ABO血型正、反定型

ABO血型正、反定型操作规程

[目的]

保证ABO血型鉴定准确，确保临床输血安全。

[适用围]

XXX医院输血科

[职责]

具有专业技术的工作人员主要负责本院输血（或备血）标本的ABO血型鉴定（但只对该单份标本负责）。

[相关文件]

试剂采购、保存和使用管理程序

设备采购、使用管理程序

消毒与清洁管理程序

标本采集、运输、保存和报废管理程序

紧急用血管理程序

[相关记录]

仪器设备的采购、使用和维护记录

仪器的温度记录

恒温水温箱的换水和消毒记录

消毒液的配置记录

清洁消毒记录

试剂采购、使用记录

标本交接和报废记录

紧急用血记录

[实验原理]

ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。存在A凝集原的称为A型，存在B凝集原的称为B型。而血清中还存在凝集素。当A凝集原与抗A凝集素相遇或B凝集原与抗B凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。一般A型血清中含有抗B 凝集素，B型血清中含有抗A凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者的红细胞反应（称为正定型），用标准红细胞与被测者血清中的凝集素反应（称为反定型），以确定其ABO血型。

[仪器器械]

玻璃试管、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、普通离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。

[试剂]

抗A标准血清、抗B标准血清、A型标准红细胞、B型标准红细胞、O型标准红细胞、生理盐水。以上试剂均为有合格证件的正品。

[标本收集与处理]

1．受检者血清：采集受检者静脉血2~3ml，经1000r/min离心1分钟或室温静置1小时后取上清。

2．2~5%的受检者红细胞：采集受检者静脉血或末梢血，用生理盐水制成2~5％红细胞盐水悬液备用，制备方法见本节质量控制和注意事项。

3．标本出现中度以上溶血者，为不合格标本，不能用于检测。

[实验方法与步骤]

1.ABO血型的正定型（试管法）：

⑴、取2支试管，分别标上抗A 和抗B ；

⑵、制备待测标本2~5%的红细胞悬液（取1支试管，加入2ml 生理盐水，再加入1滴待测标本红细胞，混匀备用）；

⑶、在抗A 管中加入2滴抗A 标准血清，在抗B 管中加入2滴抗B 标准血清；

⑷、在抗A 和抗B 管中分别加入1滴已制备好的待测标本2~5%红细胞悬液； ⑸、混匀后，立即对称放入离心机中进行1000r/min 离心1分钟，或室温静置1小时，再轻轻摇动试管，使沉于管底的红细胞浮起，先肉眼观察有无凝集现象，如眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。

⑹根据有无凝集现象判定结果如下。注意凝集强

度，此有助于A 、B 亚型、类B 或cisAB 的发现。

⑺凝集强度判断标准

4十 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。

3十 红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。

ABO

血型

抗A 标准血清 抗B 标准血清 A 型

＋ － B 型

－ ＋ O 型

－ － AB 型 ＋ ＋

2十红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。

1十肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。

土镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。

MF 混合凝集外观(mixed field)是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。

一表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。

2.ABO血型的反定型（试管法）：

⑴、取3支试管，分别标上A、B和O；

⑵、在3支试管中分别加入2滴待测标本的血清；

⑶、将ABO标准红细胞轻轻地充分混匀后，在A管中加入1滴A型标准红细胞，在B管中加入1滴B型标准红细胞，在O管中加入1滴O型标准红细胞；

⑷、混匀后，对称放入离心机中进行1000r/min离心1分钟（或3400 r/min离心15秒）；

⑸、取出后，先观察是否溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），再轻轻摇动试管，肉眼观察有无凝集现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察；

⑹根据有无凝集现象判定结果如下。注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B 或cisAB的发现。

⑺凝集强度判断标准（同ABO血型的试管定型）

[质量控制和注意事项]

1、分型标准血清试剂必须为三证齐全的合格产品，质量性能符合要求，且在有效期使用。试剂后必须贴上注有日期和人的标签，使用后应及时置于2~8℃专用冰箱中保存，以免细菌污染和变质而影响试验结果。试剂后有效期为一周。

2、商用分型标准红细胞试剂必须为三证齐全的合格产品，质量性能符合要求，且在有效期使用；自制分型标准红细胞试剂必须以3个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗涤1~3次，以除却存在于血清中的抗体及可溶性抗原，再制成2~5%的红细胞悬液备用。试剂或制备后必须贴上注有或制备日期和人或制备人的标签，使用后应及时置于2~8℃专用冰箱中保存，以免细菌污染和变质而影响试验结果。试剂或制备后有效期为一周。

3、生理盐水启用后，有效期为二周。

4、所有试剂在使用时，必须检查是否有浑浊、变色、凝集等变质现象；凡可疑者，必须更换新的试剂进行检测。若分型标准血清使用时间较长后，最好用已知的ABO标准红细胞检查结果是否与已知的血型相符；若分型标准红细胞使用时间较长后，最好用已知的分型标准血清检查结果是否与已知的血型相符，以防标准血清或红细胞制品污染、变质失效而造成鉴定错误。

5、试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。

6、操作方法应按规定进行，一般应先加血清，后加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。

7、IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以4℃为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍在室温(20~24℃)进行试验，37℃可使反应减弱。