血型鉴定抗体筛选交叉合血
血型鉴定与交叉配血
根据红细胞膜上有无A抗原或B抗原， 将血型分为A型、B型、AB型及O型四 种。通常利用红细胞凝集试验，通过 正定型和反定型鉴定ABO血型。
正定型是用已知抗A和抗B分型血清来测 定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原； 反定型是用已知A细胞和B细胞来测定血 清中有无相应的抗A或抗B。
血型抗原
抗B A型RBC B型RBC O型RBC
-
-+
+
-
结果 O
+
--
+
-
A
-
++
--B来自++-
-
-
AB
Rh血型鉴定
一、试剂 1、IgM抗-D试剂血清 2、待检红细胞悬液
二、操作 1、取12×75mm干净小试管1支 2、滴入IgM抗-D试剂血清1~2滴 3、滴入红细胞悬液 4、混匀后3400转/分离心15秒 5、轻轻摇动试管，观察结果 6、凝集为阳性，不凝集为阴性
红细胞血型抗原： 已确定的有29个系统、200多种抗原
其中必查血型抗原： ABO抗原和RhD抗原
血型抗体
常见的血型抗体分子大多属于IgM或IgG两类
*五类免疫球蛋白具有相似的单体结构 *两条轻链(L链)和两条重链(H链)组成的四肽 链 (H2L2)---单体结构
1、 IgG 抗体
分子较小，通常以单体形式存在。多经妊娠 或输血后免疫产生。在盐水介质中只能致敏相应 抗原的红细胞，而不能使之凝集，所以又称为不 完全抗体。必须通过特定的方法（如抗人球蛋白） 使致敏红细胞发生凝集。
2. 各加LIM溶液0.7m1 ，混合均匀后，再各加 Polybrene溶液1滴，并混合均匀，置室温1分钟。
3．普通离心机1000g离心15秒，然后把上清液 倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。
ABO血型鉴定及交叉配血
血型基因位于第9对染色体上， 基因名为ABO，由A、B和O三个 等位基因控制遗传。
基因特性
ABO血 型系统
ABO血型系统中A和B基因是显性基 因，O基因是隐性基因。
各基因编码产物
O基因编码产物无酶活性
各基因编码产物
B基因编码半乳糖转移酶
各基因编码产物
A基因编码N-乙酰半乳糖胺 转移酶
根据红细胞膜上所具有的抗原，将血型分为四个血型
（一）排除人为因素或操作失误(第一步) 复检ABO血型:
1)重新采集血样:分抗凝血和不抗凝血的2管, 排除血样采错、静脉输液处采样和血样 不规范等因素。 2)核对试剂、器材：核对试剂效期, 仔细阅读试剂说明书, 特别是操作规程和注意事 项;核对离心机转速、时间、离心力, 以及其它器材有无污染, 排除试剂、器材, 特别是 离心力不标准的干扰。
受检者血清（浆）与标准红细 胞（反定型）
抗-A + +
抗-B + +
Ac
Bc
Oc
-
+
-
+
-
-
+
+
-
-
-
-
受检者血型
A B O AB
思考题？
ABO反定型鉴定
1.ABO反定型中试剂为什么会有O型细胞？
如果在反定型试验中，受检者的血清（血浆）与O型红细胞试剂产生阳性反应，则需要添加自 身对照试验。如果自身对照试验为阳性，表明是自身冷凝集素导致。如果自身对照试验为阴性， 则表明被检者血清（血浆）中可能存在ABO系统以外的其他系统的抗体干扰定型。 2.只做ABO反定型，结果出来后能否直接报告血型？
1 A型
红细胞膜上只具有A抗 原
血型鉴定及交叉配血
注意：若上层为清亮的樱红色，考虑是否溶血
二、ABO血型鉴定：
二、反定型： 原理：用标准红细胞检测被检血清（血浆）,在盐
水介质中发生肉眼可见的凝集，从而测定被检血 清（血浆）中有无与标准红细胞相对应的抗体， 进一步判定血型。
二、ABO血型鉴定：
二、反定型 方法： 1、试管法：
注意：1、正反定型一致才能确定结果；
2、所用器材必须清洁干净，避免溶血，专型专用； 3、控制离心速度和时间，防止假阳性和假阴性； 4、抗原抗体比例要适当； 5、溶血时，注意结果的判定； 6、正反定型结果不一致时，不可轻易判定，需查明 原因，可能有技术问题也可能有标本问题。
Rh（D）血型鉴定
原理：IgM型抗D标准血清与被检者RBC表面D抗原在
制成红细 6、正反定型结果不一致时，不可轻易判定，需查明原因，可能有技术问题也可能有标本问题。
加红细胞悬液1滴（5%）
胞悬液， 6、正反定型结果不一致时，不可轻易判定，需查明原因，可能有技术问题也可能有标本问题。
Pc：patient cell
待测
一、红细胞悬液制备
常用浓度：1%、2%、5%、10%。 方法：①抗凝血 3000r/min 移去上层血浆待测
一、正定型 原理：用特异性血型抗体检测被检RBC,在盐水介质
中发生肉眼可见的凝集，从而测定被检RBC膜上有 无与特异性血型抗体相对应的抗原，进一步判定 血型。
二、ABO血型鉴定：
一、正定型 方法： 1、试管法：
-A
-B
加标准血清1滴
（-A -B ）
加红细胞悬 液1滴（5%）
混匀，离心 1000r/min 观察结果
1min
血型及交叉合血操作规程
血型及交叉合血操作规程一、引言作为医疗机构中常见的操作流程之一，血型及交叉合血是确保输血安全的重要环节。
本文将介绍血型和交叉配血的基本概念、操作步骤以及注意事项，以提供规范的操作指南。
二、血型的基本概念血型是指个体红细胞膜上存在的抗原和抗体的组合情况，分为A、B、AB和O四种类型。
