花露水对大蒜根尖细胞微核的诱导

花露水对大蒜根尖细胞微核的诱导

摘要：夏天，更多的人们选择方便、安全的花露水来驱赶蚊虫。所以我们小组选择常见市售花露水对大蒜根尖细胞进行诱导。选取不同浓度的花露水（0%，5%，25%，50%，75% ) 为诱变剂 , 分别处理大蒜的根尖细胞, 用微核检测法确定大蒜根尖细胞的微核率。大蒜根尖经过不同浓度的花露水处理液处理后, 根尖颜色明显发黄。微核诱变试验显示, 不同浓度的花露水处理大蒜根尖细胞可诱发不同频率的微核率, 浓度在0-50%范围内，微核率随着花露水浓度的升高呈增加趋势，浓度大于50%，微核率随着花露水浓度的升高呈降低趋势。因此，花露水对大蒜根尖细胞有一定的诱导作用。

关键词：花露水大蒜根尖细胞微核

前言：驱蚊花露水是居民夏季防蚊最常用的卫生用品之一,是在普通花露水的基础上配以适量驱避剂而成。目前,避蚊胺、驱蚊酯、羟哌酯和植物精油是常见的蚊虫驱避剂。驱蚊酯又称丁基乙酰氨基丙酸乙酯、BAAPE，IR3535，伊默宁，是一种塑化剂，也是广谱、高效的低毒昆虫驱避剂，它对苍蝇、虱子、蚂蚁、蚊子、蟑螂、蠓虫、牛虻、扁蚤、沙蚤、沙蠓、白蛉、蝉等都有良好的驱避效果；它的驱避作用时间长，能在不同气候条件下使用。据文献报道，其小鼠急性经口LD50为10 000 mg /kg。市场上现在以驱蚊酯为有效成分的驱蚊产品主要有4% 宝宝金水舒爽驱蚊花露水、4%柏纷婴儿护肤防蚊液、4.5%六神驱蚊花露水、11.5% 强生婴儿驱蚊液等。

采用大蒜为实验材料，具有许多优点：①用鳞茎进行无性繁殖，避免了有性繁殖过程中的遗传性变异，具有遗传背景稳定的优势，目前已有利用大蒜根尖细胞检测水质、大气污染研究的报道；

②分布广、材料易得，不受地区和季节的限制；③培养方便，操作简单，蒜瓣去皮后将基部浸入净水中即可萌生新根，无需其他条件，且蒜瓣体积较小，萌生新根的数目较多；④价格低廉，对诱变剂敏感，是一种理想的试验材料。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试材料大蒜根尖、六神花露水。

1.1.2 主要试剂70%、80%、95%酒精，80%卡诺氏固定液，盐酸，苯酚品红染色液，5%、25%、50%，75%花露水稀释液。

1.2 方法

1.2.1 水浸发根大蒜浸泡1 d,剥去外层膜质枯皮后，将蒜瓣放在培养皿，置室内培养，12 h换水1次，3~5 d后大蒜即可长出嫩根。

1.2.2 根尖预处理待根长到1.5~2.0 cm时，将大蒜根尖浸入处理液中，室温下处理24 h。处理液分别为蒸馏水，5%、25%、50%，75%花露水稀释液。

1.2.3 固定水洗处理后的根尖，置于清水中恢复培养24 h再剪去根尖，放入卡诺氏固定液中固定24 h后，依次放入95%、80%的酒精中各脱水5min，最后换70%酒精在4℃冰箱中保存备用。

