果蔬中还原糖与总糖的测定
实验四 还原糖和总糖的测定
·在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正 比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度 值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖 的含量。
· 由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子 水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
7
0.5
0.5
1.5
1.5
8
9
1.5
1 1
1.5
1.5
10
1
1
Байду номын сангаас
1.5
五、结果与计算：
计算出7、8号管光密度值平均值和9、10管光密度值的的平
均值，在标准曲线上分别查出相应的还原糖毫克数，按下式 计算出样品中还原糖和总糖的百分含量。
六、思考题
3,5-二硝基水杨酸比色法是如何对总糖
进行测定的?
实验四 还原糖和总糖的测定
——3,5-二硝基水杨酸比色法
一、目的
掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测 定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、原理
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是 还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽
糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度
定容至100mL 过 滤 取滤液10mL
定容至100mL
（3）显色和比色 取4支20mL具塞刻度试管，编号，按表2所示分别加入 待测液和显色剂，空白调零可使用制作标准曲线的0号管。 加热、定容和比色等其余操作与制作标准曲线相同。
表2 样品还原糖测定
管 号 还原糖 待测液 （mL） 总糖待 测液 （mL） 蒸馏水 （mL） DNS （mL） 光密度值 （OD540nm） 查曲线 葡萄糖量 （mg）
总糖和还原糖的测定
朗伯－比尔（Lambert-Beer）定律
朗伯－比尔定律是比色分析旳基本原理， 这个定律是有色溶液对单色光旳吸收程度与 溶液及液层厚度间旳定量关系。此定律是由 朗伯定律和比尔定律归纳而得。
A或D=㏒I0/I
A或D＝光吸收或光密度
I0 ＝入射光强度 I ＝透射光强度
三、试剂和器材
试剂：
DNS试剂 葡萄糖原则溶液 ； 6M HCl；碘－碘化钾溶液； 6M NaOH；0.1% 酚酞指示剂。
材料
藕粉，玉米淀粉
器材
容量瓶,试管，移液管，量 筒，胶头滴管，漏斗
50℃水浴，沸水浴，分光 光度计等。
四、操作环节
1.葡萄糖原则曲线制作 2.还原糖旳提取
藕粉改为称1.0克，50℃水浴20min浸出， 水浴锅中进行 3.总糖旳水解及提取 玉米淀粉测总糖，沸水浴20min酸水解，电 磁炉中进行 4.样品含糖量旳测定
试验三 总糖和还原糖旳测定
——3,5二硝基水杨酸(DNS)法
一、目 旳
掌握还原糖和总糖旳测定原理 掌握分光光度计旳使用
二、原 理
还原糖：指具有自由醛基或酮基旳糖类
单糖: 不能被水解成更小分子旳糖,单糖都是还原糖 葡萄糖, 果糖
寡糖: 最主要旳是双糖：Maltose（麦芽糖 ）,Sucrose（蔗糖） Lactose（乳糖 ） 但Sucrose不是还原糖 多糖: 能水解成多种单糖分子,如淀粉,糖原和纤 维素
样品旳透射比或吸光度值。样品读数三遍，取平均值。 7).使用分光光度计时带测定样品、洗瓶、废液杯、笔和本。
移液器旳使用手法，两档位
吸液
放液
八、思索题
1.比色时为何要设计空白管？
(整理)生化实验分析
果蔬成分生化分析果蔬成分的分析主要分为四个方面：维生素C含量的测定、总糖和还原糖含量的测定、蛋白质含量的测定、过氧化物酶的分析。
总体从实验目的、实验原理、实验试剂、实验结果和分析的角度进行分析一．实验目的：1、掌握微量测定维生素C的方法和技术。
2、了解果蔬中维生素C含量。
3、掌握总糖和还原糖含量的测定方法。
4、掌握蛋白质测定的方法和技术。
5、了解果蔬中蛋白质的含量。
6、了解聚丙烯酰胺凝胶的制作过程及结构特点。
二．实验原理：1.还原型维生素C可被氧化型2，6-二氯酚靛酚（下面简称染料）所氧化，成为氧化型维生素C。
氧化型染料在中性或碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。
成为还原型后为无色。
用氧化型染料来滴定还原型维生素C，当滴至全部还原型维生素C被氧化后，在稍滴一点呈微红色为终点。