在血型鉴定中，需要使用抗A和抗B两种血清对被测血液进行试验，从而确定其血型类型。
此外，还需要测试被测血液中是否存在抗D抗体，以判断其Rh阴性或Rh阳性。
三、交叉配血的基本概念交叉配血是在输血前进行的一项重要试验，旨在检测受血者的血清中是否存在与供血者红细胞的抗体相对应的抗原，以避免输血反应的发生。
具体操作如下：1. 取受血者的血清和供血者的红细胞，将它们分别置于两个试管中。
2. 依次加入适量混合胶体试验红细胞悬液和抗人球蛋白试剂，轻轻振荡混合。
3. 观察反应是否出现凝集、增浊或溶解等现象。
4. 凝集或增浊反应表示交叉配血不合格，需停止输血操作；溶解反应则表示血型和抗体基本匹配，可以进行输血。
四、血型及交叉合血操作规程以下为血型及交叉合血操作的具体步骤，操作人员应根据实际情况进行：1. 准备工作a. 确认受血者的基本信息，包括姓名、住院号、血型等。
b. 根据受血者血型，选择相应的供血者。
c. 根据病情和输血需求，估计所需输血量。
d. 消毒操作台面和操作器具。
2. 操作步骤a. 将受血者的血液样本采集到干燥无菌试管中，标明受血者信息。
b. 将受血者的样本送至血库，进行血型鉴定。
c. 根据受血者的血型和抗体情况，在血库选择适当的供血者。
d. 从血库获取供血者的血液样本。
e. 将供血者样本标记并送至血型试验室进行交叉试验。
f. 根据交叉试验结果判断是否合适进行输血操作。
g. 如满足输血条件，按照医嘱进行输血操作。
五、注意事项1. 操作人员应进行严格的洗手和穿戴手套等防护措施，以防交叉感染。
2. 每一步操作都需要仔细核对患者信息，确保输血操作正确。
实验7ABO血型鉴定及交叉配血实验_基础生物学实验(安徽大学研究生复试用,生物 生命科学)
实验七ABO血型鉴定及交叉配血实验一、实验目的通过鉴定实验和配血实验来学习、掌握人类ABO血型的原理和方法。
二、实验原理血型是特指血细胞膜表面抗原的类型。
ABO血型系统是一类常用的血液分型体系。
在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。
A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B抗体，则产生凝集现象。
血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清（含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A 或/和B抗原。
在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B抗原而分为A、B、AB、O四型(表7-1)。
统不同，人群中Rh血型的不匹配非常罕见，尤其在黄种人中，Rh(+)型占到99.7%,而Rh(-)型还不到0.3%。
所以在医疗输血中，通常只考虑献血者和输血者之间ABO血型是否匹配。
ABO血型在人群中的分布，存在着地理环境及民族、种族的差异，在我国汉族人群中，各血型的比例由多到少依次是O(34.11%)﹥ B(28.98%)﹥A(28.29%)﹥AB(8.69%)。
交叉配血是将受血者的红细胞与血清分别同供血者的血清与红细胞混合，观察有无凝集现象。
输血时，主要考虑供血者的红细胞不要被受血者的血清所凝集，其次才考虑受血者的红细胞不被供血者的血清所凝集。
前者叫交叉配血的主侧，后者称为交叉配血的次侧。
只有主侧和次侧均无凝集，称为“配血相合”。
如果主侧凝集，称为“配血不合”或“配血禁忌”，绝对不能输血；如果主侧不凝集，而次侧凝集，可以认为“基本相合”，但输血要特别谨慎，不宜过快过多，密切注视有无输血反应。
三、实验材料人外周血四、实验器材与试剂(一)器材采血针、尖头滴管、载玻片、1.5ml Eppendorf管、75%酒精棉球、消毒干棉球和记号笔。
(二)仪器显微镜、离心机。
(三)试剂标准A血清、标准B血清、生理盐水、碘酒。
五、实验操作（一）ABO血型鉴定1．用记号笔在载玻片两端分别作好标记A、B。
血型鉴定、交叉配血、不规则抗体筛查标本的采集
血型鉴定、交叉配血、不规则抗体筛查标本的采集1患者准备及原始标本识别1.1患者血液采集前，应避免跑步、骑自行车、爬楼梯等剧烈的运动，要求患者休息 15 分钟后进行采血。
冬季采血时应保持血液循环通畅；1.2.静脉血标本由临床医护人员采集，遵照医嘱准备好标本采集前所用的容器以及消毒器材、一次性注射器、标本条形码、检验申请单或输血申请单等备用。
首先确认患者姓名、住院号和血型，并将带有姓名、住院号、床位、检测项目的标本条形码贴于标本采血真空试管上；1.3.采血前应向患者作适当解释，以消除疑虑和恐惧。
如遇患者采血后发生晕厥，可让患者平卧，通常休息片刻即可恢复。
必要时可嗅芳香氨酊，针刺或指掐人中、合谷等穴位； 1.4.认真核对医嘱及患者信息，严格执行查对制度，询问患者姓名而不是询问你是 XX;. 采血前必须询问病人或病人家属，核对腕带，对受检者的身份信息进行确认，采血完成后必须再次核对病人与标本的条码信息是否一致。
1.5.标本条形码上的条形码是原始标本惟一标识。
1.6 非急诊输血时，ABO、RHD 血型鉴定和交叉配血标本不允许同一时间采集完成。
