基的制备包括一下几种成分:(1)水分:主要成分。
(2)n源:包括无机氮和有机氮。
(3)c源:主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
(4)无机盐:如nacl、Kh2po4等。
微量元素:cu、K、mg、s、p、Zn。
有些还需要添加“生长因子”,通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的,选用不同的培养基,但有机物总量不得超过15%,盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类:按成分:天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态:固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途:基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌,防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌:用理化手段杀灭一切微生物的营养体,包括芽孢和孢子,在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
(1)高压蒸汽灭菌:将物品放入封闭的加压灭菌器,加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽,将冷空气排尽,压力上升,使水沸点变高,导致菌体蛋白质变性,一般0.1mpa、121℃、15~30min可以彻底灭菌,本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基,110℃、30min。
(2)干热灭菌:微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温,所以含水量小,不利于蛋白质受热变性,所以温度高,时间长。
(3)紫外灭菌:诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DnA复制。
(4)过滤除菌:实验室中用微孔滤膜(孔径一般为0.22μm)。
除病菌需更小。
五、实验步骤:1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gnacl放入烧杯,加入100mL水,用玻璃棒搅匀溶解,移入三角瓶,并加入1.5g琼脂。
培养基灭菌PPT演示课件
2.电磁波、射线灭菌
利用高能电磁波、紫外线或放射性物质产生的高能 粒子射线穿透微生物细胞进行灭菌。
紫外线、阴极射线、X射线、γ射线
16
3.加热灭菌
高温致死原理:由于它使微生物的蛋白质和核酸等重要 生物高分子发生变性、破坏,例如它可使核酸发生脱氨、 脱嘌呤或降解,以及破坏细胞膜上的类脂质成分等。 每一种微生物都有一定的最适生长温度范围。当微生物 处于最低温度以下时,代谢作用几乎停止而处于休眠状 态。当温度超过最高限度时,微生物细胞中的原生质胶 体和酶起了不可逆的凝固变性,使微生物在很短时间内 死亡,加热灭菌即是根据微生物这一特性而进行的。
1. 灭菌的定义
用物理或化学因素除去物品上所有生活微生物的方法。 工程上的灭菌是指用物理或化学因子杀灭有生活能力的细菌
营养体和芽孢或孢子的方法。 消毒是消除病原微生物的措施。 在工业中一般都笼统地称为杀菌或灭菌。工业规模的液体培
养基灭菌,杀灭杂菌比除去杂菌更为常用。 灭菌的目的:纯种发酵。
7
消毒(disinfection)
第二章 培养基灭菌
1
第二章 培养基灭菌
第一节 概述 第二节 加热灭菌的基本原理 第三节 分批灭菌的设计计算 第四节 连续灭菌的设计计算
2
本章学习要点
1、熟练掌握培养基灭菌的意义和原理、常用的灭菌方法 和相关计算设计。分批灭菌和连续灭菌的概念。理解培养 基灭菌的残留定律。 2、了解培养基灭菌在发酵工业中的选用及设备流程。培 养基灭菌的工程设计、培养基与设备、管道灭菌条件。理 解培养基连续灭菌和分批灭菌的特点及高温短时灭菌技术 原理;培养基连续灭菌和分批灭菌技术的优缺点比较及其 应用。 3、了解影响培养基灭菌的因素。
17
连
实验-培养基的制备和灭菌
原料称量 溶解 定容 调节pH (加琼脂熔化) (过滤澄清)
分装 塞棉塞、包装 灭菌
培养基的制备和灭菌
注意事项
1. 配制培养基前先算好需要量,杜绝浪费; 2. 原料称量中,快接近终点时,用左手轻轻拍打右手手
腕,将少量药品振落,以免过量; 3. 牛肉膏用玻璃棒称取; 4. 成分中如含有磷酸盐和钙盐应分开溶解,否则会产生
生胨培养基:(%)
➢ 牛肉膏 0.5
➢ 蛋白胨 1.0
➢ NaCl
0.5
➢ pH 7.2-7.4
每组:
肉汤蛋白胨培养基:100mL
肉汤固体斜面(琼脂 1.3%)—— 3支 1-4号
肉汤固体三角瓶(琼脂1.0%)——1瓶 80mL/250ml瓶
沙保固体三角瓶(琼脂1.8%)——1瓶
在同样的条件下,为什么湿热灭菌的效果 好于干热灭菌?