1.2.4 解离 取出备用根尖，漂洗2~3次，加入1mol/L 盐酸，放入65℃恒温箱中解离10 min ，弃去盐酸，水洗根尖三遍。

1.2.5染色 截取根尖2-3 mm 分生组织置载玻片上，加一滴改良苯酚品红染液，边用镊子夹碎边染色染色10 min ，再加上盖玻片。

1.2.6压片 吸水纸包住盖玻片和载玻片，镊柄敲片，敲至材料呈云雾状即可。 1.2.7镜检 低倍镜转高倍镜进行观察，并记录微核细胞数目、拍照，最后计算微核率。

微核率（MCN%）＝微核细胞数/观察细胞数×100%。 每个处理组观察5~6个根尖，统计含微核的细胞平均数。 2 结果与分析 2.1数据记录

0 542 309 230 1081 1 0 1 3 0.185% 5 341 298 543 1182 2 5

4 11 0.931% 2

5 425 637 15

6 1062 4 10 4 18 1.478% 50 498 449 580 152

7 14 13

8 35 2.292% 75

274

253

364

891

8

1

2

11

1.234%

表1 不同浓度的花露水对大蒜根尖细胞微核率的影响

表2 不同浓度花露水与微核率的线性关系

2.2不同浓度花露水处理对大蒜根尖的影响 由图A 、B 、C 、D 、E 可知，分别经由0%、5%、25%、50%，75%花露水稀释液处理的大蒜根尖均能产生微核，浓度在0~50%范围内，微核率随着花露水浓度的升高呈增加趋势，浓度大于50%，微核率随着花露水浓度的升高呈降低趋势，5个处理的微核率分别是0.185%，0.931%，1.478%，2.292%和1.234%。

注：图A 、B 、C 、D 、E 分别是经由0%、5%、25%、50%，75%花露水稀释液诱导后的微核

图1 不同浓度的花露水对大蒜根尖细胞微核率的影响

3 结论

（1）实验结果表明，大蒜根尖经过不同浓度的花露水处理后，

根尖颜色发黄且花露水具有诱变

大蒜根尖微核作用。由表1可知, 一定浓度范围内（0~50%）大蒜根尖细胞微核率随着花露水处理液浓度的增加而上升, 处理液浓度与根尖细胞微核率存在正相关关系。而浓度大于50%，微核率随着花露水浓度的升高呈降低趋势。小组分析微核率下降的原因是因为，花露水含量过高、毒性过强，导致细胞核死亡或变形，或遗传物质受到破坏，大蒜根尖无法继续分裂，从而导致细胞微核率降低。

（2）蒸馏水培养的大蒜也会发生自身地畸变，但是比率较小。

4 反思

在关于花露水对大蒜根尖细胞微核的诱导实验中，有很多细节值得进行进一步的思考。

首先，在实验的开始阶段，由于是自主实验，所以，需要试验预方案的确立，通过文献的查找与汇总，我们确立了通过化学方法---花露水进行对微核的诱导实验，根据前人的实验经验，我们决定选取五个梯度，即，CK，5%，25%，50%，75%五个梯度进行研究，但实际上，为了确保实验的严谨性以及意义性，最好的实验方案应该在75%的浓度之后再添加一个100%的浓度梯度，但是由于材料准备的不够充足，以及在进行大蒜生根的过程中造成根的生长状态不一致，没有办法确保六个浓度梯度，所以，最后还是采取了五个浓度梯度的实验，造成了一些不完美。

其次，是在关于大蒜生根的材料准备过程中，在此过程中，我们的措施做得还是相当严谨的，能够确保每天换水，水量合适，生长环境符合生长需要，所以，前期的实验材料准备工作是没有错误的。当然，在进行固定解离的实验过程中由于是全班进行的，所以，能够出错的机会较少。

最后，就是关于制片观察的过程中，由于刚好是五个浓度梯度，组员刚好也是五人，所以，我们每个人选择了一个浓度梯度，当然，在此部分中，由于个人操作的外力因素，所以，实验误差及偏差是不可避免的，包括捏片的力度，染色的时间，敲片的程度对结果都是有影响的，所以，在此过程中，对实验的结果会产生直接的影响。当然，在用花露水对根尖进行处理的阶段，也有可能会对结果产生影响，因为，首先，花露水是由挥发性的，所以在浸泡过程中我们同时采取了套袋处理，其次就是，花露水的品牌多样，成分也各有不同，所以，跟前人实验结论有所冲突也在所难免。

不管怎样，通过此次自主实验，我们学到了很多东西，最重要的，我觉得还是锻炼了自主思考的能力，一个全部实验都由自己查阅，设计，动手的实验，让人受益匪浅，不仅打开了思路，而且积累了经验。

参考文献

[1] 徐秀芳,张海洋,于淑池等.秋水仙素诱导大蒜微核的遗传学实验方法研究[J].安徽农业科学,20

12,40(15):8415-8416.DOI:10.3969/j.issn.0517-6611.2012.15.007.

[2] 仪慧兰,孟紫强.SO2衍生物对大蒜根尖细胞遗传损伤作用的研究[J].环境科学学报,2001,21