2 临床医生的指导2.1.临床医生必须对患者讲清楚血型鉴定、交叉配血检测的目的、采血时间(住院患者应在早晨卧床时取血；其他人员应最好在空腹时采血，急诊除外)及相关注意事项；2.2.临床医生应向患者讲清楚采集血液标本前，使用青霉素、非那西丁、氨基比林、磺胺、甲基多巴、肝素、右旋糖苷等药物可能会影响检验结果；临床医生确认患者近期使用上述药物，应在申请单中注明或直接通知检验科工作人员，以利于实验结果的正确判断。
3申请单的填写、处理及保存3.1.临床医生在开具输血申请单时，应采用计算机程序进行申请，填写完整，包括患者姓名、性别、年龄、申请科室、病人住院号、申请日期、标本类型、申请目的等。
输血申请单还需要填写患者输血前检测项目结果，包括 ABO 及RhD 血型、血红蛋白含量、白细胞计数、血小板计数、凝血酶原时间、凝血酶时间、部分活化凝血酶原时间、ALT、HBsAg 抗-HCV、抗HIV、梅毒实验结果；急诊申请输血时可写待定。
疑难血型鉴定及交叉配血处理流程
疑难血型鉴定及交叉配血处理流程一、正反定型不一致1、重复试验（严格正规操作）。
2、重新取血（以纠正污染或弄错标本造成的不符），溶血标本不能用于合血。
3、洗涤红细胞后进行以下试验（正反定型凝集低于2+的，应首先怀疑是由于亚型或抗原抗体活降低引起。
）1）、用自身血清、红细胞做定型对照，检验自身有无完全抗体。
2）、用O型红细胞做反定型对照，确认是否存在ABO系统以外完全抗体。
3）、用抗A、抗AB、抗A1和抗H进行正定型：①A亚型细胞与抗A、抗AB的凝集强度低于A1细胞，但与抗H的凝集强度高于A1细胞（3+以上）；②A亚型（特别是A2中约有1-8%会产生抗A1），与抗A1基本不发生凝集。
③用抗AB（O型血清或血浆）是因为它的抗A效价较高，与弱A和弱B抗原亲和力强。
4）、分别用A1型和A2型红细胞反定型检查血清中有无抗A1存在（A亚型中有部份会产生抗A1，能与A1发生凝集，但不与A2凝集。
）5）、询问病史，判断是否是由于病人抗体缺失或减弱引起反定型错误，可延长反应时间，或用灵敏度更高的血型卡做反定型。
6）、被检红细胞做直抗（观察有无被抗体致敏的情况），若为阳性，应将细胞放散至阴性后再定血型。
4、若还不能确定血型，应增加血型物质的检测（如唾液等）。
二、交叉配血不合（一）主侧端不相合1、血型鉴定不正确,重新鉴定血型。
2、病人血清中存在同种抗体，与供血者红细胞上的相应抗原反应。
3、供血者红细胞上已经包被了抗体，导致抗球蛋白试验阳性。
4、病人血清不正常，如白蛋白/球蛋白比例不正常引起缗钱状凝集，血清中存在高分子聚合物的血浆扩容剂引起假阳性。
5、试验系统被污染。
（二）次侧端不相合1、供血者血浆中存在针对病人红细胞抗原的抗体。
2、病人与供血者的ABO血型不相合。
3、病人的红细胞已经包被了抗体，直接抗人球蛋白试验阳性。
4、抗筛阴性，而次侧不合多由自身抗体引起（此是抗人球配血不合，而聚凝胺配血通过可输血）。
（三）配血不合的主要因素1、血型是否正确。
交叉配血试验的方法
交叉配血试验的方法交叉配血试验是一种常用的血型鉴定方法，主要用于确定一个人的血型类型以及确定输血时的血液配型。
下面将详细介绍交叉配血试验的工作原理，步骤以及其在临床应用中的意义。
交叉配血试验是通过比较供者血液和受者血液的相容性来确定是否可以进行输血。
其基本原理是根据不同的抗原和抗体之间的反应来进行血型鉴定。
人类血液主要分为ABO系统和Rh(D)系统，其中ABO系统包括A、B、O和AB四种血型，而Rh(D)系统主要有Rh(D)阳性和Rh(D)阴性两种类型。
交叉配血试验通常分为直接试验和间接试验两种。
直接试验是将供者的红细胞与受者的血清进行混合，在特定的实验条件下观察是否出现凝集反应。
如果凝集反应出现，那么说明供者和受者之间存在抗体-抗原的反应，即不相容，不适合输血。
如果没有凝集反应，则说明两者之间相容，可以进行输血。
直接试验主要用于确定供者血型是否与受者血型相容。
间接试验则是将受者的红细胞与已知血型的抗体混合，观察是否发生凝集反应。
如果出现凝集反应，说明受者的红细胞上有与抗体相对应的抗原，即该血型。
间接试验主要用于确定受者的血型。
一般情况下，交叉配血试验的步骤如下：1. 收集供者和受者的血液样本，并严格保持样本的标识正确，以免混淆。
2. 进行直接试验。
将供者的红细胞与受者的血清混合，在适当的试剂和温度条件下观察是否出现凝集反应。
如果有凝集反应则表示不相容，不适合输血。
如果没有凝集反应，则继续进行下一步。
3. 进行间接试验。
将受者的红细胞与已知血型的抗体混合，在适当的试剂和温度条件下观察是否发生凝集反应。
如果有凝集反应，则可以确定受者的血型。
如果没有凝集反应，则继续进行下一步。
4. 如果直接试验和间接试验的结果一致，那么可以确定供者和受者的血型相容，可以进行输血。
如果结果不一致，则需要重新检查样本或采用其他血型鉴定方法。
交叉配血试验在临床应用中具有重要意义。
首先，它可以帮助确定受者的血型，从而避免输错血的风险。
交叉配血流程
交叉配血流程交叉配血是一种通过检测血型抗原和抗体来确定合适的血液输血配对的过程。
在进行输血之前，医生会对受血者和供血者进行血型鉴定，并进行交叉配血试验，以确保输血过程的安全和有效。
下面将详细介绍交叉配血的流程。
1. 预登记和采血在进行交叉配血之前，医生会对受血者和供血者进行预登记，记录他们的个人信息和血型信息。
然后，医生会采集他们的血液样本，通常是从静脉中抽取一定量的血液。
