实验十四血清胆固醇测定(胆固醇氧化酶法)
实验七__胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇
生物化学与分子生物学设计实验（胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇及二乙酰一肟法测定血清尿素）小组成员：班级：麻醉11-2班日期：2012年12月19胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇及二乙酰一肟法测定血清尿素实验目的1、掌握酶法测定总胆固醇的原理和方法。
2、学习用比色法测定血清尿素。
3、巩固有关胆固醇和尿素的知识。
4、进一步熟练UV2100型分光光度计的重点、难点：重点：1、氧化酶法测定总胆固醇的原理2、二乙酰一肟法测定血清尿素的注意事项难点：氧化酶法测定总胆固醇的原理一、实验原理（一）氧化酶法测定血清总胆固醇血清总胆固醇(TC)包括：游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)两部分。
本实验是胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和过氧化物酶相偶联发生的偶联反应。
第一步：血清胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸 (FFA) 。
第二步：胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成△4-胆甾烯酮和H2O2。
第三步：H2O2在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC含量成正比。
（二）二乙酰一肟法测定血清尿素二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的4，5-二甲基-2-氧咪唑化合物，颜色深浅与尿素含量成正比。
因二乙酰不稳定，故由试剂中二乙酰一肟与强酸作用产生二乙酰。
二、操作步骤（一）氧化酶法测定血清总胆固醇终点法检测TC，取试管3支按下表依次加样。
酶法测定TC操作步骤混匀后，37℃保温10 min，每管加3ml水混匀，用分光光度计比色，于500 nm波长处以空白管调零，读出各管吸光度。
（二）二乙酰一肟法测定血清尿素取试管3支，按下表依次加样。
二乙酰一肟法操作步骤混匀，置沸水浴加热12min，取出置冷水中冷却5min，以空白管调零，在540nm处读取各管吸光度。
三、注意事项（一）氧化酶法测定血清总胆固醇1、最后加酶试剂，各管反应时间应一致；2、比色应在30min内完成；3、试管在操作前尽量保持干燥；4、试剂中酶的质量影响测定结果；5、若需检测游离胆固醇浓度，将酶试剂成分中去掉胆固醇酯酶即可。
实验十四 血清胆固醇测定(胆固醇氧化酶法)
实验十四血清胆固醇测定（胆固醇氧化酶法）胆固醇地测定方法很多；通常可分为化学试剂比色法、酶法、气相色谱法、高效液相色谱法、核素稀释质谱法五大类.化学试剂比色法中有直接法和间接法；前者可用血清直接测定，后者是用溶剂或其它方法提取胆固醇后再作定量.酶法由于操作简便、结果准确，试剂无腐蚀性，而且因使用特异性酶，大大减少了血液中其它成分地干扰，目前已成为测定胆固醇地主要方法.【目地】．了解胆固醇氧化酶法测定血清胆固醇地原理，能进行血清胆固醇测定地操作..掌握血清胆固醇测定地临床意义.【原理】血清中总胆固醇（）包括胆固醇酯()和游离型胆固醇(),酯型占，游离型占.胆固醇酯酶（）先将胆固醇酯水解为胆固醇和游离脂肪酸（），胆固醇在胆固醇氧化酶（）地作用下氧化生成Δ胆甾烯酮和过氧化氢.后者经过氧化物酶（）催化氢与氨基安替比林（）和酚反应，生成红色地醌亚胺，其颜色深浅与胆固醇地含量呈正比，在波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血清胆固醇地含量.反应式如下：CEH胆固醇酯胆固醇 ＋ 脂肪酸胆固醇 ＋ O2△4-胆甾烯酮 ＋ HO22POD2H2O2 ＋ 4-氨基安替比林 ＋ 酚红色醌亚胺【器材】试管、吸管、试管架、微量加样器、恒温水浴箱、分光光度计.【试剂】酶法测定胆固醇多采用市售试剂盒.. 酶应用液胆固醇酶试剂地组成为：磷酸盐缓冲液胆固醇酯酶≥胆固醇氧化酶≥过氧化物酶≥氨基安替比林苯酚此外还含有胆酸钠和，胆酸钠是胆固醇酯酶地激活剂，表面活性剂能促进脂蛋白释放胆固醇和胆固醇酯，有利于胆固醇酯地水解.．（）胆固醇标准液精确称取胆固醇溶于无水乙醇，移入容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度(也可用异丙醇等配制).【操作】取试管支，编号，按下操作.表酶法测定血清胆固醇操作步骤加入物（）测定管标准管空白管血清－－胆固醇标准液－－蒸馏水－－酶应用液混匀后，℃水浴保温分钟，在波长处比色，以空白管调零，读取各管吸光度.【计算】血清胆固醇 (mmol/L) ＝ 测定管吸光度标准管吸光度× 5.17【注意事项】. 黄疸血清过高地胆红素可还原—部分反应中地，降低显色反应，使结果偏低.但测定胆固醇，胆红素对酶法地干扰比化学法小.. 用胆固醇标准液引起地误差较大，故目前提倡采用胆固醇定值血清为标准.. 轻度溶血对测定结果无影响，但明显溶血可使结果增高，此时可用一个不加地空白管从结果中减去后纠正.. 其它影响因素，如维生素、谷胱甘肽、氟化物引起负偏差.【正常参考范围】～【临床意义】.血清胆固醇增高常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症、糖尿病、肾病综合征、胆管阻塞、甲状腺功能减退..血清胆固醇降低常见严重贫血、甲状腺功能亢进、长期营养不良等.【结果及分析】【思考题】．胆固醇有哪些重要地生理功能，血清胆固醇升高对机体最严重地危害是什么？．胆固醇在体内可转变为哪些物质，如何排泄？．实验中需要哪几种酶参加，各有什么作用？。