滴定用去染料量与样品中还原型维生素C量成正比。
（此法虽简单迅速，但氧化型染料亦能使其他还原型物质氧化，所以有一定缺点。
）2.蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。
其原理：糖类在较高温度下可被硫酸脱水成糠醛或糠醛衍生物，再与蒽酮缩合成蓝色化合物，在620nm处有最大吸收。
多糖为非还原糖，可用酸将没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖，再利用还原糖的性质进行测定，这样就可分别求出总糖和还原糖的含量。
3. 考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质-染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。
考马斯亮蓝G-250存在着两种不同的颜色形式，红色和蓝色。
考马斯亮蓝G-250在酸性游离状态下呈棕红色，最大光吸收在465nm，当它与蛋白质结合后变为蓝色，最大光吸收在595nm。
在一定的蛋白质浓度范围内，蛋白质-染料复合物在波长为595nm处的光吸收与蛋白质含量成正比，通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。
蛋白质和考马斯亮蓝G-250结合，在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速，其结合物在室温下1小时内保持稳定。
实验二总糖和还原糖的测定(“还原”相关文档)共9张
试剂 管号
空白 1 试验 2
标准 1 试验 2
总糖 1 试验 2
H2O (mL)
2 2 1 1
标准葡萄糖 （mL）
1 1
还原糖提取液 （mL）
总糖水解液 （mL）
2 2
铜试剂
（mL） 沸
4
水
浴
4
中
4
煮
沸
4 15
4分
钟
4
七、 思考题
1、碱性铜试剂法测定还原糖是直接滴定还是间接 滴定？两种滴定方法各有何优点？
（CHOH）4+ 2 H2O = 2
实验二 总糖和还原糖的测定
可溶性的氧化铜络合物
取6只试管，按照下表的次序加入试剂。
COOK
COOK
另取6个小三角烧瓶，按相应的试管顺序编号。
H―C―OH H―C―O
（CHOH）4+ 2 H2O = 2
试剂
（CHOH）4+ 2 H2O = 2
沸 15 分
四、操作步骤 1. 取6只试管，按照下表的次序加入试剂。另取6个小三角
实验二 总糖和还原糖的测定
2NaOH + CuSO4=Cu(OH)2↓+ Na2SO4
COOK
COOK
（CHOH）4+ 2 H2O = 2
COONa
COONa
Cu(OH)2 + H―C―OH ＝ H―C―O H―C―OH H―C―O
Cu + 2 H2O
可溶性的氧化铜络合物
试剂 Cu(OH)2 + H―C―OH ＝ H―C―O
H―C―O
Cu(OH)2 + H―C―OH ＝
果蔬中营养成分含量的测定 绿豆芽黄豆芽
果蔬中营养成分含量的测定（绿豆芽、黄豆芽）12生科本实验内容及结果：一、果蔬中维生素C 含量的测定实验原理：还原型维生素C 可被氧化型2，6-二氯酚靛酚（下面简称染料）所氧化，成为氧化型维生素C 。
氧化型染料在中性或碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。
成为还原型后为无色。
用氧化型染料来滴定还原型维生素C ，当滴至全部还原型维生素C 被氧化后，在稍滴一点呈微红色为终点。
滴定用去染料量与样品中还原型维生素C 量成正比。
器材：微量滴定管及架、台秤、50mL 量筒、1mL 、10mL 吸管、100mL 锥形瓶、剪刀、滤纸操作：1、制备新鲜果蔬液：如洗净新鲜橘子，擦干表面水分，剥去外皮，称20.0g 橘子放入50mL 量筒中，加2%草酸液至40mL 刻度处（即稀释1倍）。
用玻璃棒搅拌，静置10分钟，过滤，滤液即是（若样品中含大量铁，可用8%醋酸溶液提取，可在一定程度上延缓Fe 2+ 还原染料）。
2、染料液装入滴定管中：应驱除滴定管中的气泡，调整好零点。
3、滴定维生素C 标准液：吸取1.0mL 维生素C 标准液放入锥形瓶中，加9mL1%草酸溶液，摇匀，用染料液滴定至微红色保持15秒不褪色即为终点。
记下所用去染料液数量，可算出1mL 染料相当于多少mg 维生素C 。
4、滴定样品液：吸取10.0mL 样品液放入锥形瓶中，同上操作进行滴定。
可做两份，求平均值。
实验结果：计算：M 绿豆=100⨯⨯W C V =2.3mgM 黄豆=100⨯⨯WC V =1.2mg 每100g 黄豆芽中维生素c 含量2.3mg ，每100g 绿豆芽中维生素c 含量1.2mg 结果讨论：资料显示，100g 绿豆芽VC 含量为6.0mg ，100g 黄豆芽VC 含量为8.0mg 。
与测出的数据有出入。