2. 血型鉴定采集到的血液样本会送往实验室进行血型鉴定。
血型鉴定是通过检测血液中的抗原和抗体来确定一个人的血型。
根据抗原的不同，人的血型可以分为A型、B型、AB型和O型。
根据抗体的不同，血型可以进一步分为Rh阳性和Rh阴性。
3. 交叉配血试验交叉配血试验是为了确定受血者的血液是否与供血者的血液相容。
在试验中，医生会将受血者的血液与供血者的红细胞进行混合反应，观察是否出现凝集现象。
如果出现凝集现象，则说明受血者的血液中含有抗体，与供血者的红细胞发生了不相容反应。
4. 交叉配血结果根据交叉配血试验的结果，医生会确定受血者与供血者的血液相容性。
如果交叉配血试验结果为阴性，表示受血者的血液与供血者的血液相容，可以进行输血。
如果交叉配血试验结果为阳性，表示受血者的血液与供血者的血液不相容，不能进行输血。
5. 输血过程当确定受血者与供血者的血液相容后，可以进行输血。
在输血过程中，医生会将符合血型要求的供血者的血液通过输血管插入受血者的血管中。
在输血过程中，医生会密切观察受血者的反应，以及监测血液的流速和输血量。
6. 输血后观察输血结束后，医生会对受血者进行观察，以确保输血过程没有出现不良反应。
常见的输血反应包括发热、寒战、呼吸困难、过敏反应等。
医生会根据受血者的症状和体征调整治疗措施，以确保受血者的安全。
交叉配血是一项非常重要的临床操作，它可以减少输血相关的不良反应和并发症的发生。
通过准确的血型鉴定和交叉配血试验，可以确保输血过程的安全和有效。
血型鉴定及交叉配血
严格进行血型鉴定和交叉配血试验， 确保供、受体血型一致。
症状
寒战、高热、腰背酸痛、血红蛋白尿、 黄疸等，严重者出现血压下降、休克 和急性肾衰竭。
非溶血性输血反应
发生机制
与免疫因素有关，如过敏反应、 发热反应等。
症状
皮肤瘙痒、红斑、荨麻疹、咳嗽、 呼吸困难等，严重者出现过敏性
休克。
预防
对有过敏史的受血者进行预防性 用药，输血前仔细询问受血者过
O型血与疾病的关系
O型血人群患心血管疾病的风险 较低，但也有一定的风险。
O型血人群对某些病毒和细菌的 抵抗力较强，如流感病毒、肺炎
球菌等。
O型血人群患某些癌症的风险较 高，特别是结直肠癌和乳腺癌。
04 输血反应
CHAPTER
溶血性输血反应
发生机制
预防
由于供、受体的血型抗原不匹配，导 致红细胞在血液循环中溶解破坏。
A型血人群易感染某 些病毒和细菌，如流 感病毒、幽门螺杆菌 等。
A型血人群患癌症的 风险也相对较高，特 别是消化系统癌症。
B型血与疾病的关系
B型血人群患心血管疾病的风 险较低，但也有一定的风险。
B型血人群患某些自身免疫性 疾病的风险较高，如类风湿性 关节炎、系统性红斑狼疮等。
B型血人群易感染某些病毒和 细菌，如流感病毒、肺炎球菌 等。
敏史。
输血传播疾病
疾病种类
包括乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病、梅毒等。
传播途径
通过血液中携带病毒的微量红细胞或白细胞传播。
预防
对献血者进行严格的筛选和检测，采用病毒灭活 技术处理血液制品。
05 输血前检查
CHAPTER
输血前检查的内容
01
02
03
实验15 血型鉴定&交叉配血
一、 ABO血型系统鉴定
（二）玻片法
抗A标准检悬液1d 竹签混匀，静置15min，观察结果： 肉眼与显微镜下观察有无凝集
一、 ABO血型系统鉴定
结果判断： eg： 抗A标准血清+RBC悬液→凝集； 抗B标准血清+RBC悬液→不凝集 结果报告： 血型正定型为： X型
一、 ABO血型系统鉴定
【原理】 ABO血型系统天然抗体（IgM）分子量大， 能在生理盐水介质中与相应RBC抗原结合 发生凝集反应，以标准血清（抗A、抗B） 鉴定红细胞上的抗原（正定型），或用标 准红细胞鉴定被见血清的抗体（反定型）。 当出现凝集时，存在与已知抗体相应抗原 或已知抗原相应的抗体。
一、 ABO血型系统鉴定
｝A型
二、交叉配血试验
【原理】 将受血者的红细胞与血清分别同供血者的 血清与红细胞混合，观察有无凝集现象 ， 来判断受血者与供血者之间配血是否相合。
二、交叉配血试验
【操作】 1、准备：①制备受血者RBC悬液 ②制备供血者RBC悬液 ③制备受血者血清 ④制备供血者血清 2、取小试管2支，分别标记主侧、次侧 3、加血清和细胞悬液： 在主侧管中分别加②和③各1滴， 在次侧管分别加④和①悬液各1滴，混匀。 4、1 000r/min离心1 min。 5、观察结果 同ABO血型正定型试管法。
血型鉴定与交叉配血试验
ABO血型输血关系
O
AB
AB
B
B
A
A
O
3、输血原则：
输血前一定要作交叉配血，防止发生输血反应；②强调同型配血；③婴幼儿禁忌异型配血；④大量输血时，还应进行献血员间的配血试验；⑤可根据病情需要选择成分输血。
安全输血标准操作程序
01
受血者在输血前必须做输血前四项检查（乙、丙、艾、梅）
三查三对：核对输血申请单病人姓名、科别、床号与血标本写的姓名、科别、床号是否相符
（二）Rh 血型系统
Rh血型能识别的抗原共43种，常见的抗原有五种，分别是D、C、E、c、e。以 D抗原的抗原性最强，故常以其存在与否定为Rh阳性或阴性，即凡含D抗原者为Rh阳性，不含D抗原者为Rh阴性。Rh 血型系统与ABO系统不同的是很少含有天然抗体，大部分是因受免疫刺激后而产生免疫抗体。
第一次输血：
B