高压蒸汽灭菌后,为什么排气不能过猛? 为什么须待降到零磅才能打开锅盖取出物 件?
为什么配制好的培养基须立即灭菌?
培养基的制备和灭菌
培养基配方与实验安排
沙保培养基:(%) ➢ 葡萄糖 4.0 ➢ 蛋白胨 1.0 ➢ pH 5.4-5.8(自然)
干热灭菌 火焰灼烧:适用于接种环等金属用具 热空气灭菌 :160℃~170℃灭菌2h 射线灭菌:一般用于无菌室灭菌 湿热灭菌:高压蒸汽灭菌
培养基的制备和灭菌
实验步骤之灭菌
高压蒸汽灭菌 灭菌条件:一般温度为121℃(压力1kg/cm2 )
下,维持15~30 min。 高压蒸汽灭菌原理是水的沸点随着压力的增加
培养基的制备和灭菌
高压蒸汽灭菌注意事项
1. 灭菌完毕后,用排气阀排气不能太猛, 否则,压力骤降,导致锅内液体剧烈沸 腾,打湿棉塞,容易造成染菌;
培养基的配制和灭菌实验报告(共8篇)
培养基的配制和灭菌实验报告(共8篇) 培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目:培养基的制备与灭菌二、实验目的:1、明确培养基的配置原则,掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理,学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材:1、药品:牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器:三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理:1、培养基的制备包括一下几种成分:(1)水分:主要成分。
(2)N源:包括无机氮和有机氮。
(3)C源:主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
(4)无机盐:如NaCl、KH2PO4等。
微量元素:Cu、K、Mg、S、P、Zn。
有些还需要添加“生长因子”,通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的,选用不同的培养基,但有机物总量不得超过15%,盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类:按成分:天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态:固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途:基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌,防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌:用理化手段杀灭一切微生物的营养体,包括芽孢和孢子,在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
(1)高压蒸汽灭菌:将物品放入封闭的加压灭菌器,加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽,将冷空气排尽,压力上升,使水沸点变高,导致菌体蛋白质变性,一般0.1MPa、121℃、15~30min 可以彻底灭菌,本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基,110℃、30min。
(2)干热灭菌:微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温,所以含水量小,不利于蛋白质受热变性,所以温度高,时间长。
(3)紫外灭菌:诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DNA复制。
