细菌的培养方法精品PPT课件
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细菌培养基的制备、灭菌及接种、培养技术ppt课件
20
目的要求
掌握从环境中分离培养细菌的方法，从 而获得若干种细菌纯培养技能。 掌握几种接种技术。
21
实验材料
无菌培养皿(直径90mm)10套、无菌移液管1mL2
支、10mL1支。
营养琼脂培养基1瓶，活性污泥或土壤或湖水1瓶， 无菌稀释水90mL1瓶、9mL5管。 其它：接种环、酒精灯、恒温箱。
22
c. 第三次蒸煮之后基本无菌，但为了确保无菌仍要放 在37℃恒温条件下培养24h，确定无菌才能使用。
18
实验程序4
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
过滤除菌法： 不能用加热灭菌的 液体物质（如维生 素、血清），一般 可用细菌过滤器进 行除菌。
19
第二部分 细菌纯种分离、培养和接
种技术
目的要求 实验材料 实验程序
9
实 验 程 序2
（培养基的配制方法和步骤） 3. 调pH值：用10％ NaOH调pH至7.6，用精 密pH试纸对照。 4. 分装：将培养基分装于5支试管，其余全部 倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。注意 不要污染棉塞和瓶口。 5. 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。 6. 灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒 温培养24h，确定无菌生长，方可使用。
实验二
细菌培养基的配制、灭 菌及接种、培养技术
1
第一部分 细菌培养基的制备、灭菌
目的要求 实验材料 实验程序
2
目的要求
熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。
3
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻 璃珠等。
目的要求
掌握从环境中分离培养细菌的方法，从 而获得若干种细菌纯培养技能。 掌握几种接种技术。
21
实验材料
无菌培养皿(直径90mm)10套、无菌移液管1mL2
支、10mL1支。
营养琼脂培养基1瓶，活性污泥或土壤或湖水1瓶， 无菌稀释水90mL1瓶、9mL5管。 其它：接种环、酒精灯、恒温箱。
22
c. 第三次蒸煮之后基本无菌，但为了确保无菌仍要放 在37℃恒温条件下培养24h，确定无菌才能使用。
18
实验程序4
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
过滤除菌法： 不能用加热灭菌的 液体物质（如维生 素、血清），一般 可用细菌过滤器进 行除菌。
19
第二部分 细菌纯种分离、培养和接
种技术
目的要求 实验材料 实验程序
9
实 验 程 序2
（培养基的配制方法和步骤） 3. 调pH值：用10％ NaOH调pH至7.6，用精 密pH试纸对照。 4. 分装：将培养基分装于5支试管，其余全部 倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。注意 不要污染棉塞和瓶口。 5. 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。 6. 灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒 温培养24h，确定无菌生长，方可使用。
实验二
细菌培养基的配制、灭 菌及接种、培养技术
1
第一部分 细菌培养基的制备、灭菌
目的要求 实验材料 实验程序
2
目的要求
熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。
3
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻 璃珠等。
细菌分离培养、接种技术及培养方法-精品医学课件
革兰染色法
Gram staining
临床微生物与免疫学检验教研室
一、实验目的
1.掌握细菌涂片制作方法； 2.掌握革兰染色法和细菌的基本形态； 3.了解革兰染色法的临床意义。
二、革兰染色原理
原理
细胞壁学说 等电点学说 化学学说
革兰阳性菌 细胞壁肽聚糖形成网状 结构，乙醇处理时，脱水 引起网状结构孔径变小， 通透性降低，结晶紫-碘 复合物不易脱去
实验步骤和方法
1)连续划线分离法：①将接种环火焰灭菌，待冷后取标 本少许；②左手持平板，五指固定平皿盖边缘，向外反 转手掌，装有培养基的平板于手掌内用拇指、小指和 无名指固定，并将平板边缘稍微提高呈现30～45度角， 置酒精灯前上方5～6cm；③右手持已取材的接种环， 先在平板一端涂布，然后快速大幅度左右来回以密而 不重的曲线形式作连续划线接种，使整个平板布满曲 线④划线完毕，将平板作好标记，置35℃孵育18-