B
anti-A
B/B、B/O
ABLeabharlann A&B---A/B
一、ABO血型鉴定
抗A血清
抗A血清
A型血
抗B血清
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抗B血清
抗A血清 B型血 抗B血清 抗A血清 抗B血清 AB型血 B型血
红细胞凝集反应和输血： 当含有凝集原A的红细胞与含有A凝集素的血清相混合时，或含有凝集原B的红细胞和含有B凝集素的血清相混合时，红细胞即可凝集成团，即凝集反应 。通常在输血时，主要考虑供血者的红细胞不被受血者的血浆所凝集。从理论上讲O型血者的血细胞不含A、B凝集原，曾被认为是可供任何型的受血者；而AB血型则可接受任何血型者的供血。通过深入研究，发现各类血型还存在亚型，情况较复杂。故现在输血，除要求同型外，在输血前，受血者和供血者的血清和红细胞之间还必需进行交叉配血试验，两方面均不发生凝集反应时，方可输血。
疑难血型鉴定及交叉配血处理流程
疑难血型鉴定及交叉配血处理流程一、正反定型不一致1、重复试验（严格正规操作）。
2、重新取血（以纠正污染或弄错标本造成的不符），溶血标本不能用于合血。
3、洗涤红细胞后进行以下试验（正反定型凝集低于2+的，应首先怀疑是由于亚型或抗原抗体活降低引起。
）1）、用自身血清、红细胞做定型对照，检验自身有无完全抗体。
2）、用O型红细胞做反定型对照，确认是否存在ABO系统以外完全抗体。
3）、用抗A、抗AB、抗A1和抗H进行正定型：①A亚型细胞与抗A、抗AB的凝集强度低于A1细胞，但与抗H的凝集强度高于A1细胞（3+以上）；②A亚型（特别是A2中约有1-8%会产生抗A1），与抗A1基本不发生凝集。
③用抗AB（O型血清或血浆）是因为它的抗A效价较高，与弱A和弱B抗原亲和力强。
4）、分别用A1型和A2型红细胞反定型检查血清中有无抗A1存在（A亚型中有部份会产生抗A1，能与A1发生凝集，但不与A2凝集。
）5）、询问病史，判断是否是由于病人抗体缺失或减弱引起反定型错误，可延长反应时间，或用灵敏度更高的血型卡做反定型。
6）、被检红细胞做直抗（观察有无被抗体致敏的情况），若为阳性，应将细胞放散至阴性后再定血型。
4、若还不能确定血型，应增加血型物质的检测（如唾液等）。
二、交叉配血不合（一）主侧端不相合1、血型鉴定不正确,重新鉴定血型。
2、病人血清中存在同种抗体，与供血者红细胞上的相应抗原反应。
3、供血者红细胞上已经包被了抗体，导致抗球蛋白试验阳性。
4、病人血清不正常，如白蛋白/球蛋白比例不正常引起缗钱状凝集，血清中存在高分子聚合物的血浆扩容剂引起假阳性。
5、试验系统被污染。
（二）次侧端不相合1、供血者血浆中存在针对病人红细胞抗原的抗体。
2、病人与供血者的ABO血型不相合。
3、病人的红细胞已经包被了抗体，直接抗人球蛋白试验阳性。
4、抗筛阴性，而次侧不合多由自身抗体引起（此是抗人球配血不合，而聚凝胺配血通过可输血）。
（三）配血不合的主要因素1、血型是否正确。
血型鉴定和交叉配血中常见问题分析和处理包括：
血型鉴定和交叉配血中常见问题分析和处理包括：一、血型相容性检测二、ABO血型正反定型型不一致的原因分析及处理三、交叉配血中常见问题分析及处理四、意外抗体筛选的意义和检测方法五、弱D检测的的意义和检测方法一、血型相容性检测1、受血者和供血者AB0血型是否相容。
2、受血者和供血者RhD血型是否相容。
3、主次侧交叉配血是否相容。
4、受血者血清中是否有临床有意义的意外抗体。
二、ABO正反定型不符的原因分析和处理（一）原因1．实验者操作技术的错误：导致假阴性的有：①未加入抗体或血清。
②未识别溶血。
③血清与红细胞比例不当④离心速度或时间不够。
⑤使用失效或错误试剂。
⑥实验结果记录或解释错误导致假阳性的有：①离心速度过大或时间过长、②使用了受到细菌污染的试剂、③试验器皿不干净、④实验结果记录或解释错误2、红细胞标本问题：①患者近期接受了大量ABO血型相容但不同型的红细胞，如骨髓移植患者，或非O型人接受O型红细胞②某些ABO基因变异的个体或ABO亚型红细胞，一些白血病或其他恶性疾病患者的红细胞ABO抗原太弱，应用抗－A、抗－B试剂未能出现预期的凝集反应③红细胞获得性或遗传性的异常，如获得性B抗原红细胞或Tn/T多凝集红细胞，人血清抗－A、抗－B试剂可能与这些异常的红细胞反应④使用未洗涤的红细胞标本，其表面黏附的血浆或血清中含针对抗－A、抗－B 试剂中染色剂或其他成分的抗体，出现假阳性反应⑤患者血清中高活性、高浓度冷自身抗体严重致敏（包被）自身红细胞，以至自发地发生凝集，而不是抗体试剂的特异性免疫反应所致⑥红细胞表面包被IgG类抗体3、血清标本的问题：①小的纤维蛋白凝集的红细胞凝块被误认为是血液凝集，如使用血浆标本或未完全去除纤维蛋白的血清标本时。
②免疫抑制疾病患者血清中ABO抗体减少或消失。
老年人ABO抗体减弱③4-6月龄内婴儿血清中ABO抗体阴性或很弱，一般只测正定型④血清中不正常浓度和比例的蛋白质成分或高分子蛋白增多可引起非特异凝集，如缗钱状红细胞的非特异凝集⑤血清中含抗－A、抗－B以外的其他红细胞抗体，如抗－M、抗－I等。
血液相容性检测(血型鉴定交叉配血)制度
血液相容性检测（血型鉴定交叉配血）制度1、交叉配血报告单必须经过“临床用血申请审核制度”审
核合格的才能进行血液相容性检测（血型鉴定交叉配血）2、认真执行临床输血技术规范要求