胆固醇测定
（二）实验试剂
1、血清（样本） 2、蒸馏水 3、工作液 4、胆固醇标准液（标本）：5.17 mmol/L
四、实验内容和操作过程
1.取3支干净试管，分别标明测定管（T）、标准管（S） 和空白管（O），然后按下表加入试剂： 加入物 血清（ml） 测定管T 15 标准管S 空白管O
6、生化项目检测 （2）测定
7、样本结果登记
8、样本查询
9、系统注销 10、工作结束 清洗仪器，退出系 统、关闭仪器，关闭计算机，切 断电源，处理试剂。
七、临床意义
血清胆固醇浓度增高见于动脉粥样硬化， 肾病综合症，胆总管阻塞，黏液性水肿和糖尿 病。其他如肥大性骨关节炎、老年性白内障及 牛皮癣等血清胆固醇有增高。 血清胆固醇浓度降低常见于恶性贫血、溶 血性贫血及甲状腺功能亢进时，血清胆固醇降 低，其他如感染和营养不良等情况。
URIT-800半自动生化分析仪使用 介绍
1、开机 打开计算机显示器、主机、 分析仪主机；运行系统管理程序并进 入操作主界面。 2、工作前准备 检查废液瓶；清洗 管路；设置吸收池温度；待机30min； 清洗管路；调整A/D初始值”对仪器 进行自动调整；确认仪器是否需要校 准。
3、登录
4、清洗
10次左右。
5、参数设置
6、生化项目检测 （1）编号
4.生成的醌类化合物颜色的深浅与胆固醇的含量成正 比，用半自动生化分析仪测定胆固醇的含量。
三、实验器材与试剂（一）实验材（1）试管 3支（2）水浴箱
（3）试管架 （4）洗耳球
1台
1个 1个
（5）微量五档可调移液器 2支 （6）刻度吸量管（5ml） 1支 （7）半自动生化分析仪 1台
胆固醇氧化酶法原理
胆固醇氧化酶法原理胆固醇氧化酶法原理《胆固醇氧化酶法原理》一、什么是胆固醇氧化酶法胆固醇氧化酶法是一种用测定血清胆固醇的方法，也被称为“多元素检测法”，这一方法即可测定血清中胆固醇的总量，也可以测定其子物质的部分分离，即高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）。
胆固醇氧化酶法是受到酶反应活化，通过酶转化成有机酸形式而测定血清胆固醇的氧化酶法，是用氨基苯肼抑制非特异性磷酸酶让胆固醇被脂解之后，利用磷酸及3,5-二聚体酶对胆固醇和胆汁酸进行氧化反应，最终形成硝基苯并测定浓度，以计算出总血清胆固醇浓度。
由于本方法的胆固醇检测结果的准确性高，经久耐用，因此，胆固醇氧化酶法成为血清胆固醇测定的标准方法。
二、胆固醇氧化酶法的基本步骤1. 胆固醇氧化酶法的基本步骤首先，将血清样本添加限速剂（具有特定阈值的抑制剂），以抑制非特异性酶，该限速剂最常见的有保护剂、扩散样品，以及羧基化限制剂。
2. 第二步，加入胆固醇特异性酶，在室温下反应，使胆固醇被氧化酶分解，胆固醇和胆汁酸氧化后形成的产物经乙酰化形成硝基苯，荧光强度与硝基苯浓度成正比。
3. 第三步，检测硝基苯浓度，用荧光仪检测出硝基苯，把荧光浓度和标准曲线比较后可得到测定结果。
三、胆固醇氧化酶法校准和报告1. 校准：确定胆固醇浓度或临床报告值均需进行校准，以确保检测结果的准确性。
其基本方法有：用高低精密度含胆固醇空白和标准品，构成曲线，计算比值，确定回归方程。
校准得到的回归方程，可以将测定值转换成临床报告值。
2. 报告：根据确定的报告值，报告结果，为实验报告人根据样本状态和健康状况提供遗传学和健康建议。
本文介绍了胆固醇氧化酶法的原理，比较详细的介绍了其基本步骤，以及校准和报告的方法。
胆固醇氧化酶法是一种受酶反应活化，有效测定血清胆固醇的氧化酶法，准确性高，广泛应用于临床分析实验中。
人血清中总胆固醇的测定_左手工作室(精)
[实验仪器及试剂]
试管 移液管 UNICO-2000型分光光度计 恒 温水浴锅 标准血清 样本血清 蒸馏水 酶试剂盒
[实验步骤]
按下表加入各反应物：
空白管 2000 20 —— —— 标准管 2000 —— 20 —— —— 20 样本管 2000
微升 酶试剂 蒸馏水 标准血清 样本血清 A500nm
各管混匀，37℃反应6 min，以空白管校零。
A样本Biblioteka 胆固醇含量=A标准
×标准血清浓度
人血清中总胆固醇的测定
[实验目的及要求] 学会利用氧化酶法测定血清中总胆固醇含量的原理和方法。 [实验原理] 胆固醇脂+H2O 胆固醇+游离脂肪酸 胆固醇+O2 ⊿4-胆甾烯酮+H2O2 2H2O2+4-AA+4-氯仿 醌亚胺（红色）+4H2O CEH：胆固醇脂酶 POD：过氧化物酶 CHOD：胆固醇氧化酶 4-AA：4-氨基安替吡啉 醌亚胺在500nm有特征吸收，且生成量与样本中的胆固醇 含量成正比，可通过测定标准品反应生成的醌亚胺的吸光 度值，计算出样本中胆固醇的浓度。
血清总胆固醇的测定(胆固醇氧化酶法)
化，显色与比色五个阶段。目前临床上常用的是
胆固醇氧化酶法
化学法的种类很多，由于显色反应的特异性不同，其结果有一定 的差异。
Abell-Kendall(L-B反应)法
（化
公学
认测
）定
显色稳定
法
三氯化铁-硫酸反应法（Zak法） 操作简便
灵敏度约5倍于L-B反应
法
特异性差，干扰因素比L-B法多 。Zak法更适合于科研使用 。胆固醇酯与游离胆固醇显 色程度比较接近
（mmol/l）
• 参考值 • 3.0-5.20mmol/l。危险阈值：5.20-6.20mmol/l 。
高胆固醇血症：>=6.20mmol/l
思考题
• （1）血红蛋白，胆红素，维生素c对本实验结果
有干扰，原因是什么？
• （2）试查文献说明胆固醇的定量测定还有哪些方
法？每种方法的原理是什么？
• （3）基础液配置中胆酸钠的作用是什么?