革兰阴性菌
细胞壁肽聚糖含量低， 脂类物质含量高，乙醇处 理时，脂类物质溶解，细 胞壁的通透性增加，结晶 紫-碘复合物易脱去
三、实验器材和试剂
1.标本 ：金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的培养物。 2.试剂 ：革兰染液。 3.其他 ：载玻片、生理盐水、接种环、酒精灯、显微镜。
四、操作步骤
1. 细菌涂片制备 ⑴涂片：取洁净载玻片一张，按无菌的方法取1~2环生 理盐水于载玻片上，按无菌的方法各取葡萄球菌和大肠埃 菌 培养物少许，在生理盐水中均匀研磨，涂好的菌膜直径 1cm左右。 ⑵干燥：室温下自然干燥或于酒精火焰半尺高处烘干。 ⑶固定：火焰加热法。目的是杀死细菌，并使菌体与载 玻片粘附牢固，染色时不致于被染液和水冲掉。
培养方法
2 二氧化碳培养法 (1)二氧化碳孵箱：能自动调节二氧化碳的含量和温度， 使用较为方便。 (2)烛缸法：取有盖磨口标本缸或玻璃干燥器，在盖及磨 口处涂以凡士林。将接种细菌的培养基放入缸中，点燃 缸内蜡烛，加盖密封。当蜡烛燃烧时会消耗缸内氧气并 产生CO2，随着缸内氧气的逐渐减少，蜡烛会自行熄 灭，此时缸内CO2浓度约为5％左右。 (3)化学法(重碳酸钠一盐酸法)：（自学）
细菌的分离、培养和鉴定ppt课件
请大家自觉维持实验室的卫生和秩序！
Hale Waihona Puke 病料在接种培养基后，经过一段时间，应检查其 生长状况。首先用肉眼检查有无细菌生长；若有， 则需进一步检查菌落是否纯一。形态特征包括： 大小、形状、突起或扁平、凹陷、边缘（光滑、 波形、锯齿状、卷发状等）、颜色（红色、灰白 色、黄色等）、表面（光滑、粗糙等）、透明度 （不透明、半透明、透明等）和粘度等
细菌的分离、培养与鉴定
王欣欣
一、细菌的分离
1、从混杂微生物中获得单一菌株纯培养的 方法称为分离。 2、分离的目的在于从被检材料中、或者从 污染的众多杂菌中分离出纯的病原菌。
1)病料采集
病料：疑似细菌性疾病的水产养殖动物 以鱼为例，常见症状：体色发黑，体表溃 烂、充血、粘液增多，鳃、鳍破损，内脏 红肿，腹水，眼球凸出或浑浊，肛门红肿 等等。 活体病料→应考虑病原在疾病发展过程中 的部位（上述症状） 病料死后→应立即采集，越早越好
生化鉴定管
各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养 基质的分解能力也不一样，因而代谢产物 或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用
ATB Expression：自动化微生物鉴 定和药敏分析系统
分子生物学技术
分子生物学鉴定目前比较流行的主要是核 酸检测技术, 包括基因测序、指纹图谱技术、 基因探针技术、聚合酶链反应( PCR)、GC 含量测定等。
培养基的种类 ① 基础培养基：含有一般细菌生长繁殖需要的基本营养物
质；可作为一些特殊培养基的基础成分（普通营养琼脂） ② 加富培养基：在基础培养基中加入某些特殊营养物质
（如血液/血清、酵母浸膏或生长因子等）；用以培养对 营养要求高的微生物（2216E） ③ 选择培养基：利用细菌对某种或某些化学物质的敏感性 不同；在培养基中加入这类物质，利于所需分离的细菌生 长，而抑制不需要的细菌生长，从而达到分离某种微生物 的目的。（中国科学院海洋研究所专利：一种定量检测鳗弧 菌的选择性培养基及其制备）【利用鳗弧菌对氨苄青霉素的抗性 】 ④ 鉴别培养基：是一类含有某种特定化合物或试剂的培养 基。某种细菌在这种培养基上培养后，产生某种代谢产物， 能与这种特定化合物或试剂发生某种明显的特征性反应； 从而达到区分不同的微生物。（TCBS）
Hale Waihona Puke 病料在接种培养基后，经过一段时间，应检查其 生长状况。首先用肉眼检查有无细菌生长；若有， 则需进一步检查菌落是否纯一。形态特征包括： 大小、形状、突起或扁平、凹陷、边缘（光滑、 波形、锯齿状、卷发状等）、颜色（红色、灰白 色、黄色等）、表面（光滑、粗糙等）、透明度 （不透明、半透明、透明等）和粘度等
细菌的分离、培养与鉴定
王欣欣
一、细菌的分离
1、从混杂微生物中获得单一菌株纯培养的 方法称为分离。 2、分离的目的在于从被检材料中、或者从 污染的众多杂菌中分离出纯的病原菌。
1)病料采集
病料：疑似细菌性疾病的水产养殖动物 以鱼为例，常见症状：体色发黑，体表溃 烂、充血、粘液增多，鳃、鳍破损，内脏 红肿，腹水，眼球凸出或浑浊，肛门红肿 等等。 活体病料→应考虑病原在疾病发展过程中 的部位（上述症状） 病料死后→应立即采集，越早越好
生化鉴定管
各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养 基质的分解能力也不一样，因而代谢产物 或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用
ATB Expression：自动化微生物鉴 定和药敏分析系统
分子生物学技术