2.1血者配血试验的血标本必须是输血前3天之内的。
2.2血科（血库）要逐项核对输血申请单、受血者和供血者血样，复查受血者和供血者ABO血型（正、反定型），并常规检查患者Rh（D）血型（急诊抢救患者紧急输血时Rh（D）检查可除外），正确无误时可进行交叉配血,交叉配血必须采用能检查不完全抗体的介质或实验方法。
2.3输注全血、浓缩红细胞、红细胞悬液、洗涤红细胞、冰冻红细胞、浓缩白细胞、手工分离浓缩血小板应ABO血型同型输注。
2.4两人值班时，交叉配血试验由两人互相核对；一人值班时，操作完毕后自己复核，并填写配血试验结果。
3、认真核对各项检验结果，对可疑结果不允许签发报告单，不允许发出未经交叉配血试验的血液。
4、凡遇有下列情况必须按《全国临床检验操作规程》有关规定作抗体筛选试验：交叉配血不合时；对有输血史、妊娠史或短期内需要接收多次输血者。
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血型及交叉合血操作规程
ABO、Rh-D血型鉴定操作规程1．目的规范ABO、Rh-D检测的操作过程2. 标本采集静脉采血2ml抗凝血,避免溶血试剂3. 试剂长春博讯生物技术有限责任公司4.方法原理【原理】：标准血清中的完全抗体(lgM)抗A、抗B、和抗D能和红细胞表面相应的抗原在盐水介质中发生特异性的凝集反应。
根据红细胞凝聚类型可鉴别出A、B、O、AB四型和RHD阴性或阳性。
5. 操作：一、玻片法(一般只能做正定型)【正定型】：1、取一张玻片，用蜡笔或记号笔将其分为三等份，从左到右每一等份左上角标明A、B、D，2、对应加入抗A和抗B抗D标准血清一滴；3、分别加PC(患者10—15%红细胞悬液)；4、用洁净竹签将试剂和红细胞充分混匀，混合物约2cm2大小；5、轻轻地连续倾斜转动玻片2—5分钟，观察并记录；【解释】：A端凝集为A型血；B端凝集为B型血；A、B端均凝集则为AB型；A、B端均不凝集则为O型；D端凝集则为RH阳性者，无凝集则为RH阴性。
备注：玻片法可作为ABO血型初筛或复检；不适用于抗体鉴定和交叉配血；不适合检测ABO亚型。
二、试管法（盐水介质）【原理】：标准的A型和B型红细胞能和受检者血清（血浆）中相应的抗体发生特异性结合，形成肉眼可见的凝集反应，从而可推断出受检者的血型。
【材料】：1、标准A型和B型红细胞悬液（浓度4%，商品有售，亦可自行新鲜配制）；2、受试者血清或血清；3、洁净康氏试管。
【正定型】：1、取二支洁净试管分别记上抗A和抗B；2、对应加入抗A和抗B血清1滴；3、分别加入病人红细胞悬液1滴（浓度为2%-5%）；4、混匀，室温放置5分钟，1000rpm离心1分钟，取出观察结果【解释】：轻摇试管，检查是否凝集，抗A、抗B管均凝集，受试者为AB型血；抗A、抗B管均不凝集，则为O型血；抗A管凝集则为A型血；抗B管凝集则为B型血。
【反定型】：1、取二支试管分别记上AC和BC；2、分别加入病人血清；3、对应加入A和B型试剂红细胞；4、混匀室温放置5分钟，1000rpm离心1分钟，取出观察结果；【解释】：首先检查上清液有无溶血，然后轻摇试管，检查是否凝集，A、B管均凝集受试者为O型血；A、B管均不凝集则为AB型血；A管凝集则为B型血；B管凝集则为A型血。
血型鉴定与交叉配血制度
血型鉴定与交叉配血制度
1．病人急需鉴定血型或交叉配合时，医生应在检验单上注明“急”字，并注明时间到分。
2．血型鉴定包括ABO血型和Rh(D)血型，两人核对操作，正反定型相符，方可报告。
3．交叉配血试验的血样标本必须是输血前3天之内的。
4．输血科工作人员必须认真核对申请单、受血者和供血者的血样，复查受血者和供血者ABO血型，Rh(D)血型，正确无误后再进行交叉配血。
5．凡输注全血、浓缩RBC、洗涤RBC、冰冻RBC、浓缩WBC、浓缩血小板、机采血小板，都应做交叉配血试验，输注血浆(普通浆、冰冻血浆)也应做次侧配血试验。
6．血库必须严格按照实验规程操作，认真仔细做好交叉配血试验，两人核对操作相符，方可报告，并详细填写好“交叉配血报告单”，报告单上必须双人签名，时间精确到分钟。
7．交叉配血合格后，受血者与供血者的血样及主侧、次侧管均应放入2～6℃专用冰箱内至少保存7天，以备对输血不良反应追查原因。
8．对于手术上或其他急诊大输血时，输血科应先交叉配合1~2袋血并及时送往病室或手术室，然后再交叉配合剩下的血液。
血型鉴定与交叉合血
（ 2）另取洁净小试管（内径10mm×60mm)3支，分别标 明A、B、O细胞,用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部， 再以滴管分别加入5％ A、B、O试剂红细胞盐水悬液1滴，混 和。
2.人类主要组织相容性抗原系统（HLA)
3.血小板血型系统（PHA）
4.血清型。血清型按蛋白质可分为免疫球蛋白、血 清酶、血清蛋白、补体等几大类。
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2
血型鉴定
• 血型鉴定主要用已知特异性的抗体鉴定未 知的红细胞抗原，或辅助用已知抗原的一组红 细胞（谱红细胞）鉴定未知血清的抗体，结合 相关理论基础综合判断血型。血型鉴定以抗原、 抗体免疫检测技术为基础，常用的方法有盐水 介质法、微柱凝胶卡片法、聚凝胺法，疑难血 型还可用聚合酶链反应（PCR）技术直接分析 相关血型的基因。
