血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳
血清结合珠蛋白醋酸纤维薄膜电泳标准操作程序
血清结合珠蛋白醋酸纤维薄膜电泳标准操作程序1 目的规范血清结合珠蛋白醋酸纤维薄膜电泳的操作程序，以保证临床检测结果的准确性。
2 检测方法和原理检测方法为醋酸纤维薄膜电泳。
原理是：结合珠蛋白（Hp）与血红蛋白（Hb）以一定的比率（约 1:1）形成 Hb-Hp 络合物的泳速快于 Hb-A，故以一定比例的血清加入已知浓度的 Hb 溶血液通过电泳分离，直接洗脱。
洗脱液中的血红蛋白具有过氧化物酶活性，它催化过氧化氢对联苯胺的氧化作用，在酸性环境中生成红色醌类化合物。
用分光光度计测定被 Hp 结合的 Hb 量，以 1L 血清中所含的 Hp全部被 Hb 结合所需的 Hb 克数作为Hp的含量值，一般以 g/L 含量表示。
3 原始样品要求血清。
4 容器和添加剂类型黄色胶头促凝试管，有促凝剂。
抽取静脉血 2~3ml 置黄头试管内送检。
血清样本 2~8℃可稳定 1 周。
如果需要延长保存样品时间，需将样品保存在-20℃条件下。
5 试剂和设备5.1 试剂：5.1.1 TBE 缓冲液（pH9.0）：三羟基氨基甲烷 2.02g，乙二胺四乙酸 0.2g，硼酸 0.15g，蒸馏水加至 100ml。
5.1.2 巴比妥缓冲液（pH8.6）：巴比妥钠 10.3g，巴比妥 1.84g，蒸馏水加至1000ml。
5.1.3 1g/dl 联苯胺冰醋酸溶液：联苯胺 1g，冰醋酸 20ml，加蒸馏水至 100ml。
5.1.4 0.5g/dl 氨基黑 10B 染色液：氨基黑 10B 0.5g，甲醇 50ml，冰醋酸 10ml，蒸馏水 40ml。
5.1.5 氨基黑 10B 染色漂洗液：乙醇 45ml，冰醋酸 5ml，蒸馏水 50ml。
5.2 试剂保存与有效期：新购试剂保存于室温，勿冷冻，在有效期内使用。
5.3 仪器：电泳仪。
6 操作程序6.1.1 被检血清 0.1 ml ，加 3.3g/dl Hb 溶血液 0.01ml ，混匀后置于 37 C水浴 10min 。
血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验
血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验
血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验是一种常用的实验方法，用于研究血红蛋白分子的电泳行为。
本实验旨在通过制备醋酸纤维薄膜，并在其上进行血红蛋白电泳分析，探究血红蛋白在电场中的迁移行为。
首先，我们需要准备实验所需的材料和试剂。
主要包括醋酸纤维薄膜、血红蛋白样品、电泳缓冲液、电泳槽、电源等。
实验开始前，首先需要制备醋酸纤维薄膜。
将醋酸溶液倒入培养皿中，然后将玻璃片浸入溶液中，使其完全浸泡。
接下来，将浸泡过的玻璃片取出，放置在通风处晾干。
待玻璃片完全干燥后，即可得到醋酸纤维薄膜。
制备好醋酸纤维薄膜后，接下来是样品的准备。
将血红蛋白样品溶解在适量的电泳缓冲液中，并轻轻摇匀，使其充分溶解。
准备工作完成后，我们可以开始进行实验了。
首先，将电泳槽中注满电泳缓冲液，然后将醋酸纤维薄膜小心地放置在电泳槽中，并确保其完全覆盖电极。
接下来，取一定量的血红蛋白样品，滴在醋酸纤维薄膜上。
然后将电泳槽盖子盖好，确保样品不会受到外界干扰。
在实验过程中，需要设置合适的电压和时间参数。
一般来说，电压设置为常数值，而时间则根据实验需要进行调整。
当实验开始后，血红蛋白分子会在电场的作用下开始迁移。
实验结束后，可以观察到血红蛋白在醋酸纤维薄膜上的迁移情况。
根据迁移的位置和距离，可以分析血红蛋白分子的电泳行为，并得出相应的结论。
总之，血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验是一种简单而有效的实验方法，可以用于研究血红蛋白分子的电泳行为。
通过该实验，我们可以更深入地了解血红蛋白的性质和特点，为相关领域的研究提供有力支持。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质并定量
临床意义