分子生物学鉴定目前比较流行的主要是核 酸检测技术, 包括基因测序、指纹图谱技术、 基因探针技术、聚合酶链反应( PCR)、GC 含量测定等。
培养基的种类 ① 基础培养基：含有一般细菌生长繁殖需要的基本营养物
质；可作为一些特殊培养基的基础成分（普通营养琼脂） ② 加富培养基：在基础培养基中加入某些特殊营养物质
（如血液/血清、酵母浸膏或生长因子等）；用以培养对 营养要求高的微生物（2216E） ③ 选择培养基：利用细菌对某种或某些化学物质的敏感性 不同；在培养基中加入这类物质，利于所需分离的细菌生 长，而抑制不需要的细菌生长，从而达到分离某种微生物 的目的。（中国科学院海洋研究所专利：一种定量检测鳗弧 菌的选择性培养基及其制备）【利用鳗弧菌对氨苄青霉素的抗性 】 ④ 鉴别培养基：是一类含有某种特定化合物或试剂的培养 基。某种细菌在这种培养基上培养后，产生某种代谢产物， 能与这种特定化合物或试剂发生某种明显的特征性反应； 从而达到区分不同的微生物。（TCBS）
《细菌的培养方法》课件
《细菌的培养方法》PPT 课件
细菌的培养是一项重要的实验技术，本课件将介绍细菌培养的各种方法和技 巧，以及培养过程中需要注意的条件和控制。
培养基的选择
培养基的种类和配方
了解不同种类和配方的培养基，选择适合特定细菌的培养基。
不同细菌所需的基本营养成分
掌握不同细菌所需的营养成分，为其提供合适的生长环境。
3
接种
学习不同接种方法，将细菌转移到培养基上进行生长。
4
培养箱的使用
了解培养箱的操作和使用技巧，提供稳定的培养环境。
常见细菌的培养方法
普通细菌的培养
介绍培养常见细菌的 方法和技巧，如大肠 杆菌等。
必需营养物细菌 的培养
了解必需营养物细菌 的培养方法，满足其 特殊的营养需求。
厌氧菌的培养
掌握培养厌氧菌的技 术，为其提供合适的 生长环境。
培养技术
1 纯培养
学习如何进行细菌的纯培养，以获得纯净的 细菌培养物进行研究。
2 混合培养
了解混合培养技术，用于培养多种细菌共存 的环境。
3 原代培养
学习如何进行原代培养，从样品中分离出单 个细菌菌落进行培养。
4 经过子代培养
掌握细菌的连续培养方法，保持菌株的稳定 性和可用性。
培养条件的控制
温度
难以培养细菌的 培养
解决难以培养细菌的 挑战，探索新的培养 方法和技术。
语
细菌培养的实际应用
探索细菌培养在科学研究、医学和工业中的实际应 用。
细菌培养的限制和进展
讨论细菌培养所面临的限制，并展望未来的发展和 创新。
了解细菌对温度的适 应性，并控制培养环 境的温度以促进生长。
pH值
掌握细菌生长所需的 最适pH范围，并调节 培养基的酸碱度。
细菌的培养是一项重要的实验技术，本课件将介绍细菌培养的各种方法和技 巧，以及培养过程中需要注意的条件和控制。
培养基的选择
培养基的种类和配方
了解不同种类和配方的培养基，选择适合特定细菌的培养基。
不同细菌所需的基本营养成分
掌握不同细菌所需的营养成分，为其提供合适的生长环境。
3
接种
学习不同接种方法，将细菌转移到培养基上进行生长。
4
培养箱的使用
了解培养箱的操作和使用技巧，提供稳定的培养环境。
常见细菌的培养方法
普通细菌的培养
介绍培养常见细菌的 方法和技巧，如大肠 杆菌等。
必需营养物细菌 的培养
了解必需营养物细菌 的培养方法，满足其 特殊的营养需求。
厌氧菌的培养
掌握培养厌氧菌的技 术，为其提供合适的 生长环境。
培养技术
1 纯培养
学习如何进行细菌的纯培养，以获得纯净的 细菌培养物进行研究。
2 混合培养
了解混合培养技术，用于培养多种细菌共存 的环境。
3 原代培养
学习如何进行原代培养，从样品中分离出单 个细菌菌落进行培养。
4 经过子代培养
掌握细菌的连续培养方法，保持菌株的稳定 性和可用性。
培养条件的控制
温度
难以培养细菌的 培养
解决难以培养细菌的 挑战，探索新的培养 方法和技术。
语
细菌培养的实际应用
探索细菌培养在科学研究、医学和工业中的实际应 用。
细菌培养的限制和进展
讨论细菌培养所面临的限制，并展望未来的发展和 创新。
了解细菌对温度的适 应性，并控制培养环 境的温度以促进生长。
pH值
掌握细菌生长所需的 最适pH范围，并调节 培养基的酸碱度。
医院常规空气细菌培养PPT课件
第14页/共23页
•
6、采集标本要无菌观念强、操作熟练、标记清楚明确。
第15页/共23页
• 医护人员手采样
第16页/共23页
• 1、采样时间，在接触病人、从事医疗活动前进行采样。
•
2、采样面积及方法，被检人五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉试子一支在双手指曲面从指根
到指端来回涂擦各两次（一只手涂擦面积30cm² )，并随之转动采样棉试子，剪去手接触部位，将棉试子放
• 次（一只手涂擦面积30 cm² )，并随之转动采样棉试子；
第19页/共23页
•
(10）打开试管塞，火焰消毒试管口、试管塞；
•
(11)用无菌剪剪去棉拭子手接触部分，将棉拭子投人装l0ml采样液的试管中；
•
(12）火焰消毒试管口、试管塞，盖严试管；
•