血型鉴定与交叉合血
王炼红 解读
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1
血型的定义及分类
血型是指各种血液成分的遗传多态性标记。血型抗 原不仅存在于红细胞上,也存在于白细胞和血小板上， 还存在于各种组织细胞、多数体液中，甚至不同个体 的血清蛋白间也存在型别的差异。
血型系统主要分类：
1.红细胞血型系统，其中又分为ABO血型系统、 Rh血型系统、MNS血型系统、P血型系统、Kell血型 系统、Kidd血型系统、Duffy血型系统
十
A
─十
十
B
──
─
O
十十
十
AB
受检者血清+试剂RBC
A细胞 ─ 十 十
─
B细胞 十 一 十
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Rh血型鉴定： IgM型盐水抗D试剂能够与D阳性红细 胞在盐水介质中形成肉眼可见的凝集。
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5
原理
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6
试剂
抗A及抗B血清（商品试剂） 5% A型和B型红细胞（试管法） 10% A型和B型红细胞（玻片法） IgM型盐水抗D试剂
标本 抗凝静脉血 EDTA-K2
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7
室温放置2分钟左右观察结果。医学ppt11源自结果判读（ABO血型鉴定）
正定型
抗A
抗B
-
-
+
-
-
+
+
+
反定型
A细胞 B细胞 O细胞
+
+
-
-
+
-
+
-
-
-
-
-
血型
O A B AB
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12
结果判读（Rh血型鉴定）
阳性对照 阴性对照 待检细胞
+
-
+
+
-
-
结果 + -
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报告方式 XXX型，Rh +/-
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8
红细胞ABO血型鉴定（试管法反定型）
标记两支干净的试管Ac和Bc 每管加入2滴受检者血清。 在标记Ac的试管中加入1滴5%A型试剂红细胞。 在标记Bc的试管中加入1滴5%B型试剂红细胞。 轻轻混匀，1000g离心1分钟。 检查上清有无溶血。 轻轻重悬细胞扣，检查凝集。 判断并记录结果。
输血和输血技术试验
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1
实验内容
血型鉴定 抗体筛选 交叉配血
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2
血型鉴定
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3
目的
掌握红细胞ABO血型及Rh血型鉴定
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4
原理
ABO血型鉴定：根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗 原，以及血清中有无抗A及抗B，可以将血型分为A型、 B型、AB型、O型四种，利用红细胞凝集实验通过正 定型、反定型准确鉴定ABO血型。
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26
思考题
1.红细胞ABO血型鉴定正反定型不一致 原因
2.导致Rh血型鉴定出现假阳性和假阴性 原因
3.抗体筛选的临床意义
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27
交叉配血 Cross Match
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28
目的
掌握交叉配血的试验方法
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29
原理
盐水法 检查供受者之间有无ABO血型不合。用于抗体筛
选阴性和不同血型骨髓移植患者的输血。
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抗体筛选
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16
目的
掌握抗体筛选的试验方法
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17
盐水试验法 白蛋白介质法 低离子强度介质法（LISS） 酶技术 抗球蛋白试验 聚凝胺促凝技术 PEG促凝技术
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原理