原因有以下这些：①、绿豆芽和黄豆芽不新鲜，导致水分流失，从而使VC 流失，使数据偏小 ②、豆中含有部分VC 使因没有碾磨完全导致残留渣中含有VC ，使数据偏小 ③、草酸于碾磨之后才加，碾磨过程中有部分液体溅出使VC 流失数据偏小 ④、碾钵中有残留的VC 使测出的数据偏小。
南京大学生化实验一：总糖和还原糖含量的测定
总糖和还原糖含量的测定实验报告实验目的:植物体内的还原糖，主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。
它们在植物体内的分布，不仅反映植物体内碳水化合物的运转情况，而且也是呼吸作用的基质。
还原糖还能形成其他物质如有机酸等。
此外，水果蔬菜中糖量的多少，也是坚定其品质的重要指标。
还原糖在有机体的代谢中起着重要的作用，其他碳水化合物，如淀粉蔗糖等，经水解也生成还原糖。
通过本实验，掌握还原糖定量测定的基本原理，练习比色定糖法的基本操作，热悉分光光度计的使用方法。
实验原理：1.还原糖还原糖是具有还原性的糖类的统称。
分子中含有游离醛基或者酮基的单糖和含有游离醛基的二糖都具有还原性。
如葡糖糖、果糖、半乳糖、乳糖、阿拉伯糖、麦芽糖等。
2.美拉德反应美拉德反应广泛分布于食品工业中的非酶褐变反应：还原糖与氨基酸/蛋白质在加热时发生的一系列复杂反应，生成棕/黑色的大分子物质，同时还产生具有不同气味的中间体分子，包括还原酮、醛和杂环化合物，为食物提供诱人可口的风味和诱人的色泽。
3.还原糖的测定方法：3,5-二硝基水杨酸法在波长540nm下，一定浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，可利用标准曲线法测定样品中的还原糖含量。
利用多糖能被酸水解为单糖的性质可以通过测定水解后的单糖含量来对总糖进行测定。
mbert-Beer定律A=lg(I0/I)=lg（1/T）=KClA：吸光度I0：入射光强度I：透射光强度T：透光度（透射比）K：比例常数l：溶液厚度实验仪器，试剂与材料：1.实验仪器：UV2600紫外可见分光光度计2.实验试剂：（1）1.0mg/ml标准葡萄糖（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS试剂）（3）6mol/L HCl（张茜配置）（4）6mol/L NaOH（张茜配置）（5）碘-碘化钾溶液3.实验材料：市售面粉。
实验步骤：1.还原糖的提取准确称取0.20g面粉，加蒸馏水约3ml，在研钵中磨成匀浆。
，转入三角烧瓶中，用约30ml蒸馏水冲洗研钵2~3次，洗出液也转入三角烧瓶中。
果蔬中还原糖与总糖的测定
果蔬中还原糖与总糖的测定果蔬中总糖及还原糖含量的测定一、实验目的1、掌握总糖和还原糖含量的测定方法。
2、学习分光光度计的原理和操作方法。
3、了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理。
二、实验原理总糖是指样品中的还原单糖，在本实验条件下可水解为还原单糖的蔗糖和麦芽糖，以及可部分水解为葡萄糖的淀粉。
多糖为非还原糖，可用酸将没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖，再利用还原糖的性质进行测定，这样就可分别求出总糖和还原糖的含量。
糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糖醛，生成的糖醛或羟甲基糖醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糖醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比。
糖类与蒽酮反应生成的有色物质，在可见光区的吸收峰为630nm，可在此波长下进行比色，故可用于糖的定量。
三、实验器材1、材料：梨2.仪器：分光光度计、恒温水浴、电子分析天平、高速冷冻离心机、容量瓶（100ml）×2）玻璃漏斗、量筒、灰浆、锥形瓶、试管、移液管、pH试纸3。
试剂：蒽酮试剂：取2g蒽酮溶于1000ml体积分数为80%的硫酸中，当日配制使用。
标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）：称取100mg葡萄糖，溶于蒸馏水并稀释至1000ml（可加几滴甲苯作防腐剂）。
6mol/lhcl溶液20%氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠固体，溶于蒸馏水中，稀释至100ml。
4、实验操作1、葡萄糖标准曲线的绘制：取6根大试管，从0到5编号，按下表加入每种试剂试剂管号标准葡萄糖溶液/ml蒸馏水/ml蒽酮试剂/mla620nm01.04.00.10.94.00.20.84.00.30.74.00.40.64.00.50.54.0012345置冰水浴中5min煮沸10min，冷却后室温放置10min，在620nm处比色以吸光度为纵坐标，各标准液浓度（mg/ml）为横坐标做图得标准曲线。