（13)将酒精灯盖严，整理用物；
•
(14）纪录采样时间、对象、采样人；
第5页/共23页
7、操作步骤与质量标
第6页/共23页
• 1)着装整洁，帽子遮住全部头发，口罩遮盖口鼻；
•
(2)备齐用物：治疗盘或篮、酒精灯、火柴、直径9cm普通营养琼脂平皿（根据需要备足量，分别标记
1,2,3,4,5；或东、西、南、北、中；或东南、西南、东北、西北、中）、灭菌棉拭子、试管、试管架、
笔、纪录单、计时表、湿度、温度计。
•
(3)剪指甲、洗手；
•
(4）选择消毒处理后与进行医疗活动之前的期间采集空气样本；
第7页/共23页
•
(5）室内面积＜30m2设一条对角线上取3点，即中心一点，两端各距离墙1 m。取出3个培养皿，将培养
皿翻转放在采样点上；室内面积＞30m2设东、西、南、北、中；或东南、西南、东北、西北、中5点，其中
•
6、采集标本要无菌观念强、操作熟练、标记清楚明确。
第15页/共23页
• 医护人员手采样
第16页/共23页
• 1、采样时间，在接触病人、从事医疗活动前进行采样。
•
2、采样面积及方法，被检人五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉试子一支在双手指曲面从指根
到指端来回涂擦各两次（一只手涂擦面积30cm² )，并随之转动采样棉试子，剪去手接触部位，将棉试子放
• 次（一只手涂擦面积30 cm² )，并随之转动采样棉试子；
第19页/共23页
•
(10）打开试管塞，火焰消毒试管口、试管塞；
•
(11)用无菌剪剪去棉拭子手接触部分，将棉拭子投人装l0ml采样液的试管中；
•
(12）火焰消毒试管口、试管塞，盖严试管；
•
（13)将酒精灯盖严，整理用物；
•
(14）纪录采样时间、对象、采样人；
第5页/共23页
7、操作步骤与质量标
第6页/共23页
• 1)着装整洁，帽子遮住全部头发，口罩遮盖口鼻；
•
(2)备齐用物：治疗盘或篮、酒精灯、火柴、直径9cm普通营养琼脂平皿（根据需要备足量，分别标记
1,2,3,4,5；或东、西、南、北、中；或东南、西南、东北、西北、中）、灭菌棉拭子、试管、试管架、
笔、纪录单、计时表、湿度、温度计。
•
(3)剪指甲、洗手；
•
(4）选择消毒处理后与进行医疗活动之前的期间采集空气样本；
第7页/共23页
•
(5）室内面积＜30m2设一条对角线上取3点，即中心一点，两端各距离墙1 m。取出3个培养皿，将培养
皿翻转放在采样点上；室内面积＞30m2设东、西、南、北、中；或东南、西南、东北、西北、中5点，其中
细菌培养及检测ppt课件
细菌的营养 物质
细菌的生长 繁殖
能力较差，必须利用有机物作为碳源，其代谢所 水、含碳化合物、含氮化合物、无无机盐 需能量大多从有机物氧化中获得。 1、细菌繁殖生长的条件：营养物质（五种营 致病菌多属异养菌，寄生菌多属自 养成分）、温度（最适生长温度37℃）、 pH 养菌。 ℃ （最适7.2～7.6）、渗透压（多在等渗条件 下）、气体（根据细菌呼吸类型） 2、细菌的繁殖方式：简单的二分裂
不仅含有这种细菌生
长繁殖所需要的各种 营养物质，还要有适 宜的PH。本实验所用 的牛肉膏蛋白胨培养 基，应用较广泛，适 于芽孢杆菌、金黄色
1、通过对牛肉 膏蛋白胨培养 基的配置，了 解配置培养基 的一般步骤和 方法。 2、了解灭菌的 基本原理，以 及实验中常用 的灭菌方法。 3、初步学会细 大肠杆菌的 菌培养的基本 生长状态 技术。
打开高压蒸汽灭菌锅，将里面的灭菌桶取出，向锅内加水 （最好用开水），水面与底架平齐为宜。 2 将扎好的试管管口向上竖放在灭菌桶内，再将灭菌桶放回灭菌 锅。注意：灭菌桶内的物品不能放得太挤，否则影响灭菌效果。 3 加盖，并将排气软管插入灭菌桶的排气槽内。以两两对称的 方式，同时旋紧相对的两个紧固螺栓，以防漏气。 4 排出锅内的冷空气。接通电源，当压力上升到49KPa时，打开排 气阀放气，当压力降到0是时，关闭排气阀。重复上述放气过程 98KPa时，控制火力大小，使压力维持在 5 当锅内的压力上升到 一次，以彻底排出锅内的冷空气。 98KPa左右20min。切断电源。 6 当压力降至0以后，打开排气阀，10min以后，旋松紧固螺 栓，取出试管。最后。将灭菌锅里的水排放干净。
细菌及其培养和检测第二讲细菌培养 第三讲大肠杆菌 第四讲金黄色葡萄球菌 第五讲真菌学及其检测 第六讲微生物学及其检测
细菌的培养及鉴定 ppt课件
细菌的培养及鉴定
抗酸染色步骤
1、涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
细菌的培养及鉴定
抗酸染色步骤
2、染色包括初染、脱色、复染三步。
初染
脱色
复染
冲洗
冲洗
石炭酸复红维持 3-5’ 3%盐酸酒精30 ’’ ~1’
冲洗
干燥 油镜观察
细菌的培养及鉴定
美蓝复染1 ’
抗酸染色结果
抗酸菌呈红色， 常堆积成团， 排列无序， 偶呈分枝状生长。 背景及非抗酸性细菌呈兰色。
细菌培养及鉴定
细菌的培养及鉴定
标本采集原则