血浆蛋白是血浆中最主要的固体成分，含量为60～80g/L ， 血浆蛋白是血浆中最主要的固体成分，含量为60～ 绝大部分由肝脏合成， 绝大部分由肝脏合成，仅γ球蛋白由浆细胞合成 正常值： 白蛋白57％ 72％ 正常值： 白蛋白57％—72％ α1球蛋白 α1球蛋白2％—5％ 球蛋白2 α2球蛋白 α2球蛋白4％—9％ 球蛋白4 β球蛋白6.5％—12％ 球蛋白6.5％ 12％ γ球蛋白12％—20％ 球蛋白12％ 20％
电泳影响因素
蛋白质在电场中移动的速度取决于蛋白质所 带的电荷性质、数量及质点的大小和形状； 带的电荷性质、数量及质点的大小和形状； 此外还受外界因素的影响如，电场强度、 此外还受外界因素的影响如，电场强度、溶 液的PH、离子强度及电渗等。 常见的有： 液的PH、离子强度及电渗等。 常见的有： 醋酸纤维膜电泳、 聚丙烯酰胺凝胶电泳、 醋酸纤维膜电泳、 聚丙烯酰胺凝胶电泳、 毛细管电泳
操 作
1、准备 （1）电泳仪的准备 （2）薄膜的准 备： 在薄膜无光泽面标记点样位置 将薄膜置于巴比妥缓冲液中浸泡
2、点样
（1）无光泽面朝上，吸去多余Buffer, ）无光泽面朝上，吸去多余Buffer, （2）用盖玻片蘸取少量血浆，垂直印在划线 用盖玻片蘸取少量血浆， 处。 注意：不能超出边缘；不能重复点样； 注意：不能超出边缘；不能重复点样；必须与 边缘平行要适量、均匀和垂直， 边缘平行要适量、均匀和垂直，并避免弄破薄 膜。
3、平衡： 平衡： 无光泽面朝下，点样侧位于阴极（ 无光泽面朝下，点样侧位于阴极（5min) 4、电泳： 电泳： 打开电源， 160V或 打开电源，U＝160V或I＝1.6mA t=45－50min；冬季1 t=45－50min；冬季1小时 5、染色：氨基黑10B 染色：氨基黑10B 染色充分，5－10min 染色充分， 6、漂洗： 漂洗： 3－4个漂洗皿，洗去染料至背景无色。 个漂洗皿，洗去染料至背景无色。
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量实验报告
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量实验报告一、实验目的1.学习血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的原理和方法；2.学习如何使用电泳进行蛋白质的定量分析；3.掌握实验中常见的数据处理和结果分析方法。
二、实验原理1.醋酸纤维薄膜电泳醋酸纤维薄膜电泳是一种常用的蛋白质分离方法，其原理是利用电场的作用使蛋白质在醋酸纤维薄膜上移动，分离出不同的蛋白质成分。
2.定量实验方法通过电泳分离后的蛋白质带，可以使用染色剂染色，然后利用分光光度计测定吸光度，再根据标准曲线，可以定量测定蛋白质的含量。
三、实验步骤1.制备醋酸纤维薄膜准备醋酸纤维薄膜并浸泡在0.1%凯伦派氏液中，取出后放置干燥。
2.样品制备将血清样品进行蛋白质沉淀，并将蛋白质沉淀溶解在适量的缓冲液中。
3.电泳将蛋白质样品加在醋酸纤维薄膜上，连接电泳装置，设置适当的电压和电流，进行电泳分离。
4.染色电泳结束后，取出醋酸纤维薄膜，用染色剂染色，保留足够时间以确保染色充分。
5.图像捕获与分析将染色后的薄膜放在透射式扫描电子显微镜下，捕获图像，并使用图像处理软件进行蛋白质带的分析。
6.分析数据处理根据染色后的蛋白质带的相对定量测定，绘制标准曲线并计算样品中蛋白质的浓度。
四、结果分析将标准品浓度和吸光度值录入Excel表格中，通过线性回归得到标准曲线方程。
根据电泳结果图像中的各蛋白质带的吸光度值，代入标准曲线可以得到各蛋白质的浓度。
进一步可以分析各样品中不同蛋白质的浓度和百分比。
五、实验结论本实验成功地进行了血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量实验。
通过电泳分离和染色后的薄膜图像，我们得到了各蛋白质的相对定量测定结果，并利用标准曲线计算了蛋白质的浓度。
实验结果可以用于血清蛋白质的定量分析。
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验原理