2、样品中还原糖的提取和测定称取1g梨，加入约3ml蒸馏水，在研钵中研磨成匀浆，移入三角瓶中，用约12ml蒸馏水冲洗研钵2~3次，将洗涤液移入三角瓶中。
还原糖和总糖的测定
1.样品中还原糖的提取：称取 5g 左右的平菇，用碾碎装置碾碎，再用研钵研磨，将渣和 汁全部转移到 100ml 的三角瓶中，用水冲洗碾碎装置和研钵，所得液体并入三角瓶中，置于 500C 的恒温水浴中保温 30min， 使还原糖浸出。 10000rpm 离心 2min。 将液体全部转入 100ml 的容量瓶中，用蒸馏水洗涤三角瓶，并转入容量瓶中定容。得到还原糖的待测液。 2. 显色：取三支具有 25ml 刻度的试管，编号，按下表所示的量，精确加入待测液和试 剂。 将各管摇匀， 在沸水浴中加热 5min， 取出冷却到室温， 以蒸馏水定容至 25ml， 混匀后， 在 540nm 波长下，测定各管的消光值。
1
还原糖的测定---3,5-二硝基水杨酸比色法
标准曲线测定结果：
管号 1 0 0 2 10 0.087 3 20 0.263 4 30 0430 5 40 0.598 6 60 0.752 7 80 0.883
葡萄糖含量 （ug） OD 值
葡萄糖标准曲线表
1 0.8 0.6 OD值 0.4 0.2 0 0 -0.2 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 葡萄糖mg y = 0.770x - 0.031 R² = 0.995
管号 还原糖测定液（ml） 蒸馏水（ml） 3,5-二硝基水杨酸试剂（ml） 参比管 0 0 2 1.5 还原糖测定管号 1 2 0 1.5 2 2 0 1.5
还原糖% =
查曲线所得含糖 mg 数 × （提取液总体积/测定时取用体积） 样品 mg 数
× 100
2
总糖的测定----3,5-二硝基水杨酸比色法
1.样品中总糖的提取：称取 5g 左右的平菇，先用碾碎装置碾碎，再用研钵研磨，将渣和
汁全部转移到 100ml 的三角瓶中，用水冲洗碾碎装置和研钵，所得液体并入三角瓶中，加入 20ml 6mol/L 的 HCl 及 30ml 的蒸馏水， 置于沸水浴中保温 1h。 待三角瓶中的水解液冷却后， 用 PH 试纸检测， 以 6mol/L NaOH 中和至中性。 10000rpm 离心 2min。 将液体全部转入 250ml 的容量瓶中，用蒸馏水洗涤三角瓶，并转入容量瓶中定容。得到总糖的待测液。 2.显色： 取三支具有 25ml 刻度的试管， 编号， 按下表所示的量， 精确加入待测液和试剂。 将各管摇匀，在沸水浴中加热 5min，取出冷却到室温，以蒸馏水定容至 25ml，混匀后，在 540nm 波长下，测定各管的消光值。
还原糖和总糖含量的测定(3,5 一二硝基水杨酸比色法)
还原糖和总糖含量的测定（3，5 一二硝基水杨酸比色法）还原糖和总糖含量的测定（3，5一二硝基水杨酸比色法）还原糖和总糖含量的测定（3，5一二硝基水杨酸比色法）作者：佚名文章来源：生物化学实验技术点击数：2132更新时间：2021-5-1311:29:24一、目的植物体内的还原成糖，主要就是葡萄糖、果糖和麦芽糖。
它们在植物体内的原产，不仅充分反映植物体内碳水化合物的运转情况，而且也就是呼吸作用的基质。
还原成糖还能够构成其他物质例如有机酸等。
此外，水果蔬菜中糖量的多少，也就是始终如一其品质的关键指标。
还原成糖在有机体的新陈代谢中起至着关键的促进作用，其他碳水化合物，例如淀粉蔗糖等，经水解也分解成还原成糖。
通过本实验，掌控还原成糖定量测定的基本原理，练比色定糖法的基本操作，热悉分光光度计的采用方法。
二、原理各种单糖和麦芽糖就是还原成糖，蔗糖和淀粉不为还原成糖。
利用溶解度相同，可以植物样品中的单糖、双糖和多糖分别抽取出，再用酸水解法并使没还原性的双糖和多糖全盘水解班莱班县还原性的单糖。
在碱性条件下，还原糖与3，5一二硝基水杨酸共热，3，5一二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质），还原成糖则被水解成糖酸及其他产物。
一定范围内，还原成糖的量与棕红色物质颜色厚薄的程度成一定的比例关系，540nm波长下测量棕红色物质的消光值，收信标准曲线并排序，便可以分别谋出来样品中还原成糖和总糖的含量。
三、仪器、试剂和材料1.仪器（1）刻度试管：25mlx11（2）离心管或玻璃圆柱形x2（3）烧杯：1oomlx1（4）三角瓶：100m1x1（5）容量瓶：100mlx3（6）刻度液体：1mlx1，2m1x4,10mlx1（7）恒温水浴（8）沸水浴（9）离心机（过滤法不用此设备）（10）电子顶载天平（11）分光光度计2.试剂（1）1mg/ml葡萄糖标准液：准确称取100mg分析纯葡萄糖（预先在80℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100ml的容量瓶中，以馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。