1.及时采集微生物标本作病原学检查 2.在抗菌药物使用前采集标本 3.采样时严格执行无菌操作 4.标本容器须无菌，但不得有消毒剂 5.采样后立即送检 6.送检标本应注明细菌来的培源养及和鉴定检验目的
咳痰方法
病人先漱口，清洁口腔，去除表面的菌群 病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液 无痰可用3％～5％NaCl 5ml雾吸约5min导痰 以清晨第二口痰为佳 标本采集后放置时间不超过2小时
细菌的培养及鉴定
清洁中段尿液
尽量取早晨第一次尿液 嘱患者留取标本的前一天晚上少饮水 女性病人 ➢收集标本前用肥皂水冲洗外阴，再以灭菌清水
冲洗尿道口 ➢排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿 男性病人 ➢翻转包皮，清洗尿道口 ➢排出几毫升后，不停止尿流,采集中段尿
采集标本后立即送检！
细菌的培养及鉴定
常用的培养基种类和用途
细菌的培养及鉴定
革兰染色步骤
涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
细菌的培养及鉴定
固定的目的：
使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘 得更牢固； 可改变菌体对染料的通透性； 加热固定可杀死细菌，比较安全。
抗酸染色步骤
1、涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
细菌的培养及鉴定
抗酸染色步骤
2、染色包括初染、脱色、复染三步。
初染
脱色
复染
冲洗
冲洗
石炭酸复红维持 3-5’ 3%盐酸酒精30 ’’ ~1’
冲洗
干燥 油镜观察
细菌的培养及鉴定
美蓝复染1 ’
抗酸染色结果
抗酸菌呈红色， 常堆积成团， 排列无序， 偶呈分枝状生长。 背景及非抗酸性细菌呈兰色。
细菌培养及鉴定
细菌的培养及鉴定
标本采集原则
1.及时采集微生物标本作病原学检查 2.在抗菌药物使用前采集标本 3.采样时严格执行无菌操作 4.标本容器须无菌，但不得有消毒剂 5.采样后立即送检 6.送检标本应注明细菌来的培源养及和鉴定检验目的
咳痰方法
病人先漱口，清洁口腔，去除表面的菌群 病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液 无痰可用3％～5％NaCl 5ml雾吸约5min导痰 以清晨第二口痰为佳 标本采集后放置时间不超过2小时
细菌的培养及鉴定
清洁中段尿液
尽量取早晨第一次尿液 嘱患者留取标本的前一天晚上少饮水 女性病人 ➢收集标本前用肥皂水冲洗外阴，再以灭菌清水
冲洗尿道口 ➢排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿 男性病人 ➢翻转包皮，清洗尿道口 ➢排出几毫升后，不停止尿流,采集中段尿
采集标本后立即送检！
细菌的培养及鉴定
常用的培养基种类和用途
细菌的培养及鉴定
革兰染色步骤
涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
细菌的培养及鉴定
固定的目的：
使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘 得更牢固； 可改变菌体对染料的通透性； 加热固定可杀死细菌，比较安全。
生物菌种培养ppt课件
5
培养基的选择
细菌一般用营养琼脂培养基，特别指
出的是生孢梭菌用硫乙醇酸盐流体培 养基加琼脂制成的培养基进行传代。 真菌一般用改良马丁培养基。
2019 6
菌种的传代
菌种的复苏
菌种的确认 菌种的接种
菌种的保藏
2019 7
菌种的复苏
《中国药典》2005版规定，所用标准菌种 的传代次数不得超过5代。 从菌种保藏中心获得的冷冻干燥的菌种为 第0代，冷冻干燥的原始菌种开启后转种 后为第1代，直至到第3代为工作菌种。
46
二. 穿刺接种法： 用接种针取细菌少许，从培养基的中央垂 直刺入，接近管底但不接触管底，然后接 种针沿穿刺线原路退出。 主要用于生孢梭菌的传代。 三.液体接种法： 用接种针取菌少许，在试管内壁与液面交 界处的管壁上轻轻研磨，使菌混合于培养 液中。
2019 47
黑曲霉接种方法：
黑曲霉孢子悬液，可以保存在4℃环境，并应在一个月内 尽快完成转种操作。转种操作应在超净工作台（或相当此 环境）中进行，关闭风机，靠近酒精灯，拧开瓶盖，用无 菌吸管吹吸管内液体，取1～2滴滴在改良马丁琼脂斜面， 用吸管涂布均匀，置23～28℃培养5～7日，培养斜面形 态可参照下图。
2019
-
16
铜绿假单胞菌
形态特征：G-杆菌、直或微弯、较细长、散在排列、无 芽胞、有荚膜、单端有1～3根鞭毛。 培养特性：专性需氧，最适温度为35℃，但在42 ℃生 长是铜绿假单胞菌的一个特点。营养无特殊要求，普通 培养基上均能生长，菌落大小不一，扁平湿润，边缘不 齐，可产生各种水溶性色素，故使培养基变为蓝绿色。 在营养肉汤培养基中呈均匀混浊生长，常在其表面形成 菌膜。 分离培养：十六烷三甲基溴化铵培养基 生化反应：氧化酶试验（＋）（培养物呈粉红色渐变为 紫红色） 绿脓菌素试验（＋）（盐酸溶液呈粉红色）