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验原理血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验原理，听起来好像很高大上的样子，其实呢，就是一个简单的实验，用来检测我们体内的蛋白质含量。
那么这个实验到底是怎么做的呢？别着急，我今天就给大家揭开这个实验的神秘面纱。
我们要准备一些东西。
这里有一个叫做琼脂糖的物质，它是一种凝胶状的东西，可以帮助我们固定样本。
还有一种叫做醋酸纤维膜的物质，它就像一张塑料纸一样，可以让我们把样本放在上面进行电泳。
最重要的是我们的样本，也就是我们体内的血液。
接下来，我们要把血液倒进一个容器里。
这时候，我们需要用到一些特殊的工具，比如说离心机。
离心机的作用就是把血液分成两部分，一部分是红色的血细胞，另一部分是白色的血浆。
这两部分分别代表了我们体内的红细胞和白细胞。
好了，现在我们已经把血液分成了两部分，接下来就要把它们放到琼脂糖上。
这时候，我们需要用到一些胶水，把琼脂糖涂在醋酸纤维膜上。
然后，我们要把血液倒在琼脂糖上，让它自然地流淌开来。
接下来，就是最有趣的部分了——电泳。
我们要把醋酸纤维膜放在一个叫做电泳仪的设备上。
这个设备会给我们的醋酸纤维膜施加一个电场，让血液中的分子按照不同的速度运动。
这样一来，我们就可以根据分子的速度来判断它们是什么成分了。
我们要看的是红细胞。
红细胞中含有大量的血红蛋白，血红蛋白是一种红色的蛋白质。
所以，红细胞在电泳的时候会跑得非常快。
通过观察红细胞的位置，我们就可以知道它们占了血液中多少的比例。
接下来，我们要看的是白细胞。
白细胞中含有大量的核糖体，核糖体是一种负责合成蛋白质的细胞器。
所以，白细胞在电泳的时候也会跑得非常快。
通过观察白细胞的位置，我们就可以知道它们占了血液中多少的比例。
我们要看的是血小板。
血小板是一种非常重要的细胞，它们可以帮助我们止血。
血小板在电泳的时候不会跑得太快，所以我们可以通过观察血小板的位置来判断它们的数量。
通过这个实验，我们就可以了解到我们体内的蛋白质含量了。
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳，是一种分析和测定蛋白质的方法。
下面将介绍一些相关的参考内容，以帮助您更深入了解这一方法。
1. 应用和原理血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳（SER-PAGE）是一种常用的蛋白质电泳分析方法，可以用于分离和检测血清蛋白及其亚类。
其原理是基于蛋白质在电场中的迁移速率与其电荷质量比有关。
在薄膜电泳中，蛋白质样品在醋酸纤维素薄膜上进行电泳分离，然后通过染色等方法进行定量或定性分析。
2. 薄膜电泳装置和操作步骤薄膜电泳装置包括电源、原电极、测电极、薄膜和样品槽。
操作步骤通常包括制备样品和电解液，加载样品和电解液到薄膜中，接通电源，进行电泳分离，然后进行染色和分析。
3. 应用领域SER-PAGE广泛应用于生物化学、生物医药和临床诊断等领域。
在生物化学中，SER-PAGE可用于研究蛋白质结构与功能的关系。
在生物医药中，SER-PAGE可用于血清蛋白分析、监测蛋白质药物的纯度和一致性。
在临床诊断中，SER-PAGE可用于检测血清中的异常蛋白质，辅助癌症、心脏和免疫系统相关疾病的诊断。
4. SER-PAGE与其他电泳方法的比较相比较传统的PAGE方法，SER-PAGE具有操作简单、不需要注入胶、迁移速度快等优点。
与SDS-PAGE相比，SER-PAGE适用于纯化量较小的样品，并且对样品中的蛋白质亚基分离效果更好。
与凝胶电泳相比，SER-PAGE不需要特殊仪器设备，成本较低。
5. 发展趋势与进展SER-PAGE作为一种传统的电泳技术，仍在不断发展和改进。
比如，一些新的薄膜材料和成像技术的引入，使得分离和检测的灵敏度得到提高。
同时，一些研究也在调整电解液组成和pH值，以优化蛋白质的分离和迁移。
总结起来，血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳是一种广泛应用于蛋白质分离和分析的方法。
通过了解其原理、操作步骤和应用领域，可以更好地理解和应用这一技术。
随着技术的不断进步和改进，SER-PAGE有望在生物化学、生物医药和临床诊断等领域发挥更大的作用。