表7-7血清总胆固醇的测定
项目
血清/μL
胆固醇标准 液/μL 蒸馏水/μL
酶试剂/μL
测定管
50
—
— 1.50
标准管 — 50
— 1.5水浴中保温15分钟，用空白
管调零，在500nm波长处测吸光度。
• 计算公式： 血清总胆固醇=A测定/A标准 x5.17
临床意义动脉粥样硬化原发性高血脂症贫血败血症甲状腺功能亢进实验目的血清中总胆固醇游离胆固醇游离脂肪酸低密度脂蛋白高密度脂蛋白极低密度脂蛋白乳糜微粒测定方法化学法
血清总胆固醇的测定 （胆固醇氧化酶法）
主讲人：刘杰
同组人（刘杰、杨宇光、陈琪、刘婷婷）
我们为什么要做这个实验呢？
• 化验介绍：血清胆固醇是血脂的成分之一，
血清总胆固醇测定实验报告
血清总胆固醇测定实验报告一、实验目的血清总胆固醇（Total Cholesterol，TC）测定是临床生化检验中的常见项目之一，本实验旨在掌握血清总胆固醇测定的原理、方法和操作步骤，熟悉实验过程中的注意事项，并对实验结果进行准确分析和判断。
二、实验原理目前，血清总胆固醇测定常用的方法是酶法。
其原理是胆固醇酯酶（CE）将胆固醇酯水解为游离胆固醇（FC）和脂肪酸，胆固醇氧化酶（COD）将 FC 氧化为胆甾烯酮和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶（POD）的催化下与 4-氨基安替比林（4-AAP）和酚反应生成红色醌亚胺。
在一定波长下，通过比色法测定吸光度，从而计算出血清总胆固醇的含量。
三、实验材料与设备1、材料血清样本：新鲜无溶血、无脂浊的血清。
试剂盒：包含胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替比林、酚等试剂。
2、设备分光光度计移液器恒温水浴箱离心机四、实验步骤1、样本处理空腹采集静脉血，置于干燥无抗凝剂的试管中，室温下静置 30 分钟使其凝固。
以 3000 转/分钟离心 10 分钟，分离血清，备用。
2、试剂准备按照试剂盒说明书的要求，将试剂 R1 和试剂 R2 分别配制好，并放置于恒温水浴箱中预热至规定温度。
3、测定操作取两支干净的比色管，分别标记为空白管和测定管。
空白管中加入蒸馏水20μL 和试剂R1 1000μL，混匀，置于 37℃恒温水浴箱中保温 5 分钟。
测定管中加入血清样本20μL 和试剂R1 1000μL，混匀，置于 37℃恒温水浴箱中保温 5 分钟。
然后，向空白管和测定管中分别加入试剂R2 500μL，混匀，置于37℃恒温水浴箱中保温 10 分钟。
4、比色测定以空白管调零，在分光光度计 500nm 波长处读取测定管的吸光度值（A）。
五、实验结果计算血清总胆固醇（mmol/L）＝（测定管吸光度空白管吸光度）×校准品浓度÷校准管吸光度六、实验结果本次实验测定的血清总胆固醇结果为_____mmol/L。
血胆固醇实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的本次实验旨在通过血液检测，了解受试者的血胆固醇水平，分析其胆固醇组成，并探讨血胆固醇水平与个体健康状况之间的关系。
二、实验原理胆固醇是人体内一种重要的脂质，分为高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）两种。
HDL-C被称作“好胆固醇”，对心血管有保护作用；而LDL-C被称作“坏胆固醇”，长期偏高会增加心血管疾病的风险。
本次实验采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定受试者的血胆固醇水平。
三、实验材料1. 试剂：胆固醇测定试剂盒（ELISA法）、标准品、酶联反应板、洗涤液、底物、终止液、显色剂等。
2. 仪器：酶标仪、移液器、微量加样器、振荡器等。
3. 样品：受试者空腹静脉血。
四、实验方法1. 样品处理：将受试者空腹静脉血采集后，按照试剂盒说明书要求，分离血清。
2. 标准曲线绘制：将标准品按照试剂盒说明书要求，依次加入酶联反应板孔中，加入底物，避光反应一定时间后，加入终止液，在酶标仪上测定吸光度（OD值），以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品测定：将受试者血清按照试剂盒说明书要求，依次加入酶联反应板孔中，加入底物，避光反应一定时间后，加入终止液，在酶标仪上测定OD值。
4. 结果计算：根据标准曲线，计算受试者的血胆固醇水平。
五、实验结果1. 标准曲线：以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线，线性回归方程为：Y=0.065X-0.013，相关系数R²=0.998。
2. 受试者血胆固醇水平：受试者A的血胆固醇水平为5.2mmol/L，其中HDL-C为1.5mmol/L，LDL-C为3.7mmol/L；受试者B的血胆固醇水平为6.8mmol/L，其中HDL-C为1.8mmol/L，LDL-C为5.0mmol/L。
六、分析与讨论1. 实验结果显示，受试者A的血胆固醇水平为5.2mmol/L，属于正常范围；受试者B的血胆固醇水平为6.8mmol/L，属于偏高范围。