《细菌分离培养》课件
在工业领域的应用
食品工业
在食品工业中，细菌分离培养用 于检测食品中的病原菌，保障食
品安全。
生物能源
利用细菌发酵产生生物燃料，如乙 醇、生物柴油等，替代化石燃料。
生物降解
某些细菌能够降解污染物，对环境 保护和治理具有重要意义。
06
展与未来发展方向
新技术的开发与应用
基因编辑技术
人工智能与机器学习
《细菌分离培养》 PPT课件
• 细菌分离培养概述 • 细菌分离技术 • 细菌培养技术 • 细菌的鉴定与分类 • 细菌分离培养的应用 • 展望与未来发展方向
目录
01
细菌分离培养概述
细菌分离培养的定义
细菌分离培养是指从混合菌群中分离 出单一菌种的过程，通过选择性培养 基和特定的培养条件，使目的菌种得 以繁殖并从其他微生物中分离出来。
高了分离效率。
03
细菌培养技术
培养基的种类与制备
固体培养基
用于细菌分离和纯化， 制备时需添加琼脂作为
凝固剂。
液体培养基
用于大量繁殖细菌，制 备相对简单。
选择性培养基
加入特定成分抑制某些 细菌生长，突出所需分
离的细菌。
鉴别培养基
根据细菌代谢产物不同 ，通过指示剂变化鉴别
不同细菌。
培养方法
01
02
05
04
菌种分离
将样品中的微生物接种到选择好的培 养基上，通过培养得到单一菌落。
02
细菌分离技术
划线分离法
总结词
通过在固体培养基上划线，使细菌分散生长的方法。
详细描述
划线分离法是最早的细菌分离技术之一，通过在固体培养基表面划线，使细菌 在划线区域内生长繁殖，形成单个菌落。该方法适用于细菌的纯培养分离。
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3
培养基的制备
一、培养基（culture medium）
n 由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使 用的混合营养物制品。
4
（一）培养基的类型及应用 1、按用途划分 1）基础培养基 能满足一般细菌生长繁殖的营养需要，如肉 汤（包括牛肉膏、蛋白胨、氯化钠等）。
2）营养培养基
在基础培养基中加入葡萄糖、血液、血清、 酵母浸膏等。
某些细菌如奈瑟菌在培养时需要提供5-10%二氧化碳；
12
二、细菌在培养基中的生长现象
1．固体培养 单个微生物在适宜的固体培养基表面生长、繁
殖到一定程度，可以形成肉眼可见的有一定形 态结构的细菌集团，称为菌落（colony）。 菌落特征是鉴别细菌的重要依据之一。
13
2 液体培养 14
表面生长 混浊生长 沉淀生长
22
操作与注意事项（1块／3人） 1、将平板底部用mark笔划线分成均匀的8个区，分别标 记为①②③④⑤⑥⑦⑧。 2、用右手的食指在①区上轻轻按一下，然后用肥皂在流 水下将手洗干净，用无菌棉签拭干右手食指皮肤上的水， 再轻轻在②区培养基上按一下。 3、用左手食指轻轻在③区按一下，然后用棉签蘸碘酒消 毒左手食指皮肤，待干后轻轻在④区按一下。 4、任取随身物品在⑤⑥⑦⑧区各按一下。 5、盖好平板，送37℃孵箱培育24小时后观察结果。
5
3）鉴别培养基
用于鉴别不同类型细菌的培养基。特定的化学 反应，产生明显的特征性变化，根据这种特征性变 化，可将该种细菌与其他细菌区分开来。
4）选择培养基
将某种细菌从混杂的细菌群体中分离出来的培养 基。根据不同种类细菌的特殊营养需求，在培养基中 加入相应的特殊营养物质；或者加入某些化学物质， 抑制不需要的细菌生长，有利于所需细菌的生长。
17
操作：将血平板打开盖，放到教 室的四个角上，静止15分钟后，合上 盖后送37℃孵箱培养。
沉降法简单易行，缺点是不够准 确。但它客观地反映了空气污染的程 度和卫生通风状况，对手术室、食品 业等有重要的参考意义，是判断空气 污染的指标之一。
18
据推算，每100cm²培养基在空气中暴露5 分钟，其表面接受自然沉降的细菌数约相当 于10升空气中所含的细菌量。
3 半固体培养
q 常用于检查细菌动力
无动力 有动力
15
本次试验的操作：
1. 空气中细菌的检查（沉降法，血平板） 2. 呼吸道细菌的检查（咽拭子或咳碟培养，
血平板） 3. 随身物品细菌检查（普通平板） 4. 细菌的接种法：液体、半固体、固体培养
基
16
检查空气中细菌的方法很多，沉降法 是其中的一种。它是利用含有细菌的尘粒 或气溶胶粒因重力作用而自然下降于培养 基表面，通过细菌培养，计数其菌落数， 而粗略地进行评估。
实验三、 细菌接种及分离培养； 自然界及正常人体的细菌检查
1
教学目标
1. 熟悉常用的纯种细菌的接种方法。 2. 掌握标本中细菌的分离培养技术。 3. 了解细菌广泛分布于自然界及正常人 体，树立“有菌观念”。 4. 深刻认识“无菌操作”对于微生物实 验及医药学实践的重要性。 5．进一步理解“正常菌群”的概念。
所以： 每m³空气中活菌数=（100cm²培养基上 菌落平均数/30）x1000。
19
鼻咽喉及口腔中细菌的检查 — 咳碟试验