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量实验报告
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量实验报告实验报告：血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量一、实验目的本实验旨在通过醋酸纤维薄膜电泳技术，对血清中的蛋白质进行分离和定性，同时利用扫描仪对电泳条带进行定量分析，加深对血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量的理解。
二、实验原理醋酸纤维薄膜电泳是一种常用的蛋白质分离方法，主要是利用电泳的原理将血清中的蛋白质进行分离并定性地鉴定。
其原理是基于各种蛋白质在电场中的迁移率不同，大小不同的蛋白质在电场的作用下，向正极或负极移动的速度也不同，从而将血清中的蛋白质分成不同的区带。
三、实验步骤1.准备试剂和仪器：醋酸纤维薄膜电泳试剂盒、电泳仪、醋酸纤维薄膜、玻璃板、移液器、注射器等。
2.配制试剂：按照醋酸纤维薄膜电泳试剂盒的说明书配制分离液、浓缩液和电极液等。
3.加样：将血清样品用移液器加到醋酸纤维薄膜上，控制加样量为5μL。
4.浸泡：将加好样的醋酸纤维薄膜放入分离液中浸泡10分钟，使其完全湿润。
5.电泳：将湿润的醋酸纤维薄膜放在玻璃板上，再覆盖上另一块玻璃板，然后将电泳槽装配好，接通电源进行电泳。
电泳时间和电压根据具体实验条件进行调整。
6.染色：电泳结束后，将醋酸纤维薄膜取出，放入染色液中染色10分钟，以便更好地观察蛋白质条带。
7.脱色：将染色后的醋酸纤维薄膜放入脱色液中脱色，直到背景清晰，蛋白质条带颜色较浅为止。
8.扫描定量：利用扫描仪对脱色后的醋酸纤维薄膜进行扫描，获取各蛋白质条带的OD值（吸光度），计算各蛋白质的相对含量。
四、实验结果通过醋酸纤维薄膜电泳，我们可以成功地将血清中的蛋白质分离成不同的条带。
从扫描结果中我们可以得到各条带的OD值，通过这些数据可以进一步计算出各蛋白质的相对含量。
以下是本实验的部分实验数据：OD值（吸光度）数据分析表：通过本次实验，我们成功地利用醋酸纤维薄膜电泳对血清中的蛋白质进行了分离和定性分析。
同时通过扫描定量，我们得到了各蛋白质条带的OD值以及相对含量。
修改实验四--Hb的醋酸纤维薄膜电泳与血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳
醋酸纤维素薄膜电泳，为异常血红蛋白的 筛选、诊断提供了可靠的途径和依据。
地中海贫血即是异常血红蛋白的典型病例.
血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳
一、实验目的 （Experimental Objectives）：
背景知识
电泳：指带电胶体粒子或分子在电场的作 用下，作定向移动。
由于各种物质分子的等电点不同、分
子量、分子结构不同，形状大小各有差异
，所以在同一PＨ环境中所带的电荷量各
有不同，因此在同一电场中泳动速度也就
不同。一般来说，所带的电荷多而分子量
、形状小者，泳动速度快，反之则慢。
电泳技术的分类：目前主要归纳为；
HbA
HbA2 HbF
组成
α2β2 α2δ2 α2γ2
百分含量 95~98%
2~3% <1%
pI 6.95 7.ental Principles)
在PH8.6的环境中，Hb是一种带负电 荷的蛋白质（Hb的pI 〈 8.6） ，因 此，与醋酸纤维薄膜作支持物，在电 场中Hb向阳极泳动。电泳时，由于各 种Hb所带电荷的不同，造成各自的泳 动速度不同，因而被分离。这种分离 可初步鉴定不同的Hb。
（Experimental Objectives）：
1.掌握醋酸纤维薄膜电泳的操作
2. 了解血红蛋白的组成及分类
血红蛋白（Hb) 的组成及分类：
血红蛋白（Hb)：由亚铁血红素、珠蛋白 组成 。 每个珠蛋白分子由4条多肽链构成 ，根据其一级 结构的不同可分为α、β、γ、δ四种类型。
正常成人Hb种类：
用琼脂糖凝胶作支持物进行电泳时，先将 血清用苏丹黑B（脂类染料）预染，使脂 蛋白着色，经电泳后可将血清脂蛋白分成 三条清晰的区带，可用光密度计扫描定量。
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