食品中总糖、还原糖的测定
食品中转化糖（总糖）、还原糖的测定1安全性评估谨防试剂灼伤：加入碱性酒石酸铜甲乙液、20%氢氧化钠和2%盐酸试剂时，需佩戴一次性乳胶手套。
谨防玻璃割伤：使用前检查玻璃仪器外观完好无损，使用时注意轻拿轻放，清洗时，需佩戴防割手套。
谨防高温烫伤：滴定时，调节滴定管滴定速度的手需佩戴涂脂手套/一次性乳胶手套，且不裸露手腕皮肤，双手不碰及电陶炉表面。
2 目的规范食品中转化糖（总糖）、还原糖的检测流程，确保检测结果的准确性。
3 范围适用于各类食品中转化糖（总糖）、还原糖的测定。
4 依据参照GB 5009.7 - 2016食品安全国家标准食品中还原糖的测定、GB 5009.8 - 2016食品安全国家标准食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定。
5 检测原理还原糖（直接滴定法）：试样经除去蛋白质后，在加热条件下，以亚甲基蓝作指示剂，滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液（用葡萄糖标准溶液标定），根据样品液消耗体积计算还原糖含量。
转化糖（总糖）（酸水解-莱茵-埃农氏法）：试样经除去蛋白质后，其中蔗糖经盐酸水解转化为还原糖，再按还原糖测定，根据样品液消耗体积计算转化糖（总糖）含量。
注：①为消除氧化亚铜沉淀对滴定终点观察的干扰，在碱性酒石酸铜乙液中加入少量亚铁氰化钾，使之与Cu2O生成可溶性的无色络合物，而不再析出红色沉淀，其反应如下：Cu2O↓+K4Fe(CN)6+H2O=K2Cu2Fe(CN)6+2KOH②碱性酒石酸铜甲液和乙液应分别贮存，用时才混合，否则酒石酸钾钠铜络合物长期在碱性条件下会慢慢分解析出氧化亚铜沉淀，使试剂有效浓度降低。
6 试剂和仪器：实验室三级用水6.1 试剂2 %盐酸溶液，20 %氢氧化钠溶液，碱性酒石酸铜溶液：碱性酒石酸铜甲液（以下简称A 液）（硫酸铜+亚甲基蓝）+碱性酒石酸铜乙液（以下简称B液）（酒石酸钾钠+氢氧化钠+亚铁氰化钾），乙酸锌溶液（219 g/L），亚铁氰化钾溶液（106 g/L），葡萄糖标准溶液。
生化实验论文——柚子和桔子营养成分的分析
柚子和桔子营养成分的分析摘要：果蔬中含有多种营养成分，而且每种成分在不同的果蔬中的含量是不同的。
本综合实验通过对不同品种的柚子和桔子的维生素C、还原糖、总糖、蛋白质以及过氧化物酶的成分的分析，并对各成分进行了比较，得出了一些结论。
所采用的方法有：2,6—二氯酚靛酚滴定法、蒽酮比色法、考马斯亮蓝法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法。
实验结果表明, 两种柚子的Vc含量都较高，而金丝蜜柚的还原糖含量比红肉蜜柚高，说明金丝蜜柚比红肉蜜柚甜。
柚子中只有一种过氧化物酶，而桔子因为去皮后在空气中存放了太长时间，使酶分解。
关键词：营养成分；综合实验；维生素C；还原糖；总糖；蛋白质前言：果蔬中有维生素C、糖类、蛋白质等多种营养物质，如柚肉中含有非常丰富的维生素C以及类胰岛素等成分，有降血糖、降血脂、健胃、润肺、补血、清肠、利便等功效，还可促进伤口愈合，对败血症等有良好的辅助疗效。
本实验通过对柚子和桔子营养成分的分析，学习设计一个实验的基本思路，掌握各个实验的基本原理和综合分析果蔬成分的方法。
实验原理1．维生素C含量的测定还原型维生素C可被氧化型2，6-二氯酚靛酚（下面简称染料）所氧化，成为氧化型维生素C。
氧化型染料在中性或碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。
成为还原型后为无色。
用氧化型染料来滴定还原型维生素C，当滴至全部还原型维生素C被氧化后，在稍滴一点呈微红色为终点。
滴定用去染料量与样品中还原型维生素C 量成正比。
2．还原糖和总糖含量的测定蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。
糖类在较高温度下可被硫酸脱水成糠醛或糠醛衍生物，再与蒽酮缩合成蓝色化合物，在620nm处有最大吸收。
多糖为非还原糖，可用酸将没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖，再利用还原糖的性质进行测定，这样就可分别求出总糖和还原糖的含量。
3．蛋白质含量的测定考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质-染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。
3.果蔬成分分析