鼻咽喉及口腔是人体与外界相通的腔道，常 常有不同种类的细菌存在。这些细菌常是条件 致病菌，在一般情况下并不致病，但是当机体 的抵抗下降时，可引起疾病而对机体造成危害。
由于寄居人体的关系，这些细菌对营养的 要求较高，所以常用含血的培养基进行分离。
多数病原菌最适酸碱度为PH7.2-7.6 霍乱弧菌耐碱 PH8.4-9.2 结核分支杆菌耐酸 PH6.5-6.8
11
气体环境
氧和二氧化碳
按细菌对氧的需求可分为四种类型： （1）专性需氧菌（obligate aerobe, O2 >20%） （2）兼性厌氧菌（facultative anaerobe, O2 : Yes or no ） （3）微需氧菌（microaerophilic bacterium , O2 :2~10% ） （4）专性厌氧菌（obligate anaerobe, O2 : No ）
23
注意事项： 用手指或物品按培养基时，接触面可稍微
大一些，但切勿用力，否则，易将培养基压破， 影响结果的判断。如果不慎压破，可在临近未 破处重新按一下。
8
（二）细菌生长繁殖的条件
1．充足的营养物质； 2．适宜的温度； 3．合适的酸碱度（ph）； 4．必要的气体环境；
9
温度
n 嗜冷菌 (10-15℃) n 嗜温菌（30-40℃）：绝大多数病原菌 n 嗜热菌（50-85℃）
10
pH
嗜中性菌（ 5 to 8） 嗜酸性菌（below 5.5） 嗜碱性菌（above 8.5）
5）厌氧培养基
6
大肠埃希菌
沙门菌
志贺菌
SS琼脂培养基 （Salmonella-Shigella agar）
7
2、根据物理状态划分
n 液体培养基：增菌 n 固体培养基（琼脂浓度为2－3％）：
增菌，分离培养 n 半固体培养基（琼脂浓度0.2-0.5%）：动
力检查，保种
液体培养基
固体培养基
半固体培养基
20
方法： （1块／3人） 打开血平板，将平板置于口腔前约15cm处，
对准培养基表面用力咳嗽3～4次，然后盖好平 板盖，放置于37℃孵箱内培养24小时观察 结果。
21
正常人体皮肤及随身物品的细菌检查
在人体的皮肤表面有多种细菌存在，用水洗手或 用肥皂洗手，可以除去皮肤上的污垢和灰尘，从而减少 手上细菌的数量，但并不能有效的杀死细菌。而日常医 疗、试验工作中常用的化学消毒剂如碘酒、酒精等有很 好的杀菌作用，它们不仅对细菌的繁殖体，对芽孢也有 一定的杀灭效果，所以在临床医疗中广泛应用。
2
实验主要内容
1．录相：细菌的培养方法 2．操作： ⑴空气中细菌的检查 （沉降法 血平板 1块/6人） ⑵呼吸道细菌的检查 （咽拭子法培养 血平板 1块/3人） ⑶随身物品的细菌检查（手指消毒前后 普通平板1块/3 人） ⑷细菌的接种法（液体、半固体、固体 1套/3人）
材料： ⑴ 大肠埃希菌培养物 （1支/6人） ⑵ 碘酒、75%酒精、棉签等 （1套/6人）
培养基的制备
一、培养基（culture medium）
n 由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使 用的混合营养物制品。
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（一）培养基的类型及应用 1、按用途划分 1）基础培养基 能满足一般细菌生长繁殖的营养需要，如肉 汤（包括牛肉膏、蛋白胨、氯化钠等）。
2）营养培养基
在基础培养基中加入葡萄糖、血液、血清、 酵母浸膏等。
某些细菌如奈瑟菌在培养时需要提供5-10%二氧化碳；
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二、细菌在培养基中的生长现象
1．固体培养 单个微生物在适宜的固体培养基表面生长、繁
殖到一定程度，可以形成肉眼可见的有一定形 态结构的细菌集团，称为菌落（colony）。 菌落特征是鉴别细菌的重要依据之一。
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2 液体培养 14
表面生长 混浊生长 沉淀生长
22
操作与注意事项（1块／3人） 1、将平板底部用mark笔划线分成均匀的8个区，分别标 记为①②③④⑤⑥⑦⑧。 2、用右手的食指在①区上轻轻按一下，然后用肥皂在流 水下将手洗干净，用无菌棉签拭干右手食指皮肤上的水， 再轻轻在②区培养基上按一下。 3、用左手食指轻轻在③区按一下，然后用棉签蘸碘酒消 毒左手食指皮肤，待干后轻轻在④区按一下。 4、任取随身物品在⑤⑥⑦⑧区各按一下。 5、盖好平板，送37℃孵箱培育24小时后观察结果。
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3）鉴别培养基
用于鉴别不同类型细菌的培养基。特定的化学 反应，产生明显的特征性变化，根据这种特征性变 化，可将该种细菌与其他细菌区分开来。
4）选择培养基
将某种细菌从混杂的细菌群体中分离出来的培养 基。根据不同种类细菌的特殊营养需求，在培养基中 加入相应的特殊营养物质；或者加入某些化学物质， 抑制不需要的细菌生长，有利于所需细菌的生长。