血清胆固醇含量的测定实验报告
实验二 血清胆固醇含量的测定的实验报告实验目的：学会利用氧化酶法测定血清胆固醇含量的原理和方法。
实验原理：血清胆固醇由游离胆固醇（30%）和胆固醇酯（70%）组成。
血清胆固醇经酯化酶水解后，生成游离胆固醇和脂肪酸；在胆固醇氧化酶的作用下，游离胆固醇产生的H 2O 2与4-氨基安替比林和DHBS 反应生成微红色的醌亚胺。
醌亚胺在520nm 有特异吸收，反应产生的颜色与胆固醇含量成正比。
胆固醇酯+ H 2O−−−→−胆固醇酯酶胆固醇+脂肪酸 胆固醇+O 2−−−−→−胆固醇氧化酶△4胆甾烯酮+ H 2O 2 H 2O 2+4-氨基安替比林+DHBS−−−→−过氧化物酶醌亚胺+ H 2O 实验步骤：1、取2支试管分别加入0.2mL 的血清和标准胆固醇溶液，并分别标注为“H ”和“SH ”试管。
往每支试管加入0.2mL 的沉淀剂，在室温下静置15min ，用2000rad/min 的离心机分离10min 。
2、准备5支试管分别标注为“T ”（总胆固醇）、“H ”（高密度脂蛋白胆固醇）、“ST ”（标准总胆固醇）、“SH ”（标准高密度脂蛋白胆固醇）、“B ”（空白实验）。
按照下表准备各支试管：（标准胆固醇浓度为50mg/dL ）3、准备好以上试管后，充分混合并在37。
的温度下放置20min ，用波长520nm 的分光光度计测量各支试管的吸光度值。
实验结果： 计算公式：总胆固醇=ST T 吸光度值吸光度值×02.01.0×50高密度脂蛋白胆固醇=SHH吸光度值吸光度值×50代入数据得：总胆固醇=252.0167.0×02.01.0×50=165.7（mg/dL ）高密度脂蛋白胆固醇=430.0605.0×50=70.3（mg/dL ）。
血清总胆固醇的测定实验报告
血清总胆固醇的测定实验报告胆固醇是人体内一种重要的脂质物质，它在维持细胞膜的完整性、合成激素和胆汁酸等方面发挥着重要作用。
然而，过高的血清总胆固醇水平会增加心脑血管疾病的风险。
因此，及时测定血清总胆固醇水平对于预防和治疗心脑血管疾病具有重要意义。
本实验旨在通过测定血清中总胆固醇的含量，掌握其测定方法，并了解不同因素对血清总胆固醇含量的影响，为临床诊断和研究提供参考。
1. 实验原理。
本实验采用酶法测定血清总胆固醇含量。
首先，将血清样本与试剂中的胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶发生反应，将胆固醇酯水解成游离的胆固醇和脂肪酸，然后游离的胆固醇与试剂中的胆固醇氧化酶再次发生反应，生成过氧化物酶，最终生成带有颜色的化合物。
通过测定产生的有色产物的光密度，即可计算出血清中总胆固醇的含量。
2. 实验步骤。
（1）取适量血清样本，离心沉淀，取上清液备用。
（2）将标准品和上清液分别加入反应管中，加入试剂A和试剂B，混匀后放置37℃恒温水浴中反应一定时间。
（3）加入硫酸后，混匀放置10min，再加入试剂C混匀后放置2min。
（4）测定吸光度值，并根据标准曲线计算出血清总胆固醇的含量。
3. 实验结果。
通过实验测定，得出不同血清样本中总胆固醇的含量分别为X mg/dL、Ymg/dL和Z mg/dL。
根据实验结果，我们可以得出……（根据实验结果进行分析和讨论）。
4. 实验结论。
本实验通过酶法测定了血清中总胆固醇的含量，结果表明……（根据实验结果进行结论）。
5. 实验注意事项。
（1）在实验过程中，要注意血清样本的保存和处理，避免样本受到污染或变质。
（2）在试剂配制和使用过程中，要按照相关操作规程，严格控制试剂的质量和使用量。
（3）实验操作过程中，要注意实验室安全，避免发生意外。
6. 实验意义和应用。
本实验方法可以准确测定血清中总胆固醇的含量，为临床诊断和研究提供了重要的参考数据。
同时，也为进一步研究血清总胆固醇与心脑血管疾病的关系提供了实验基础。
胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇
胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇（标准管法）实验目的：1.了解自动生化分析仪的工作原理2.熟悉血清总胆固醇相关生化的检测项目及检测方法3.掌握血清总胆固醇相关生化检测项目的临床意义。
实验原理：胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇:血清中的胆固醇由游离胆固醇及胆固醇酯构成，胆固醇酯在胆固醇酯酶的作用下水解为胆固醇，再与胆固醇氧化酶作用产生△4-胆甾烯酮及H202;后者在过氧化物酶的作用下，与苯酚及4-氨基安替比林作用生成红色化合物醌亚胺。
测定该红色化合物在500nm波长的吸光度，可以计算出血清总胆固醇含量。
实验操作：1.将准备好的酶工作液（胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、苯酚、4-氨基安替比林）加入空白管、浓度标准管、测定管各1.5ml，再向标准管加20μl胆固醇标准液（5.18mmol/L），再向测定管加入20μl血清。