抗人球蛋白法： IgG类抗体，由于其分子量小，与红细胞结合以后在 盐水介质中不发生肉眼可见的凝集，称为不完全抗 体。但在加入抗-IgG的抗体后，以其搭桥则可出现 凝集。
操作步骤
在标记好的试管中按下表加入试剂及血清。
阳性对照管
IgG型抗D
1
待检血清
阴性对照血清
5%O型试剂红
1
细胞
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待检管 2 1
阴性对照管
2 1
23
ABO血型鉴定 不规则抗体筛选
玻片法（正定型）
盐水法
试管法 （正定型,反定型）
聚凝胺法 抗人球法
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24
微柱凝集试验技术
达亚美微量定型系统凝胶测试法 基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化
学抗原抗体特异反应。当抗原抗体反应，抗人球试 验时血细胞发生凝集。离心时凝集块不能通过凝胶 间隙而在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心 时可通过凝胶间隙而在凝胶底部，呈阴性反应。
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25
DiaMed 卡法结果判读
4＋ 在凝胶柱顶端形成单一层凝集细胞。 3＋ 凝集层主要位于凝胶柱上1/3。 2＋ 凝集位于整个凝胶柱，底部仅有较少细胞。 1＋凝集层位于凝胶柱下1/3。 凝胶中细胞没有凝集或溶血视为阴性。
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试剂
抗球蛋白试剂 阳性对照血清 阴性对照血清 O型红细胞 生理盐水
标本：抗凝静脉血（EDTA-K2）
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20
操作步骤
在标记好的试管中各加入两滴血浆和一滴5%的O 型红细胞，混匀。
于370C孵育一小时。
用生理盐水洗涤红细胞4-6次，完全倾尽末次洗涤 盐水。
向得到的干细胞扣中加入1-2滴抗球蛋白试剂。
1000rpm，离心1分钟。检查凝集并记录结果。
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结果判读
加入抗球蛋白试剂后，如红细胞出现凝集或溶血，则 结果为阳性。
加入抗球蛋白试剂后结果为阴性，而加入直抗阳性对 照细胞后呈阳性反应，则结果为阴性。如加入直抗阳 性对照细胞后呈阴性反应，则结果不可靠，必须重复 检测。
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红细胞ABO血型鉴定（试管法正定型）
标记两支干净的试管-A和-B 在标记为-A的试管中加1滴抗A试剂。 在标记为-B的试管中加1滴抗B试剂。 在每个试管中各加入5%受检者红细胞悬液
(1份压积红细胞+19份0.9%盐水) 轻轻混匀，1000g离心1分钟。 检查上清液是否有溶血。 轻轻重悬细胞扣，检查凝集。
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14
注意事项
玻片、试管都要标记！！！A及B标准血清绝对不能相混,不要依靠 用染料颜色标记血清。
所用玻片、试管实验前必须清洗干净，以免出现假凝集现象。
红细胞悬液滴管头不能接触标准血清液面，
一般先加血清，再加红细胞悬液，便于核实是否漏加血清。
离心时间、速度严格要求。
要在光亮的背景下观察凝集,可使用光镜检查小的凝集,同时应注意 观察凝集强度，有助于A、B亚型的发现，观察后立即记录。
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30
原理
凝聚胺法
凝聚胺是一种高价阳离子季胺盐多聚物，溶解后能 产生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红 细胞之间的距离减少，能引起正常红细胞可逆性的非特 异性凝集。如果是抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，则 凝集不可逆。离心后，加入重悬液，凝聚胺的凝聚作用 可通过加入枸橼酸钠而中和，使正常红细胞的凝聚解散， 而抗体引起的凝集仍然存在。
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9
红细胞ABO血型鉴定（玻片法）
在标记的玻板上分别加一滴抗A、抗B。
各加一滴10%受检者红细胞悬液 (1滴压积红细胞+9滴0.9%盐水)
轻轻混匀，室温放置2-15分钟。
观察并记录结果：凝集为阳性结果，不凝集为阴 性结果，对结果有怀疑，应用试管法重新实验。
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红细胞Rh血型鉴定
试管法
标记一支75×12mm的试管 加入抗D血清1滴， 加1滴5%的待检细胞。 轻轻混匀，1000g离心1分钟，或3000r/min，15秒。 检查是否溶血，然后轻轻重悬细胞扣，检查凝集
玻片法
在玻板上标记待检红细胞编号。
加入抗D血清1滴于标记玻片中。
将35－45%的待检细胞1滴滴入玻片并混匀。