果蔬成分生化分析温州大学生命与环境科学学院XXX：xxxx指导老师：xxxx摘要：果蔬中营养成分多种多样，本实验以盘菜，萝卜，豆芽梨子等为研究对象，对其主要营养成分（维生素C含量、总糖及还原糖含量、蛋白质含量）测定与其过氧化物酶分析都运用了比色法，并对测得数据列图表，进行对比研究。
结果表明：新疆苹果中的主要营养成分相对于宁夏苹果含量高，但其过氧化物酶活性低于宁夏苹果，这说明其酚类物质代谢能力低于宁夏苹果。
总的来说，新疆苹果与宁夏苹果营养价值都高，但新疆苹果相对于宁夏苹果营养。
关键词：主要营养成分；过氧化物酶1.前言：蔬菜，是指可以做菜、烹饪成为食品的，除了粮食以外的其他植物（多属于草本植物）。
蔬菜是人们日常饮食中必不可少的食物之一。
蔬菜可提供人体所必需的多种维生素和矿物质。
据国际粮农组织1990年统计，人体必需的维生素C的90%、维生素A的60%来自蔬菜。
此外，蔬菜中还有多种多样的植物化学物质，是人们公认的对健康有效的成分，如：类胡萝卜素、二丙烯化合物、甲基硫化合物等。
目前果蔬中的营养素可以有效预防慢性、退行性疾病的多种物质正在被人们研究发现。
蔬菜中含有多种营养成分，其主要要营养特点如下：1）水分—新鲜蔬菜的含水量在90％以上，它是蔬菜鲜嫩程度的标志。
2）维生素—绿色、橙色蔬菜中含有较多的胡萝卜素、维生素c、核黄素及叶酸。
3）无机盐—蔬菜是无机盐的重要来源。
绿色蔬菜含量最为丰富。
4）食物纤维—各种蔬菜都含有，它有促进肠道蠕动、降低胆固醇和改善糖代谢等作用。
水果是指多汁且有甜味的植物果实，不但含有丰富的营养且能够帮助消化。
是对部分可以食用的植物果实和种子的统称。
水果类的营养价值近似蔬菜，但所含无机盐和维生素不及蔬菜，其特点为：1）各种鲜水果都含有维生素c，因其多生吃，故损失较少。
2）水果中的纤维素、果胶是天然的缓泻剂。
3）水果具有芬芳的果味，鲜艳的色彩能促进食欲。
4）水果含有较多的钠、钾、镁等元素，合成碱性食物。
实验2 还原糖及总糖的测定
基础生物化学实验-实验2 还原糖及总糖的测定实验2 还原糖及总糖的测定（3、5——二硝水杨酸比色法）目的和要求：掌握3、5-二硝基水杨酸比色法测定糖量的原理及方法。
熟悉722分光光度计基本工作原理和操作方法。
原理：各种单糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，再用酸水解法使没有还原性的双糖和多糖彻底水解成有还原性的单糖。
在碱性条件下，还原糖与3、5—二硝基水杨酸共热，3、5—二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其它物质。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，可在722型分光光度计540nm波长测定棕红色物质的消光值。
查标准曲线计算，便可分别求出样品中还原糖和总糖的含量。
多糖水解时，在单糖残基上加了一分子水，因而在计算中须扣除已加入的水量，测得所得到的总糖量乘以0.9即为实际的总糖量。
该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰较少。
试剂和材料：试剂（1）1mg/ml葡萄糖标准液：准确称取100ml分析纯葡萄糖（预先在105℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100ml容量瓶中，以蒸馏水定容到刻度，摇匀，冰箱中保存备用。
（2）3、5—二硝基水杨酸试剂（又称DNS试剂）；甲液——溶解6.9g结晶酚（苯酚）于15.2ml 10%NaOH中，并稀释至69ml，在此溶液中加入6.9g 亚硫酸氢钠。
乙液——称取22.5g酒石酸钾钠，加到300ml 10% NaOH中，再加入880ml 1%的3、5—二硝基水杨酸溶液。
将甲液和乙液相混合即得黄色试剂，贮于棕色试剂瓶中，放置7—10天使用。
（3）碘—碘化钾溶液（碘试剂）：称取5g碘和10g碘化钾，研匀后溶于100ml蒸馏水中。
（4）酚酞指示剂：称取0.1g酚酞溶于70%乙醇中。
（5）6 mol·L-1 HCl（6）6 mol·L-1NaOH（7）面粉2、器材大试管、大离心管、量筒、三角瓶、容量瓶、刻度吸管、玻璃漏斗、滤纸、白瓷板、电热恒温水浴槽、低速台式离心机、天平、722型分光光度计。
南京大学生化实验一：总糖和还原糖含量的测定
总糖和还原糖含量的测定实验报告实验目的:植物体的还原糖，主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。
它们在植物体的分布，不仅反映植物体碳水化合物的运转情况，而且也是呼吸作用的基质。
还原糖还能形成其他物质如有机酸等。
此外，水果蔬菜中糖量的多少，也是坚定其品质的重要指标。
还原糖在有机体的代中起着重要的作用，其他碳水化合物，如淀粉蔗糖等，经水解也生成还原糖。
通过本实验，掌握还原糖定量测定的基本原理，练习比色定糖法的基本操作，热悉分光光度计的使用方法。
实验原理：1.还原糖还原糖是具有还原性的糖类的统称。