2.将三支试管放入水浴锅中，37℃保温20分钟3.调节分光光度计波长500nm,透光度T至100%，将空白管试液对光的吸收调节为0，再用空白管调“零”点测定其他各管的吸光度。
实验结果:分光光度计测得标准管吸光度和测定管吸光度，根据朗伯-比尔定律,得到血清样品总胆固醇值=（测定管吸光度/标准管吸光度）x5.18分析讨论：为什么用酶酚混合液作为空白管溶液？酶酚混合液作为空白试剂，调节分光光度计透光度T至100%，可将酶酚混合液对光的吸收调节为0，从而消除对葡萄糖反应产物吸光度测定的影响。
思考题：1.血清甘油三酯升高有和临床意义？血脂代谢紊乱对机体有何危害？血清甘油三酯升高可能代表着各种疾病的发生：如原发性继发性高脂蛋白血症、动脉粥样硬化、糖尿病、肾病、脂肪肝等。
血脂代谢紊乱对机体的危害：血脂代谢紊乱的影响分两种：1）高胆固醇血症引起的危害：主要是动脉粥样硬化，包括大动脉、中动脉、小动脉动脉硬化。
动脉斑块形成主要表现在心、脑、肾等位置，如果动脉硬化斑块较重或者不稳定，发生在心脏可出现急性心肌梗死；在脑血管会出现急性脑血栓，即急性脑梗死，以及肾脏出现急性肾梗死；在外周血管，如腿部可引起坏疽；2）高甘油三酯血症引起的危害：在暴饮暴食的情况下，高甘油三酯可以诱发急性胰腺炎。
血清总胆固醇测定实验报告
血清总胆固醇测定实验报告背景介绍：总胆固醇（TC）是指血浆中所有脂蛋白的胆固醇总和，包括低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和极低密度脂蛋白胆固醇（VLDL-C）。
总胆固醇水平的高低与心血管疾病的发生密切相关，因此对其进行准确测定具有重要的临床意义。
实验目的：通过本实验，掌握血清总胆固醇的测定方法，了解其在临床诊断中的应用。
实验原理：本实验采用酶法测定血清总胆固醇，其原理为将胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶加入样本中，将胆固醇和脂蛋白水解为游离胆固醇和过氧化物，再由过氧化物与酚类物质发生反应，生成有色产物，最后通过比色计测定其吸光度，从而计算出总胆固醇的含量。
实验步骤：1. 取血清标本，离心分离血清。
2. 用标准吸光度计预热，设置波长为500nm。
3. 取适量样本和对照品，加入试剂A和试剂B，混匀后在37°C恒温水浴中反应15分钟。
4. 加入试剂C混匀，再在37°C恒温水浴中反应5分钟。
5. 用比色计在波长为500nm处对样本和对照品吸光度，计算总胆固醇含量。
实验结果：样本A吸光度为0.6，对照品吸光度为0.3，根据标准曲线计算出样本A的总胆固醇含量为5.0mmol/L。
样本B吸光度为0.7，对照品吸光度为0.4，计算出样本B的总胆固醇含量为6.0mmol/L。
实验结论：根据上述实验结果，样本A的总胆固醇含量正常，而样本B的总胆固醇含量超标，提示可能存在心血管疾病的风险。
因此，血清总胆固醇的测定对于心血管疾病的筛查和诊断具有重要意义，有助于及时采取预防和治疗措施。
总结：通过本次实验，我们掌握了血清总胆固醇的测定方法及其临床意义，了解了其在心血管疾病中的重要性。
在临床实践中，我们应该重视血清总胆固醇的监测，及时发现异常情况并采取相应的干预措施，以保障患者的健康。
胆固醇氧化酶法
胆固醇氧化酶法（Cholesterol oxidase）血清中测定方法包括化学方法和酶法，化学方法包括抽提法和直接测定法酶法临床上常用的是胆固醇氧化酶法LDL是一组不均一的富含胆固醇的脂蛋白颗粒，颗粒大小、电荷或apoB含量等应用超速离心法、色谱法、电泳法、化学或免疫沉淀法将LDL与其他脂蛋白分离开，然后测定LDL 组分中胆固醇含量。
由于化学沉淀法和免疫分离法测定LDL-C均需要进行样本预处理，其最大缺点是不能进行自动化分析，不适应大规模流行病学调查或临床大批量标本诸多项目同时检测。
国外近两年相继研制开发出几种不同类型的均相测定法，标本不需沉淀处理，可用于自动生化分析仪自动测定。
(1)选择性反应法［12～14］：基于用表面活性剂控制酶与相应脂蛋白的反应的新技术研制而成，多为液体双试剂。
目前有两类检测系统：第一类系统的试剂1中的表面活性剂1可使血清样品中的HDL、CM和VLDL颗粒解离，Chol分子被开释出来，与胆固醇酶试剂反应，产生的H2O2在缺乏偶联剂时被消耗而不显色，此时LDL颗粒还是完整的。
加试剂2(含表面活性剂2和偶联剂DSBmT)，它可使LDL颗粒解离开释Chol，参与Trinder反应而显色，因其他脂蛋白的Chol分子已除往，光彩深浅与LDL-C量呈比例［12，13］。
HDL 目前临床常规实验室直接分离测定HDL-C的方法大致可分为3代。
第1代为化学沉淀法,常用的沉淀剂为多阴离子,如磷钨酸(FTA)、DS、肝素(Hep)或非离子多聚体如聚乙二醇（PEG）与某些两价阳离子(如Mg2＋、Ca2＋、Mn2＋)适用。
最早为美国国立卫生研究院(NIH)所采用的肝素-锰沉淀法(HM法),后多采用DS50-Mg2＋矿法,欧洲则多采用磷钨酸镁沉淀法(PTA-Mg2＋法)和聚乙二醇沉淀法(PEG法)。
1995年中华医学会检验分会曾在国内推荐PTA-Mg2＋法作为HDL-c测定的常规方法。
但此类方法常因含apoB的脂蛋白组份沉淀不完全导致结果假性偏高。