原理：蛋白质是两性电解质，在pH与其pI不同时，蛋白质带电，把其放在电场中，蛋白质会往其所带电的相反电极移动
步骤：1.取老师提前浸泡好的醋酸纤维薄膜一张
2.用点样器在薄膜无光泽面距顶端2CM处用点样器取血清点样
3.待血清吸入膜后，以无光泽面向下、两端紧贴在滤纸桥上，加盖，平衡3分钟，然后通电
4.电泳40分钟
5.电泳完毕后将膜取出直接浸泡在丽春红染液中15分钟，然后取出漂洗脱色，观察蛋白区带的分布
结果：
讨论：实验得到的薄膜效果不理想，可能是在点样不好。
沉淀法测定蛋白质的等电点
原理：溶液的pH值等于蛋白质的等电点时，蛋白质的溶解度最小
步骤：1.取管径一致的试管5支，编号，按下表中分别加入试剂并混匀
2.静置30分钟观察各个管的沉淀的量，并记录
沉淀法测定蛋白质的等电点
管号 1 2 3 4 5 蒸馏水 2.4 ---- 3.0 1.5 3.5 1.00mol/L乙酸 1.6 ---- ---- ---- ---- 0.10mol/L乙酸---- 4.0 1.0 ---- ---- 0.01mol/L乙酸---- ---- ---- 2.5 0.5 酪蛋白各管分别加入1.0ml，边加边摇，观察浑浊度
最终pH 3.5 4.1 4.7 5.3 5.9 沉淀多少-- ++ ++ -- --
结果：从2、3试管可以得出酪蛋白的等电点大约为4.4
讨论：查找资料得到酪蛋白的等电点为4.5 实验是一个粗略实验，测定的数值有较大偏差，实验中溶液的配制比较容易出现误差，从而造成不准确。
实验三-血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
实验三血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素薄膜电泳分析技术是目前临床常规测定中应用最广的方法，具有微量、快速、简便、吸附作用和电渗作用小、分离区带清晰、灵敏度及分辨率高等特点。
醋酸纤维素薄膜还可进行透明化处理，便于照相和扫描计算结果。
广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球蛋白、同工酶的分离和测定。
【目的】1.掌握电泳法分离蛋白质的原理、操作方法。
2.了解电泳法分离蛋白质的临床意义。
【原理】带电粒子在电场中向与其电性相反的电极泳动的现象称为电泳。
血清中各种蛋白质的等电点大多在pH4.0～7.3之间，在pH8.6的缓冲液中均带负电荷，在电场中都向正极移动。
由于血清中各种蛋白质的等电点不同，因此在同一pH环境中所带负电荷多少不同，又由于其分子大小不同，所以在电场中泳动速度也不同。
分子小而带电荷多者，泳动速度较快；反之，则泳动速度较慢。
因此通过电泳可将血清蛋白质分为5条区带，从正极端依次分为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β-球蛋白和γ球蛋白等，经染色可计算出各蛋白质含量的百分数。
【器材】醋酸纤维素薄膜（2cm×8cm）、培养皿、滤纸、无齿镊、剪子、加样器（可用盖玻片或或微量加样器）、直尺、铅笔、玻璃板（8cm×12cm）、试管、试管架、吸管、电泳仪、电泳槽、分光光度计或吸光度扫描计。
【试剂】1. 巴比妥缓冲液(pH8.6，0.07mol/L，离子强度0.06)称取巴比妥钠12.76g、巴比妥1.66g，加500毫升蒸馏水，加热溶解。
待冷至室温后，再加蒸馏水至1000毫升。
2. 氨基黑10B染色液称取氨基黑10B 0.5g加入冰醋酸10ml、甲醇50ml,混匀，加蒸馏水至100ml。
3. 漂洗液甲醇45ml、冰醋酸5ml，混匀后加蒸馏水至100ml。
4. 洗脱液 0.4mol／LNaOH溶液。
5. 透明液称取柠檬酸21g，N-甲基-2-吡咯烷酮150g，以蒸馏水溶解并稀释至500ml。
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳和定量实验的报告
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量实验日期实验地点合作者指导教师评分教师签名批改日期一、实验目的1.1.学习醋酸纤维薄膜电泳的根本原理和操作方法；1.2.了解电泳技术的一般原理；1.3.掌握电泳别离血清蛋白质及其定性定量的方法。