分子中含有游离醛基或者酮基的单糖和含有游离醛基的二糖都具有还原性。
如葡糖糖、果糖、半乳糖、乳糖、阿拉伯糖、麦芽糖等。
2.美拉德反应美拉德反应广泛分布于食品工业中的非酶褐变反应：还原糖与氨基酸/蛋白质在加热时发生的一系列复杂反应，生成棕/黑色的大分子物质，同时还产生具有不同气味的中间体分子，包括还原酮、醛和杂环化合物，为食物提供诱人可口的风味和诱人的色泽。
3.还原糖的测定方法：3,5-二硝基水酸法在波长540nm下，一定浓度围，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，可利用标准曲线法测定样品中的还原糖含量。
利用多糖能被酸水解为单糖的性质可以通过测定水解后的单糖含量来对总糖进行测定。
mbert-Beer定律A=lg(I 0/I)=lg（1/T）=KClA：吸光度I0：入射光强度I：透射光强度T：透光度（透射比）K：比例常数l：溶液厚度实验仪器，试剂与材料：1.实验仪器：UV2600紫外可见分光光度计2.实验试剂：（1）1.0mg/ml标准葡萄糖（2）3,5-二硝基水酸（DNS试剂）（3）6mol/L HCl（茜配置）（4）6mol/L NaOH（茜配置）（5）碘-碘化钾溶液3.实验材料：市售面粉。
实验步骤：1.还原糖的提取准确称取0.20g面粉，加蒸馏水约3ml，在研钵中磨成匀浆。
，转入三角烧瓶中，用约30ml蒸馏水冲洗研钵2~3次，洗出液也转入三角烧瓶中。
还原糖和总糖的测定实验报告
还原糖和总糖的测定实验报告一、实验目的1、掌握还原糖和总糖的测定原理和方法。
2、学会使用分光光度计进行定量分析。
3、熟悉实验操作过程，提高实验技能和数据处理能力。
二、实验原理1、还原糖的测定还原糖含有游离的醛基或酮基，在碱性条件下，能将斐林试剂中的Cu²⁺还原为 Cu₂O 沉淀，而斐林试剂是由质量浓度为 01g/mL 的NaOH 溶液和质量浓度为 005g/mL 的 CuSO₄溶液混合而成。
产生的Cu₂O 沉淀的量与还原糖的含量成正比。
通过用标准葡萄糖溶液标定斐林试剂，再用标定后的斐林试剂测定样品中的还原糖含量。
2、总糖的测定总糖包括还原糖和非还原糖。
先将非还原糖通过酸水解的方法转化为还原糖，再用斐林试剂法测定总糖含量。
水解后测定的总还原糖量减去水解前样品中还原糖的含量，即可得到样品中非还原糖的含量。
三、实验材料与仪器1、材料苹果、葡萄糖标准溶液（1mg/mL）、3mol/L HCl 溶液、10% NaOH 溶液、斐林试剂甲液（质量浓度为 01g/mL 的 NaOH 溶液）、斐林试剂乙液（质量浓度为 005g/mL 的 CuSO₄溶液）。
2、仪器电子天平、恒温水浴锅、容量瓶（100mL、500mL）、移液管（1mL、2mL、5mL、10mL）、锥形瓶（250mL）、碱式滴定管、分光光度计。
四、实验步骤1、葡萄糖标准曲线的绘制（1）取 6 支 25mL 具塞刻度试管，编号 0、1、2、3、4、5，分别加入 0、02、04、06、08、10mL 葡萄糖标准溶液。
（2）向各试管中分别加入蒸馏水，使总体积均为 10mL。
（3）在各试管中分别加入 2mL 斐林试剂甲液，摇匀，再加入 2mL 斐林试剂乙液，摇匀。
（4）将试管置于沸水浴中加热 2min，取出后用流水冷却至室温。
（5）以 0 号试管为空白对照，在 590nm 波长下，用分光光度计测定各试管中溶液的吸光度值。
（6）以葡萄糖含量（mg）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
食品中的还原糖、非还原糖、总糖测定
食品中可溶性糖类通常是指葡萄糖、果糖等游 离单糖及蔗糖等低聚糖。一般须将样品磨碎、 浸渍成溶液（提取液），经过滤后再测定
还原糖的测定——高锰酸钾法（费林试液法）
○ 还原糖+Cu2+→Cu2O↓
Cu2O +Fe3++H+→Cu2++ Fe2+
Fe2++KMnO4 → Fe3++Mn2+
○ 其过程：提取液的制备→氧化→过滤→ ○ 溶解→滴定→空白试验→计算。 ○ （计算得 Cu2O量查表→ 还原糖量）
适用范围及特 点
本法又称快速法，它是在蓝一爱农容量法
基础上发展起来的，其特点是试剂用量少，
1
操作和计算都比较简便、快速，滴定终点
明显。
本法是国家标准分析
3
方法。
适用于各类食品中还原糖的测定。但 测定酱油、深色果汁等样品时，因色 素干扰，滴定终点常常模糊不清，影 响准确性。
2
三、淀粉测定
04
旋光法
高锰酸钾标准溶液：0.1mol/L。
01
氢氧化钠溶液：1 mol/L。
02
酸性硫酸铁溶液：称取50g硫酸铁，加入200mL水溶解后，慢慢加
03
入100mL硫酸，冷却后加水稀释至1000mL。
盐酸：3 mol/L。
04
仪器
25mL古氏坩埚 或G4垂融坩埚
真空泵或水泵。
循环水式多用 真空泵
样品 处理
碱性酒石酸铜 溶液的标定
样品处理
