胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇

胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇（标准管法）

实验目的：

1.了解自动生化分析仪的工作原理

2.熟悉血清总胆固醇相关生化的检测项目及检测方法

3.掌握血清总胆固醇相关生化检测项目的临床意义。

实验原理：

胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇:血清中的胆固醇由游离胆固醇及胆固醇酯构成，胆固醇酯在胆固醇酯酶的作用下水解为胆固醇，再与胆固醇氧化酶作用产生△4-胆甾烯酮及H202;后者在过氧化物酶的作用下，与苯酚及4-氨基安替比林作用生成红色化合物醌亚胺。测定该红色化合物在500nm波长的吸光度，可以计算出血清总胆固醇含量。

实验操作：

1.将准备好的酶工作液（胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、苯酚、4-氨基安替比林）加

入空白管、浓度标准管、测定管各1.5ml，再向标准管加20μl胆固醇标准液（5.18mmol/L），再向测定管加入20μl血清。

2.将三支试管放入水浴锅中，37℃保温20分钟

3.调节分光光度计波长500nm,透光度T至100%，将空白管试液对光的吸收调节为0，再用空白管

调“零”点测定其他各管的吸光度。

实验结果:

分光光度计测得标准管吸光度和测定管吸光度，根据朗伯-比尔定律,得到血清样品总胆固醇值=（测定管吸光度/标准管吸光度）x5.18

分析讨论：

为什么用酶酚混合液作为空白管溶液？

酶酚混合液作为空白试剂，调节分光光度计透光度T至100%，可将酶酚混合液对光的吸收调节为0，从而消除对葡萄糖反应产物吸光度测定的影响。

思考题：

1.血清甘油三酯升高有和临床意义？血脂代谢紊乱对机体有何危害？

血清甘油三酯升高可能代表着各种疾病的发生：如原发性继发性高脂蛋白血症、动脉粥样硬化、糖尿病、肾病、脂肪肝等。

血脂代谢紊乱对机体的危害：血脂代谢紊乱的影响分两种：

1）高胆固醇血症引起的危害：主要是动脉粥样硬化，包括大动脉、中动脉、小动脉动脉硬化。

动脉斑块形成主要表现在心、脑、肾等位置，如果动脉硬化斑块较重或者不稳定，发生在心脏可出现急性心肌梗死；在脑血管会出现急性脑血栓，即急性脑梗死，以及肾脏出现急性肾梗死；

在外周血管，如腿部可引起坏疽；

2）高甘油三酯血症引起的危害：在暴饮暴食的情况下，高甘油三酯可以诱发急性胰腺炎。严重者可导致急性坏死性胰腺炎。

2.血清胆固醇过高对人体有何危害？

胆固醇过于太高会引起很多的疾病，很可能会出现冠状动脉粥样硬化性心脏病以及血管的粥样硬化，还会出现胆结石对肾脏有损害之类。胆固醇和低密度脂蛋白结合不牢固,穿透力大,侵及动脉内膜,并沉积在动脉壁上,引起动脉粥样硬化。使血管弹性降低,形成管腔狭窄, 造成心血管相关疾病。