血清总胆固醇测定法
血清总胆固醇测定法1.实验原理胆固醇酯被胆固醇酯酶水解酶(CEH)水解成游离胆固醇，后者被胆固醇氧化酶(COD)氧化成胆甾烯酮并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化，使4-氨基安替比林与酚（三者合称PAP）反应，生成红色醌亚胺色素（Trinder反应）。
醌亚胺的最大吸光度在500nm左右，吸光度与标本中TC含量成正比。
反应式如下：CEH胆固醇酯+ H2O 胆固醇＋脂肪酸COD胆固醇＋O2Δ4-胆甾烯酮＋H2O2POD2H2O2+ 4-AAP +酚苯醌亚胺(显色) + 4H2O 2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。
2.2 类型：血清，肝素或EDTA抗凝血浆。
3. 标本存放：血清稳定性：20～25℃保存可稳定1周；4～8℃保存可稳定1周；-20℃保存可稳定3个月。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂欧泰克总胆固醇试剂盒（货号：112 1307170 1 试剂8×70ml）6.1.1 试剂组成Tris缓冲液pH7.3 50mmol/L酚20mmol/L4-氨基安替比林 1.0mmol/L 胆固醇酯酶(CHE) ≥400U/L 胆固醇氧化酶(CHO) ≥200U/L 过氧化物酶(POD) ≥4000U/L 6.1.2 试剂准备试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂6.2 校准品：使用罗氏复合校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
【检验医学】胆固醇氧化酶法测定
3小时。不能立刻测定的标本要分离血清，转 移至有盖子的小试管中，当天不能测定的，可 暂时存放于4℃冰箱保存。
方法学评价
• 本方法灵敏度高，准确度高，精密度好，线性 范围宽
• 对标准参考物的要求较高（要求有定值的校准 液），且容易受到一些还原物质如尿酸、胆红 素、维生素C、谷胱甘肽等的干扰
• 本实验检测/可报告范围0.08～20.7 mmol/L， 分析灵敏度（检测低限）0.08 mmol/L
胆固醇氧化酶法测定 血清总胆固醇
目的
• 掌握酶法测定血清胆固醇的基本 原理及操作
• 熟悉血清胆固醇测定的临床意义 • 了解酶法测定血清胆固醇的特点
和注意事项
简介
• 决定方法为同位素稀释—质谱法 • 参考方法为正己烷抽提L-B反应
显色法（AL-BK法） • 常规方法为酶法（胆固醇氧化酶
法（COD-PAP））
试剂与器材
• 缓冲液 • 色原 • 4-AAP • 胆固醇酯酶 • 胆固醇氧化酶 • 过氧化物酶 • 全自动生化分析仪；半自动生化分析仪
原理
• 胆固醇酯＋H2O 胆固醇酯酶 胆固醇＋RCOOH
• 胆固醇＋O2 胆固醇氧化酶 Δ4—胆甾烯酮＋H2O2
• 2 H2O2 ＋4－氨基安替比林 + 酚 过氧化物酶 醌亚胺＋4 H2O
• TC降低：常见于低脂蛋白血症、贫血、败血症、 甲状腺功能亢进、肝疾病、严重感染、营养不 良、肠道吸收不良和药物治疗过程中的溶血性 黄疸及慢性消耗性疾病，如晚期癌症等。
注意事项
• 血清和血浆（肝素、EDTA-K2、EDTA-NA2）均 可供TC测定，但后者结果比前者结果低3%。不 可使用柠檬酸、草酸或氟化物抗凝。
实验三、血清中总胆固醇的测定
1.0
1.0
标准液(uL)
– 10.0 –
–
–
血清样品(uL) –
– 10.0 10.0 10.0
充分混匀，37℃ 水浴中保温15min；
பைடு நூலகம்
冷却至室温后，510nm处比色
比色方法：以空白管调零，读取标准管及样品管光密度值。
（2）计算：
依据朗伯-比尔定律： A=KLC
标准管胆固醇浓度：5.17mmol/L
C样=
A样 A标
× C标
样品管光密度值
样品管胆固醇浓度 ＝
×5.17
(mmol/L)
标准管光密度值
参考值
胆固醇 血清参考值：3.0 ~ 5.20mmol/L 危险阈值：5.20 ~ 6.20mmol/L 高胆固醇血症：> 6.20mmol/L
实验三
血清中总胆固醇 的测定
（胆固醇氧化酶法）
一、实验目的
学习胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇的原理。 掌握血清总胆固醇的测定方法及操作技术。
二、实验原理
游离胆固醇 血清总胆固醇
（1） 胆固醇酯 胆固醇酯酶 游离胆固醇＋FAA
（2）游离胆固醇 胆固醇氧化酶 胆甾烯酮+H2O2
（3）H2O2+4-氨基安替吡啉（4-AAP）＋苯酚
过氧化物酶
（POD）
H2O ＋红色醌类物质
510nm
相对血清总胆固醇浓度 光吸收法测定
三、实验器材
材料：人血清 试剂：总胆固醇测定试剂盒
用具：分光光度计，微量移液枪，试管，试管架， 恒温水浴锅
四、实验步骤
（1）取3支试管，按下表加入试剂:
试剂
试剂空 标准 样品管 样品管 样品管
血清胆固醇测定实验报告
血清胆固醇测定实验报告引言胆固醇是一种脂类物质，它在我们的身体中起着重要的生理功能。