准确吸取碱性酒石酸铜甲液和乙液各5.0mL，置于250mL锥形瓶 中，加水10mL，加入玻璃珠2粒。从滴定管中加约9mL葡萄糖标 准溶液，加热使其在2min内加热至沸，趁热以每2s 1滴的速度 继续用葡萄糖标准溶液滴定，直至蓝色刚好退去为终点。记录 消耗葡萄糖标准溶液的体积。平行操作三次取其平均值。
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果蔬中总糖及还原糖含量的测定
一、实验目的
1、掌握总糖和还原糖含量的测定方法。
2、学习分光光度计的原理和操作方法。
3、了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理。
二、实验原理
总糖是指样品中的还原单糖及在本实验条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解成葡萄糖的淀粉。
多糖为非还原糖，可用酸将没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖，再利用还原糖的性质进行测定，这样就可分别求出总糖和还原糖的含量。
糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糖醛，生成的糖醛或羟甲基糖醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糖醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比。
糖类与蒽酮反应生成的有色物质，在可见光区的吸收峰为630nm，可在此波长下进行比色，故可用于糖的定量。
三、实验器材
1、材料：梨
2、仪器：分光光度计、恒温水浴锅、电子分析天平、高速冷冻离心机、容量瓶（100mL×2）、玻璃漏斗、量筒、研钵、锥形瓶、试管、移液管、pH试纸
3、试剂：
蒽酮试剂：取2g蒽酮溶于1000mL体积分数为80%的硫酸中，当日配制使用。
标准葡萄糖溶液（0.1mg/mL）：称取100mg葡萄糖，溶于蒸馏水并稀释至1000mL（可加几滴甲苯作防腐剂）。
6mol/L HCl溶液
20% NaOH溶液：称取20g NaOH固体，溶于蒸馏水并稀释至100mL。
四、实验操作
1、葡萄糖标准曲线的绘制：
取6 支大试管，从0 ～ 5 分别编号，按下表加入各试剂
以吸光度为纵坐标，各标准液浓度（mg/mL ）为横坐标做图得标准曲线。
2、样品中还原糖的提取和测定
称取1g 梨，加蒸馏水约3mL ，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约12mL 蒸馏水冲洗研钵2～3次，洗出液也转入三角烧瓶中。
于50℃水浴中保温约30min （使还原糖浸出），取出置于离心管内，5000r/min 离心10min ，冷却后定容至100mL 。
吸取1mL 滤液置于试管中，浸于冰浴中冷却，再加入4mL 蒽酮试剂，沸水浴中煮沸10min ，取出冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同。
测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。
3、样品中总糖的提取、水解和测定
称取1g 梨，加蒸馏水水约3mL ，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约12mL 蒸馏水冲洗研钵2～3次，洗出液也转入三角烧瓶中。
再向三角烧瓶中加入6mol/L 盐酸10mL ，搅拌均匀后在沸水浴中水解30min ，冷却后用20%NaOH 溶液中和至pH 呈中性，取出置于离心管内，5000r/min 离心10min ，然后用蒸馏水定容至100mL 。
吸取1mL 滤液置于试管中，浸于冰浴中冷却，再加入4mL 蒽酮试剂，沸水浴中煮沸10min ，取出冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同。
测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。
六、计算
按照下列公式分别计算果蔬中还原糖和总糖的质量分数（w ）。
W(还原糖)= %1001
1⨯m V C
W(总糖)= %1009.02
2⨯⨯m
V C
（乘0.9是为了从测定出的总糖水解成的单糖中扣除水解时所消耗的水量。
） 其中： W （还原糖）：还原糖质量分数（%） W （总糖）：总糖质量分数（%） C1：还原糖的质量浓度（mg/mL ） C2：水解后还原糖的质量浓度（mg/mL ） V1：样品中还原糖提取液的体积（mL ） V2：样品中总糖提取液的体积（mL ） m ：样品质量 五、实验思考
1、应用蒽酮法测得的可溶性糖包括哪些？
2、干扰可溶性糖测定的主要因素有哪些？怎样避免？
3、了解可溶性糖含量在植物生理研究和实际上有什么意义？。