动物疫病监测诊断基础理论知识与方法原理

形态学检查
电镜和免疫电镜检查 普通光学显微镜检查 有些病毒在宿主细胞内增殖后，在细胞 的一定部位(胞核、胞浆或两者兼有)出 现一个或数个、圆形或椭圆形、嗜酸性 或嗜碱性的结构，即包涵体。包涵体对 病毒感染的诊断有一定价值。
病毒感染的血清学诊断
是用已知病毒抗原来检测病畜血清中 有无相应抗体，故须待病畜感染后体 内产生抗体时才能检出。
论知识和方法原理
细菌感染的诊断
触片染色镜检 病理变化 临床症状
流行病学调查
初步诊断
培养特性 生化特性
确诊
血清学试验 动物回归试验
病毒感染的诊断
标本采集与送检 病毒的分离鉴定 电镜技术 血清学试验 分子生物学技术
病毒的分离
动Biblioteka Baidu接种
是最原始的病毒培养方法，根据病毒 种类不同，选择敏感动物及适宜接种 部位，如嗜 神经性病毒（狂犬病毒） 可接种于小鼠脑内，痘病毒可接种于 家兔角膜或皮内。
胞的特性。 2. 反应原性：能与由其所诱导产生的抗体或致敏
淋巴细胞发生反应的特性。
抗体
? 免疫球蛋白：是指具有抗体活性或化 学结构与抗体相似的球蛋白。
? 抗体：当动物机体受到抗原物质刺激 后，由B 淋巴细胞转化为浆细胞产生 的能与相应抗原发生特异性结合反应 的免疫球蛋白。
IgG
? IgG多为单体，占血清免疫球蛋白总量的 75%～80%
Ag 过剩
比例适当，交联成网络
影响抗原抗体反应的因素
?电解质： 稀释抗原、血清常用生理盐水，但 稀释禽类血清时常用 8～10%高渗盐水。
?酸碱度： 稀释抗原、血清的溶液 pH6.0～8.0 均可以，为了稳定 pH，在抗原抗体反应中最 好用pH7.0～7.2的磷酸缓冲液作抗原抗体稀 释液。
? 温度： 通常为37℃，适当提高反应温度可增 加Ag与Ab分子的碰撞机会，加速反应的出现
在采取临床标本及病人血清应注意病 程，必须采取患畜急性期血清与恢复 期血清 (双份血清) 进行血清学试验。 若第二次血清抗体滴度比第一次高出 4倍以上时，才有诊断意义。
免疫的定义
? 现代免疫的概念：是机体识别“自身”与 “非己”抗原，对“非己”抗原产生排斥 作用，对自身抗原形成天然耐受的一种生 理功能。
病毒的分离
鸡胚培养
鸡胚对多种病毒敏感。一般采用孵 化9-14天的鸡胚，根据病毒种类不同， 将病毒标本接种于鸡胚的不同部位， 最常用的鸡胚接种部位有羊膜腔、 尿囊腔、绒毛尿囊膜和卵黄囊等。
病毒的分离
组织培养法或细胞培养法
是将离体活组织块或分散的组织细胞 加以培养的技术总称，为病毒分离鉴 定中的最常用的基本方法。
? 免疫功能亢进
变态反应
? 免疫功能低下或缺陷
机会感染
2. 自身稳定
? 清除机体产生的大量衰老死亡细胞
? 功能异常
自身免疫病
3. 免疫监视
? 肿瘤细胞的发现和清除
? 功能低下或失调
肿瘤发生
免疫的类型
一、固有免疫： 概念：出生时即有的天然免疫，经遗传获得，非特
异性，也称非特异性 /先天性免疫。 组成：屏障结构、吞噬细胞、某些体液因子。 二、适应性免疫： 概念：出生后接触特定抗原获得的针对该物质
IgM水平可用于传染病的早期诊断。 ? IgM是B细胞抗原受体的主要成分。 ? 也可参与II、III型超敏反应。
IgA
? 分为血清型和分泌型两种，血清型 IgA主要由肠系 膜淋巴组织中的浆细胞产生。而分泌型 IgA(SIgA) 是由呼吸道、消化道、泌尿生殖道等处的固有层 中浆细胞产生。
? 主要存在于初乳、唾液、泪液，以及呼吸道消化 道和泌尿生殖道黏膜表面的分泌液中。
? IgG1、IgG2和IgG3的CH2能通过经典途径激 活补体
? IgG是唯一能通过胎盘的抗体 ? 通过Fc段与吞噬细胞表面FcR结合，发挥调
理作用；与K细胞结合，发挥ADCC作用；与 葡萄球菌A蛋白结合。 ? 具有抗菌、抗毒和抗病毒作用 ? 参与II、III型超敏反应
IgM
? 为五聚体，是分子量最大的Ig。 ? IgM激活补体能力比IgG强。 ? IgM是抗原刺激后出现最早的抗体，故检测
免疫的基本特性
1 识别自身和非自身 这是免疫应答的基础
? 免疫细胞膜表面的抗原受体 + 外来抗原的表位 ? 识别很精细，包括异种之间，同种不同个体之间
2 特异性
? 即免疫具有很强的针对性
3 免疫记忆
? 对相同抗原物质的再次进入具有记忆，会产生更 快、更强的免疫应答。
免疫的基本功能
1. 抵抗感染
? 指动物机体抵御病原微生物感染和侵袭的能力。
表面性与可逆性
? 抗原抗体结合除了空间结构互补外，主 要以氢键、静电引力、范德华力和疏水 键等非共价结合。
Ag+血清(Ab) pH 7.0 T 37℃ Ag-Ab复合物 pH＜3 T＞60℃
适合比例性
?Ag和Ab结合需要适当的比例， Ag或Ab过多过 少，都不能形成大的 Ag-Ab复合物。
网 格 Ab 过剩 学 说
? 分泌型IgA的合成和主要作用部位在黏膜。
IgD
? 血清IgD含量极低。 ? 膜性 IgD存在于成熟B细胞表面，因
此，它是成熟 B细胞的主要标志。它 也是B细胞抗原受体（ BCR）。
IgE
? 血清中含量最低的抗体。 ? 能与肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面的
IgE-Fc 受体结合，介导Ⅰ型超敏反 应。 ? 与抗寄生虫感染有关。
的免疫，也称获得性 /特异性免疫。 包括：体液免疫、细胞免疫。
抗原
? 抗原（Antigen ，Ag ）：是指进入动物机体后， 能刺激机体产生特异性免疫球蛋白或致敏淋巴 细胞，并能与其发生特异性反应的物质，也就 是说具有抗原性的物质称抗原。
抗原性包括两个方面： 1. 免疫原性：能刺激机体产生抗体或致敏淋巴细
人工制备抗体
? 单克隆抗体——由一个B细胞分化增值的 子代细胞（浆细胞）产生的针对单一抗原 决定簇（表位）的抗体。
? 多克隆抗体——采用传统的免疫方法，将 抗原物质经过不同途径注入动物体内，经 数次免疫后采血所获得的抗血清即为多克 隆抗体。
免疫学试验技术
? 血清学试验的类型
血清学反应的特点
1. 特异性与交叉反应性 2. 可逆性：表面的结合，有可逆性 3. 适比性：比例合适，反应才可见 4. 阶段性：不可见 可见反应 5. 条件依赖性：pH ，温度，电解质