然而，高胆固醇水平与心血管疾病等许多健康问题相关联。
因此，准确测定血清中的胆固醇水平对我们的健康至关重要。
本实验旨在介绍一种常用的方法来测定血清中的胆固醇浓度。
实验目的本实验的目的是测定血清中的胆固醇浓度。
通过使用一种简单而又可靠的实验方法，我们将能够获得准确的结果。
实验原理血清中的胆固醇可以通过一种酶法测定。
在这种方法中，我们使用一种叫做胆固醇酸酯酶的酶来催化胆固醇的水解反应。
在反应中，胆固醇酸酯被水解成为胆固醇和脂肪酸。
通过测定产生的脂肪酸的浓度，我们可以间接地确定血清中胆固醇的浓度。
实验步骤1.首先，准备实验所需的材料和试剂，包括血清样本、胆固醇酸酯酶、试剂盒中提供的标准溶液等。
2.将试剂盒中提供的标准溶液分别加入试管中，每个标准溶液加入不同浓度。
3.分别取一定量的血清样本加入试管中。
4.加入一定量的胆固醇酸酯酶。
5.将试管放置在恒温水浴中，在37摄氏度下反应一定时间。
6.反应结束后，用甲醛试剂停止反应，并加入硫酸试剂。
7.将试管摇匀，使反应液混合均匀。
8.使用分光光度计测定吸光度。
根据吸光度和标准曲线，计算出血清样本中胆固醇的浓度。
实验结果通过实验测定，我们得到了血清样本中胆固醇的浓度。
根据不同样本的吸光度和标准曲线，我们可以得出血清样本中胆固醇的浓度范围。
实验讨论本实验使用了一种常用的酶法来测定血清中的胆固醇浓度。
该方法简单而又可靠，可以在临床实验室中广泛应用。
然而，该方法也存在一些局限性。
例如，反应时间和温度对结果的影响可能会导致一定的误差。
此外，该方法对于某些特殊样本可能不适用，需要进一步研究和改进。
结论通过本实验，我们成功地测定了血清样本中胆固醇的浓度。
准确地测定血清中的胆固醇水平对于评估健康状况和预防心血管疾病非常重要。
本实验提供了一种简单而又可靠的方法来测定血清中的胆固醇浓度，为临床实验室提供了有益的参考。
血清总胆固醇测定实验报告
血清总胆固醇测定实验报告一、实验目的血清总胆固醇（Total Cholesterol，TC）测定是临床生化检验中常见的项目之一。
本次实验的目的是掌握血清总胆固醇测定的基本原理、操作方法和结果分析，了解血清总胆固醇水平在健康评估和疾病诊断中的意义。
二、实验原理目前常用的血清总胆固醇测定方法为酶法。
胆固醇酯酶（CE）首先将胆固醇酯水解为游离胆固醇和脂肪酸，胆固醇氧化酶（COD）催化游离胆固醇氧化生成胆甾烯酮和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶（POD）的作用下与 4-氨基安替比林（4-AAP）和酚反应生成红色醌亚胺化合物。
在 500nm 波长处测定吸光度，吸光度的高低与血清中总胆固醇的含量成正比，通过与标准品比较可计算出血清总胆固醇的浓度。
三、实验材料1、仪器分光光度计恒温水浴箱移液器离心机2、试剂胆固醇测定试剂盒（包括胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替比林、酚等）标准胆固醇溶液（浓度已知）血清样本四、实验步骤1、试剂准备按照试剂盒说明书将试剂配制成工作液，置于 37℃恒温水浴箱中预温。
2、样本处理采集空腹静脉血，离心分离血清。
3、标准曲线绘制取 5 支试管，分别加入0μl、50μl、100μl、150μl、200μl 标准胆固醇溶液，用生理盐水补足至200μl。
各管中胆固醇的浓度分别为0mmol/L、25mmol/L、50mmol/L、75mmol/L、100mmol/L。
向各管中加入 20ml 工作液，充分混匀，37℃水浴 10 分钟。
以空白管调零，在 500nm 波长处测定各管吸光度。
以胆固醇浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
4、样本测定取200μl 血清样本，加入 20ml 工作液，充分混匀，37℃水浴 10 分钟。
测定样本管的吸光度，根据标准曲线计算出血清总胆固醇的浓度。
五、实验结果1、标准曲线记录各标准管的胆固醇浓度和对应的吸光度值，绘制标准曲线。
标准曲线应呈线性关系，相关系数（r）应大于 098。
胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇
胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇【原理】血清中总胆固醇(total cholesterol ，TC)包括游离胆固醇(free cholesterol ，FC)和胆固醇酯(cholesterol ester ，CE)两部分。
血清中胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸(FFA)，胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成△4-胆甾烯酮和过氧化氢，H 2O 2在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC 含量成正比。
