经典液相色谱法 ppt课件

约为柱高的四分之三处，而后将氧化铝通过一粗颈玻璃
漏斗慢慢倒入并轻轻敲击柱身。此法较简便。
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（2）加样：把要分离的试样配制成适当浓度 的溶液。将氧化铝上多余的溶剂放出，直 到柱内液体表面到达氧化铝表面时，停止 放出溶剂。沿管壁加入试样溶液，注意不 要使溶液把氧化铝冲松浮起，试样溶液加 完后，开启下端旋塞，使液体渐渐放出， 至溶剂液面和氧化铝表面相齐（勿使氧化 铝表面干燥）即可用溶剂洗脱。
湿法装柱：是将备用的溶剂装入管内，约为柱高的四分 之三，而后将氧化铝和溶剂调成糊状，慢慢地倒入管中。 此时应将管的下端旋塞打开。
干法装柱：是在管的上端放一干燥漏斗，使氧化铝均匀
地经干燥漏斗成一细流慢慢装入管中，中间不应间断，
时时轻轻敲打柱身，使装填均匀，全部加入后，再加入
溶剂，使氧化铝全部润湿。另外也可先wenku.baidu.com溶剂加入管内，
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（一）概述
1．定义：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上， 形成薄层而进行色谱分离和分析的方法
2．操作过程： 铺3．板分→离活机化制→：点吸样附→（分展配开，→离定子位交(定换性，)/空洗脱间(排定阻量）) 4．特点：分析快速、灵敏、显色方便 5．应用：药物杂质检查、纯度测定
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（3）洗脱和分离：在洗脱和分离的过程中， 应当注意：
①不断加入洗脱剂，并保持一定高度的液 面，在整个操作中勿使氧化铝表面的溶液 流干，一旦流干，再加溶剂，易使氧化铝 柱产生气泡和裂缝，ppt课影件 响分离效果。 10
②收集洗脱液，如试样各组分有
颜色，在氧化铝柱上可直接观察。
洗脱后分别收集各个组分。在多数
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（二）分类
柱色谱（柱上层析）常用的有吸附柱色谱和分配柱色谱两类。吸附柱色 谱常用氧化铝和硅胶作固定相。在分配柱色谱中以硅胶、硅藻土和纤 维素作为支持剂，以吸收较大量的液体作固定相，而支持剂本身不起 分离作用。
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（三）操作步骤
（ 1 ）装柱：取清洁、干燥色谱柱，在玻璃管底铺一层 玻璃棉或脱脂棉，轻轻塞紧，再在玻璃棉上盖一层厚约 0.5cm 厚 的 石 英 砂 （ 或 用 一 张 比 柱 直 径 略 小 的 滤 纸 代 替），而后将氧化铝装入管内（湿法或干法）。
有效成分分离、中药定性鉴别等
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精品资料
• 你怎么称呼老师？ • 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你
是否会认为老师的教学方法需要改进？ • 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭 • “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我
笨，没有学问无颜见爹娘 ……” • “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
间过长，发生变化。
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第三节 平面色谱法的分类和参数
分类 薄层色谱法TLC： 吸附薄层色谱法 分配薄层色谱法 纸色谱法PC:分配色谱法
平面色谱参数 定性参数——比移值Rf 相平衡参数——K、k 分离参数——分离度R
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1、定性参数
比移值(Rf值)
溶质移动距离与展开剂移动距离之比
经典液相色谱法
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第一节 概述
定义：经典液相色谱法是在常温、常压下依靠重力
和毛细管作用输送流动相的色谱方法。 缺点： 固定相颗粒较大且不均匀
常压下输送流动相 离线检测、分析周期长 优点： 仪器设备简单，费用低 对样品预处理要求不高 可同时分析多个样品 应用：➢ 产品纯度控制、杂质检查、天然药物
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（二）吸附剂的选择 根据被测物极性和吸附剂的吸附能力 被测物极性强——弱极性吸附剂 被测物极性弱——强极性吸附剂
分类 经典液相色谱法
分离原理
操作形式
吸附色谱法
分配色谱法
离子交换色谱法
分子排阻色谱法
聚酰胺色谱法等
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柱色谱法 薄层色谱法 纸色谱法
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第二节 柱色谱法
（一）分离原理 （二）分类 （三）操作步骤
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（一）分离原理
利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不 同或其它亲和作用性能的差异，使混合物的溶液流经该种物质，进行 反复的吸附或分配等作用，从而将组分分开。流动的混合物称为流动 相，固定的物质称为固定相。
展开剂极性↑大，Rf↑大（容易洗脱）
展开剂极性↓小，Rf↓小 （不容易洗脱）
3）Rf范围：0< Rf <1
Rf=0，K无穷大，组分在原点不动
Rf=1，K=0，组分斑点至溶剂前沿
Rf = 0.2——0.8（常用）
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➢影响比移值的因素
1）被分离物质的结构和性质 2）薄层板的性质 3）展开剂的极性 4）温度 5）展开槽内的展开剂蒸气饱和程度
Rf 1 1 k
或 k 1Rf Rf
K, Rf
✓ 讨论
Rf 与 K 有 关 ， 即 与 组 分 性 质 （ 极 性 ） 以 及 吸 附 剂 和展开剂的性质有关；色谱条件一定，Rf只与组分 性质有关，是薄层色谱基本定性参数，说明组分的 色谱保留行为
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续前
1）K↑大，Rf↓小 2）薄层板一定，对于极性组分
情况下，化合物没有颜色，收集洗
脱液时，多采用等份收集，每份洗
脱剂的体积随所用氧化铝的量及试
样的分离情况而定。
③控制洗脱液的流出速度，一般
不宜太快，太快了柱中交换来不及
达到平衡，因而影响分离效果。
④由于氧化铝表面活性较大，有
时可能促使某些成分破坏，所以应
尽量在一定时间内完成一个柱色谱
的分离，以免试样在柱上停留的时
Rf =L/L0 （定时展开）
L为原点（origin）至斑点中心（质量 重心）的距离
L0为原点至溶剂前沿（solvent front） 的距离
——类似保留时间（定距展开）
与组分及色谱条件有关
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2、相平衡参数
分配系数K= Cs/Cm
容量因子 k= CsVs/CmVm
K、R kf与Rf值的1关系： Vm 1KsV/Vm VmKsV
➢ 重现性差，多用于定ppt课性件
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3、分离参数——分离度
分离度（R）
两相邻斑点中心距离与 两斑点平均宽度（纵向 直径）的比值
2d R
W1 W2
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第四节、薄层色谱法 (thin layer chromatography；TLC)
（一）概述 （二）吸附剂的选择 （三）展开剂的选择 （四）薄层板的制备 （五）定性与定量分析