(4)过滤除菌:实验室中用微孔滤膜(孔径一般为0.22μm)。
除病菌需更小。
五、实验步骤:1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gNaCl放入烧杯,加入100mL水,用玻璃棒搅匀溶解,移入三角瓶,并加入1.5g琼脂。
液体培养基的制备及杀菌设备PPT课件
粉 浆
3 5 5 5 5 56 6
蒸汽
蒸汽
4
1 2
图2-15 柱式连续蒸煮流程图 1-粉浆罐 2-泵 3-加热器 4-缓冲器 5-柱子 6-后熟器
粉 浆
图2-16 加热器
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液体培养基的制备及杀菌设备
➢ 真空冷却器
真空冷却:物料在一定真空度下蒸发部分水,
需要汽化潜热,取自料液本身,因而料液很快被 冷却到真空相应的温度。
真空冷却器中真空度产生:一般要借助于水力 喷射泵或蒸汽喷射泵,连续地抽去真空冷却器中 的二次蒸汽。
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液体培养基的制备及杀菌设备
➢ 真空冷却器
冷水
3
真空泵
4
2 冷凝器
醪液
5
1 真空冷却器
真空冷却装置图
为了更完全地从料液中分离蒸汽,真空冷却器中蒸 汽 上 升 速 度 不 应 超 过 1m / s , 在 下 降 管 中 流 速 为 0.8~0.5m/s。
V ——二次蒸汽上升的速度,m/s,一般取0.8~1.0m/s 的范围。一般真空冷却器的直径与高之比为1:1.5~2.0
H (1.5 2.0)D ,m
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液体培养基的制备及杀菌设备
➢ 糖化设备
• 连续糖化罐
把已将温至60~62℃的糊化醪,与糖化醪液或曲乳液混合,将60℃下 维持30~45min,保持流动状态,使淀粉在酶的作用下变成可发酵性糖。
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液体培养基的制备及杀菌设备
(2)几何尺寸的计算: 真空冷却器的几何尺寸,是根据上升的二次蒸汽以小于1.0m/s的速度来确定 的。
D
Wv
3600 V
,m
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作用:连续地把糊化醪与水稀释,并与 液体曲、麸曲、曲乳及糖化酶混合, 在一定温度下维持一定时间,保持流 动状态,以利于酶的作用。
构造:圆筒形、底部球形或罐形,常压操
作,密闭,内设蛇形冷凝管(当降温 不够时用)
液面控制装置、
灭菌蒸汽进口、 连续出料口、
搅拌器1~2组。
糖化罐的体积取决于醪液流量和在罐中的停留时间以及
常用糊化锅、糖化锅、煮沸锅技术参数
四、谷氨酸生产中淀粉的水解
1.蒸汽喷射液化工艺
调浆(配料) 泵 喷射泵 一次喷射液化 液化保温 二次喷射液化 高温维持 灭酶 闪蒸器冷却 二次液化罐 薄板换热器 糖化罐 板框过滤 贮糖计量 发酵 工艺控制要点:
淀粉乳浓度30%左右 pH6.0~6.5 一次喷射温度95~97˚C, 层流罐保温30min, 二次喷射温度145˚C以上, 真空闪急冷却95~97˚C, 维持罐3-5min, 二次液化罐加淀粉酶30min, 薄板换热器60 ˚C,
②真空冷却器的直径和高度:取器内二次蒸汽的上升速 度不超过1m/s,则真空冷却器的直径D:
D 4 4005 1.2(m) 3600 1
一般真空冷取器的径高比为1︰1.5~2,现取D︰H=1︰1.5, 则真空冷却器的圆柱部分高H: H =1.5D=1.5×1.2=1.8(m) ③醪液下降管(排醪管)的直径:设糊化醪液密度 =1090kg/m3,取醪液在排醪管内下降速度为1m/s,则醪液下 降管管径D:
–糖化pH4.2-4.5(硫酸、盐酸) –温度60℃左右 –糖化酶用量150U/g淀粉 –糖化时间32小时,用无水酒精检 验无糊精存在时, 糖化结束,然后将pH调整至4.85.0,维持20分钟灭酶
维 持 罐
2.制糖工序设备
调浆罐 蒸汽喷射器 层流罐 闪蒸器 维持罐 薄板冷却器 糖化罐 板框压滤机
4.加热器(作用同蒸煮罐) 结构:由三层直径不同的套管组成。内层和中层 管壁上都钻有许多小孔,各层套管用法兰连接。 工作原理:粉浆流径中层管,高压加热蒸汽从内 外两层进入,穿过小孔向粉浆液流中 喷射。 特点: 气液接触均匀,加热比较全面。 在很短时间内可使粉浆达到规定的蒸煮温度。
粉浆在“有效加热段”停留时间15~25s。
4 11354.8 0.0607(m) 3600 1090 1 可选用φ68mm×4mm的无缝钢管。 D
④醪液下降管的长度:一般选10m. 设醪液下降管的长度为L,则:
10.33 572 L 7.77(m) 760
选用L=8m.(生产实际中一般选L=10m)
(四)糖化设备 1. 连续糖化罐
匀分布。
静置10~30 min,使沉降形成滤层。 浑浊麦汁回至槽内,直至澄清(10~15 min) 正常过滤(45~90 min) 待麦糟露出,开动耕糟机,疏松麦糟层。 喷水洗糟。 打开麦糟排出阀,排空糟。
4.煮沸锅 蒸发多余水分
作用: 煮啤酒花
凝固蛋白质 灭菌
结构:与糊化锅相同,但需容
纳包括滤清汁在内的全部麦汁,体 积较大。
(一)淀粉质原料蒸煮糖化目的
1、糊化:由于淀粉质原料中含有的淀粉是存在于原料的细胞之
中,受到细胞壁的保护,难以溶解。蒸煮的目的是使植物组织 细胞膜破裂,淀粉受热、吸水膨胀,破坏晶状结构(未糊化前 对酶作用的抵抗力较强难以糖化),成为凝胶状态,此过程称 为糊化。 2、液化:通过添加液化酶,使长链淀粉转化为糊精、低聚糖。 糊化和液化常同时进行 3、糖化:通过添加糖化酶再将糊精、低聚糖转化为可发酵性糖。
第二章
液体培养基制备及灭菌
第一节 培养基制备(p178) 第二节 液体培养基灭菌
第一节
培养基制备P178
液体深层发酵培养基中,碳源的提供常用淀粉质原料:谷 类、薯类、淀粉等,另外还有糖蜜及各种农产品残余物如: 玉米秸、麦秸、稻草等。 通过蒸煮糖化将淀粉制原料转化为可发酵性糖是培养基 制备中的重要过程。
糖蜜稀释
培养基制备设备
淀粉制原料水解
连续糖化 :酒精 柠檬酸等 谷氨酸 间歇糖化: 啤酒
纤维素半纤维素水解
一、糖蜜原料的稀释与澄清
糖蜜是制糖厂的一种副产品,里面含有大量 的可发酵性糖,这些糖分在目前制糖工业技 术或经济核算上已不宜用结晶方法加以回收。
糖蜜浓度一般在80° Bx ,酵母不能直接利用, 需进行稀释、酸化、灭菌和增加营养盐等处 理过程。 35 Bx——1151(kg/m3) 80Bx——1412 (kg/m3)
耕糟机:由双速电机、减速器、油压升降轴、耕糟臂、耕糟刀等组成。 耕糟转速0.4~0.5 ,排糟转速3~4 r/min。
耕糟臂有2、3、4臂(根据投料量),耕糟臂上每隔20~30cm装有垂直于 筛板的耕糟刀或波形切割刀。大型槽还有排糟臂,装挂可旋转角度的出 糟刀。
操作:泵送糖化醪后,开动耕糟机转3~5r,使糖化醪在槽内均
真空冷却器的计算 例:已知从汽液分离器排出的糊化醪量为12000kg/h ,其比热容为 3.6kJ/(Kg· K),温度为100℃,要求冷却至65 ℃,计算冷却器的基 本尺寸。 解:①真空冷却器内产生的二次蒸汽量: 糊化醪12000kg/h 从100 ℃冷却至65 ℃ 时放出的热量为: Q=12000×3.6(100-65)=1512000( kJ/h ) 查水蒸气表知二次蒸汽在 65 ℃ 时的汽化潜热r=2343.4kJ/Kg 真空冷却器内产生的二次蒸汽量为:
2.冷凝器 冷水由上侧进入,从真空冷却 器吸进来的二次蒸汽与水接触而被 冷凝,从冷凝器下部作为原料混合 用水被排出。 不冷凝性气体(氮气等)被喷 射器抽走。 真空度保持在70~80KPa (530~600 mmHg)
二次蒸汽 不凝气
3.喷射器 (形成真空) (1)喷射器
构造:
工作原理:利用有压介质通过喷嘴以高 速射出,在喷嘴出口(混合室)造成射流 对另一介质有抽吸作用,将不凝气吸入。 在混合室中的介质与高速流动的工作介质 发生能量交换,通过混合段到达收缩段时 流速增加,造成真空。 当真空系统采用水力喷射泵时,可省去冷 凝器,将真空冷凝器与水力泵直接连接。
m
1512000 645.2(kg / h) 2343.4
与65 ℃ 相对应的真空度为76.3kPa(572mmHg),在此温度下蒸汽的密 度为0.1611kg/m3,则二次蒸汽的体积流量为:
645.2 qv 4005(m3 / h) 0.1611
经真空冷却后,从冷却器排出醪液量为12000-645.2=11354.8( kg/h)
在此区域内的流速以不超过0.1m/s为宜。
(三)真空冷却装置 蒸煮过的高温糊化醪,100 ℃ 左右 将要进行糖化的温度60 ℃左右 需快速降温 1.真空冷却器:冷却物料(糊化醪) 2.冷 凝 器: 将二次蒸汽冷凝 3.蒸气喷射器(或真空泵): 产生真空, 将不凝气抽出。
Байду номын сангаас真空冷却装置
1.真空冷却器 圆筒锥底,料液以切线进入,由 于器内为真空(喷射器产生的) 醪液产生自蒸发,产生大量的二次蒸 汽,醪液在器内被离心力甩向周边沿 壁往下流,以锥底排醪液口排出。温 度降至60~65℃,至糖化锅。 二次蒸汽从器顶进入冷凝器(真 空吸过去)。 安装高于糖化锅10 M。
2.真空糖化装置
不凝气
优点:即是蒸发冷却器,又是糖化器, 简化了设备
三、啤酒生产中麦芽汁的制备(间歇) (一)麦汁制备过程 : 糊 化设备
糖化 设备
过滤设备 煮沸设备 换热设备 啤酒厂糖化设备的组合方式: 糊化锅 糖化锅 四器组合:每一锅完成一项任务,四器为 过滤槽 (或压滤机) 麦汁煮沸锅 六器组合:过滤槽、煮沸锅各2只。(另加麦汁暂存槽1只)
装液量
V ' V (m3 ) 60
V′—糖化醪流量(包括曲量)m3/h τ-醪液停留时间,min η-装填系数,取0.75~0.85 连续糖化罐的尺寸与直径D有如下比例关系: 圆柱部分高H 球形底(或罐底)高h 球形底曲率半径r H=(0.5~1.0)D h=(0.11~0.25)D
D 2 4h 2 r 8h
糖蜜连续稀释器: 1. 水平式糖蜜稀释器:我国常用(马尔钦柯式连续稀释器) 构造:圆柱型水平管,出口端向下倾斜安装;中部有两根横杆。 若干隔板和筛板,形成若干空段,孔径保证糖液处在湍流; 隔板上的孔上下交错地配置,使交错流动无须搅拌; 若干空段根据工艺需要加入水及其它物质。 (5-20m3)
间歇式 稀释器 连续式
搅拌器
3.糖化醪过滤槽 作用:糖化一结束,需快速将麦汁和麦 糟分离。以获得澄清麦汁。 麦糟:残留皮壳、高分子蛋白质、 纤维素、脂肪等。 构造:常压过滤 ( 另有低真空快速过滤) 上半部与糊化锅等基本相同。D3.4m 水平筛板 下半部分三层 麦汁收集底 保温夹底 洗涤:喷水管(大型)承接杯(小型)
耕糟装置:耕糟臂、耕糟刀;排糟臂
3.后熟器
前三个后熟器都是由下进料由上出料。不 再进蒸汽加热,只是保温, 构造与蒸煮罐相同。由多个组成,为保证 保温时间。 最后一个后熟器由侧上部进料由下出料
最后一个后熟器:又称气液分离器。不加 热 ,目的分离出二次蒸汽降温,从上部出 供粉浆罐预热。
构造如图:二次蒸汽出口上部另一侧。
液位较低,50%左右,便于分离二次蒸 汽。
(二)液化、糖化(蒸煮)设备 1.连续蒸煮糖化流程: (罐式、柱式) 粉浆罐
130℃
二次蒸汽
50~60℃ 后熟器
粉浆泵
蒸煮罐
蒸汽加热
最后一个后熟器(120℃ )
真空冷却器(60℃ )