二、实验原理2.1.血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于pH7.4。
它们在pH8.6的缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。
由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。
因此可以将它们别离为清蛋白〔Albumin)、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5条区带。
2.2.血清中不同蛋白质的等电点、分子量及含量血清蛋白质等电点分子量占总蛋白的％清蛋白 4.64 69,000 57～72α1－球蛋白 5.06 200,000 2～5α2－球蛋白 5.06 300,000 4～9β－球蛋白 5.12 90,000～150,000 6.5～12γ－球蛋白 6.85～7.3 156,000～950,000 12～20缓冲液pH=8.6，pI＜pH。
血清蛋白带负电荷，在电场中向正极移动。
预测血清蛋白电泳区带图血清蛋白依次分为清蛋白，球蛋白的α1、α2、β、γ五个区带2.3.①膜条经过氨基黑10B染色后显出清晰色带；②各色带蛋白质含量与染料结合量根本成正比；③可将各色带剪开，分别溶于碱性溶液中；④用分光光度法计算各种蛋白质的百分数。
三、材料与方法：3.1.实验材料：3.1.1.实验试剂：①样品：安康人血清〔新鲜、无溶血〕；②巴比妥-巴比妥钠缓冲液〔pH8.6，离子强度0.06mol/L〕；③氨基黑10B染色液；④漂洗液；⑤洗脱液：0.4mol/NaOH溶液。
3.1.2.实验器材：①V-1100分光光度计〔×1〕；②恒温水浴箱〔×1〕；③试管〔×6〕、试管架〔×1〕；④1000μL加样枪〔×1〕、加样枪架〔×1〕；⑤醋酸纤维薄膜〔2cm*8cm，厚度120μm〕；⑥培养皿〔×5〕；⑦点样器或载玻片〔×1〕；⑧平头镊子〔×2〕；⑨剪刀〔×1〕；⑩电泳槽〔×1〕；⑪直流稳压电泳仪〔×1〕3.2.实验步骤薄层血清；⑥垂直点样。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白
⑶加样量
电泳过程应选择合适的电流强度，一般电流强度为宽膜为宜。
电流强度高，则热效应高，尤其在温度较高的环境中，可引起蛋白变性或由于热效应引起缓冲液中水分蒸发，使缓冲液浓度增加，造成膜片干涸。电流过低，则样品泳动速度慢且易扩散。
染色 通电完毕后用镊子将薄膜取出，直接浸于氨基黑10B的染色液中，染5 min取出，立即浸入盛有漂洗液的培养皿中，反复漂洗数次，直至背景漂净为止。用滤纸吸干薄膜。
定量
1
本实验不要求进行定量分析，如有需要，可采用薄层扫描仪进行扫描定量，或采用洗脱后再进行比色的方法进行定量。下面为后者的具体操作步骤：
02
⑸染色液的选择
透明液应临用前配制，以免冰乙酸及乙醇挥发而影响透明效果。这些试剂最好选用分析纯。透明前，薄膜应完全干燥。透明时间应掌握好，如在透明乙液中浸泡时间太长则薄膜溶解，太短则透明度不佳。
透明后的薄膜完全干燥后才能浸入液体石蜡中，使薄膜软化。如有水，则液体石蜡不易浸入，薄膜不易展平。
1
2
⑹透明及保存
02
图3-5正常人血清醋酸纤维素薄膜电泳示意图 1为清蛋白，2，3，4，5分别α1-，α2-，β-及 γ-球蛋白，6为点样原点
这些区带经洗脱后可用分光光度法定量，也可直接进行光吸收扫描自动绘出区带吸收峰及相对百分比。
此法由于操作简单，快速，分辨率高及重复性好等优点。它不仅可用于分离血清蛋白，还可用于分离脂蛋白、血红蛋白及同工酶的分离测定。
取一张干净滤纸（10×10cm），在距纸边1.5cm处用铅笔划一平行线，此线为点样标志区。
用竹夹子取出浸透的薄膜，夹在两层滤纸间以吸去多余的缓冲液。无光泽面向上平放在点样模板上，使其底边与模板底边对齐。点样区距阴极端1.5cm处。点样时，先用玻璃棒或血色素吸管取2-3µL血清，均匀涂在加样器上，再将点样器轻轻印在点样区内，如图3-6所示，使血清完全渗透至薄膜内，形成一定宽度、粗细均匀的直线。
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