胆固醇氧化酶法

胆固醇氧化酶法（Cholesterol oxidase）
血清中测定方法包括化学方法和酶法，化学方法包括抽提法和直接测定法
酶法临床上常用的是胆固醇氧化酶法
LDL是一组不均一的富含胆固醇的脂蛋白颗粒，颗粒大小、电荷或apoB含量等应用超速离心法、色谱法、电泳法、化学或免疫沉淀法将LDL与其他脂蛋白分离开，然后测定LDL 组分中胆固醇含量。

由于化学沉淀法和免疫分离法测定LDL-C均需要进行样本预处理，其最大缺点是不能进行自动化分析，不适应大规模流行病学调查或临床大批量标本诸多项目同时检测。

国外近两年相继研制开发出几种不同类型的均相测定法，标本不需沉淀处理，可用于自动生化分析仪自动测定。

(1)选择性反应法［12～14］：基于用表面活性剂控制酶与相应脂蛋白的反应的新技术研制而成，多为液体双试剂。

目前有两类检测系统：第一类系统的试剂1中的表面活性剂1可使血清样品中的HDL、CM和VLDL颗粒解离，Chol分子被开释出来，与胆固醇酶试剂反应，产生的H2O2在缺乏偶联剂时被消耗而不显色，此时LDL颗粒还是完整的。

加试剂2(含表面活性剂2和偶联剂DSBmT)，它可使LDL颗粒解离开释Chol，参与Trinder反应而显色，因其他脂蛋白的Chol分子已除往，光彩深浅与LDL-C量呈比例［12，13］。

HDL 目前临床常规实验室直接分离测定HDL-C的方法大致可分为3代。

第1代为化学沉淀法,常用的沉淀剂为多阴离子,如磷钨酸(FTA)、DS、肝素(Hep)或非离子多聚体如聚乙二醇（PEG）与某些两价阳离子(如Mg2＋、Ca2＋、Mn2＋)适用。

最早为美国国立卫生研究院(NIH)所采用的肝素-锰沉淀法(HM法),后多采用DS50-Mg2＋矿法,欧洲则多采用磷钨酸镁沉淀法
(PTA-Mg2＋法)和聚乙二醇沉淀法(PEG法)。

1995年中华医学会检验分会曾在国内推荐PTA-Mg2＋法作为HDL-c测定的常规方法。

但此类方法常因含apoB的脂蛋白组份沉淀不完全导致结果假性偏高。

第2代采用简便的磁珠DS-Mg2+分离法(美国Reference Diagnostics 公司试剂),省往了离心步骤,但需特殊装置,该剂不适于推广应用。

第3代为匀相测定法,轩d 本用量少,不需沉淀处理,可用于自动生化分析仪测定,在正确度和精密度方面基本达到NCEP 的分析目标,因此在短短的数年里迅速被临床实验室采用。

PEG修饰酶法(PEG-modified enzvme HDL-C assay,PEGME法)在Mg2+的存在下,α-环糊精硫酸盐与CM、VLDL、LDL形成可溶性复合物。

这些复合物能抵抗变构酶的作用；PEG 6000或葡聚糖右旋糖苷与胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶共价结合,引起酶的变构,变构酶对脂蛋白的大小和/或电荷具有选择性,其顺序依次为LDL。