【试剂】1．胆固醇液体酶试剂组成(具体含量见相关文献)GOOD's 缓冲液(pH6.7) 50mmol/L 胆固醇酯酶 ≥200U/L 胆固醇氧化酶 ≥100U/L 过氧化物酶 ≥3 000U/L 4-AAP 0.3mmol/L 苯酚5mmol/L2．胆固醇标准溶液5.17 mmol/L (200 mg/dl) 精确称取胆固醇200 mg ，用异丙醇配成100 ml 溶液，分装后，4℃保存，临用取出。
也可用定值的参考血清作标准。
【操作步骤】 终点法检测TC 按下表依次加样。
酶法测定TC 操作步骤项目 测定管 标准管 空白管 血清(μl) 50 － － 标准液/定值血清(μl)－ 50 － 蒸馏水(μl) － － 50 酶试剂(μl)1.501.501.50混匀后，37℃保温5 min ，用分光光度计比色，于500 nm 波长处以空白管调零，读出各管吸光度。
【计算】血清TC (mmol/L)＝标准管吸光度测定管吸光度×胆固醇标准液浓度【参考范围】血清参考值：3.0～5.20 mmol/L；危险阈值：5.20～6.20 mmol/L；高胆固醇血症：≥6.20 mmol/L。
【临床意义】1．TC增高常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症(如家族性高胆固醇血症、家族性ApoB缺陷症、多源性高胆固醇血症、混合性高脂蛋白血症等)、糖尿病、肾病综合征、总胆管阻塞、甲状腺功能减退、肥大性骨关节炎、老年性白内障和牛皮癣。
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实验十四血清胆固醇测定
（胆固醇氧化酶法）
胆固醇的测定方法很多；通常可分为化学试剂比色法、酶法、气相色谱法、高效液相色谱法、核素稀释质谱法五大类。
化学试剂比色法中有直接法和间接法；前者可用血清直接测定，后者是用溶剂或其它方法提取胆固醇后再作定量。
酶法由于操作简便、结果准确，试剂无腐蚀性，而且因使用特异性酶，大大减少了血液中其它成分的干扰，目前已成为测定胆固醇的主要方法。
【目的】
1．了解胆固醇氧化酶法测定血清胆固醇的原理，能进行血清胆固醇测定的操作。
2.掌握血清胆固醇测定的临床意义。
【原理】
血清中总胆固醇（TC）包括胆固醇酯(CE)和游离型胆固醇(FC),酯型占70%，游离型占30%。
胆固醇酯酶（CEH）先将胆固醇酯水解为胆固醇和游离脂肪酸（FFA），胆固醇在胆固醇氧化酶（COD）的作用下氧化生成Δ4-胆甾烯酮和过氧化氢。
后者经过氧化物酶（POD）催化氢与4-氨基安替比林（4-AAP）和酚反应，生成红色的醌亚胺，其颜色深浅与胆固醇的含量呈正比，在500nm波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血清胆固醇的含量。
反应式如下：
CEH
胆固醇酯胆固醇 ＋ 脂肪酸
胆固醇 ＋ O2△4-胆甾烯酮 ＋ H
O2
2
2H2O2 ＋ 4-氨基安替比林 ＋ 酚红色醌亚胺【器材】
试管、吸管、试管架、微量加样器、恒温水浴箱、分光光度计。
【试剂】
酶法测定胆固醇多采用市售试剂盒。
1. 酶应用液胆固醇酶试剂的组成为：
磷酸盐缓冲液 50mmol/L
胆固醇酯酶≥200U/L
胆固醇氧化酶≥100U/L
过氧化物酶≥3 000U/L
4-氨基安替比林 mmol/L
苯酚 5 mmol/L
此外还含有胆酸钠和Triton X-100，胆酸钠是胆固醇酯酶的激活剂，表面活性剂Triton X-100能促进脂蛋白释放胆固醇和胆固醇酯，有利于胆固醇酯的水解。
2． mmol/L（200mg /dl）胆固醇标准液
精确称取胆固醇 200mg溶于无水乙醇，移入100ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度(也可用异丙醇等配制)。
【操作】
取试管3支，编号，按下操作。
表3-15 酶法测定血清胆固醇操作步骤
加入物（ml）测定管标准管空白管
血清－－胆固醇标准液－－
蒸馏水－－
酶应用液
混匀后，37℃水浴保温15分钟，在500nm波长处比色，以空白管调零，读取各管吸光度。
【计算】
血清胆固醇 (mmol/L) ＝ 测定管吸光度
标准管吸光度
× 5.17
【注意事项】
1. 黄疸血清过高的胆红素可还原—部分反应中的H2O2，降低显色反应，使结果偏低。
但测定胆固醇，胆红素对酶法的干扰比化学法小。
2. 用胆固醇标准液引起的误差较大，故目前提倡采用胆固醇定值血清为标准。
3. 轻度溶血对测定结果无影响，但明显溶血可使结果增高，此时可用一个不加COD 的空白管从结果中减去后纠正。
4. 其它影响因素，如维生素C、谷胱甘肽、氟化物引起负偏差。
【正常参考范围】
～L
【临床意义】
1. 血清胆固醇增高常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症、糖尿病、肾病综合征、胆管阻塞、甲状腺功能减退。
2. 血清胆固醇降低常见严重贫血、甲状腺功能亢进、长期营养不良等。
【结果及分析】
【思考题】
1．胆固醇有哪些重要的生理功能，血清胆固醇升高对机体最严重的危害是什么？
2．胆固醇在体内可转变为哪些物质，如何排泄？
3．实验中需要哪几种酶参加，各有什么作用？。