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操作：将血平板打开盖，放到教 室的四个角上，静止15分钟后，合上 盖后送37℃孵箱培养。
沉降法简单易行，缺点是不够准 确。但它客观地反映了空气污染的程 度和卫生通风状况，对手术室、食品 业等有重要的参考意义，是判断空气 污染的指标之一。
18
据推算，每100cm²培养基在空气中暴露5 分钟，其表面接受自然沉降的细菌数约相当 于10升空气中所含的细菌量。
3 半固体培养
q 常用于检查细菌动力
无动力 有动力
15
本次试验的操作：
1. 空气中细菌的检查（沉降法，血平板） 2. 呼吸道细菌的检查（咽拭子或咳碟培养，
血平板） 3. 随身物品细菌检查（普通平板） 4. 细菌的接种法：液体、半固体、固体培养
基
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检查空气中细菌的方法很多，沉降法 是其中的一种。它是利用含有细菌的尘粒 或气溶胶粒因重力作用而自然下降于培养 基表面，通过细菌培养，计数其菌落数， 而粗略地进行评估。
实验三、 细菌接种及分离培养； 自然界及正常人体的细菌检查
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教学目标
1. 熟悉常用的纯种细菌的接种方法。 2. 掌握标本中细菌的分离培养技术。 3. 了解细菌广泛分布于自然界及正常人 体，树立“有菌观念”。 4. 深刻认识“无菌操作”对于微生物实 验及医药学实践的重要性。 5．进一步理解“正常菌群”的概念。
所以： 每m³空气中活菌数=（100cm²培养基上 菌落平均数/30）x1000。
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鼻咽喉及口腔中细菌的检查 — 咳碟试验
鼻咽喉及口腔是人体与外界相通的腔道，常 常有不同种类的细菌存在。这些细菌常是条件 致病菌，在一般情况下并不致病，但是当机体 的抵抗下降时，可引起疾病而对机体造成危害。
由于寄居人体的关系，这些细菌对营养的 要求较高，所以常用含血的培养基进行分离。
多数病原菌最适酸碱度为PH7.2-7.6 霍乱弧菌耐碱 PH8.4-9.2 结核分支杆菌耐酸 PH6.5-6.8
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气体环境
氧和二氧化碳
按细菌对氧的需求可分为四种类型： （1）专性需氧菌（obligate aerobe, O2 >20%） （2）兼性厌氧菌（facultative anaerobe, O2 : Yes or no ） （3）微需氧菌（microaerophilic bacterium , O2 :2~10% ） （4）专性厌氧菌（obligate anaerobe, O2 : No ）
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注意事项： 用手指或物品按培养基时，接触面可稍微
大一些，但切勿用力，否则，易将培养基压破， 影响结果的判断。如果不慎压破，可在临近未 破处重新按一下。
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（二）细菌生长繁殖的条件
1．充足的营养物质； 2．适宜的温度； 3．合适的酸碱度（ph）； 4．必要的气体环境；
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温度
n 嗜冷菌 (10-15℃) n 嗜温菌（30-40℃）：绝大多数病原菌 n 嗜热菌（50-85℃）
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pH
嗜中性菌（ 5 to 8） 嗜酸性菌（below 5.5） 嗜碱性菌（above 8.5）
5）厌氧培养基
6
大肠埃希菌
沙门菌
志贺菌
SS琼脂培养基 （Salmonella-Shigella agar）
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2、根据物理状态划分
n 液体培养基：增菌 n 固体培养基（琼脂浓度为2－3％）：
增菌，分离培养 n 半固体培养基（琼脂浓度0.2-0.5%）：动
力检查，保种
液体培养基
固体培养基
半固体培养基
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方法： （1块／3人） 打开血平板，将平板置于口腔前约15cm处，
对准培养基表面用力咳嗽3～4次，然后盖好平 板盖，放置于37℃孵箱内培养24小时观察 结果。
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正常人体皮肤及随身物品的细菌检查
在人体的皮肤表面有多种细菌存在，用水洗手或 用肥皂洗手，可以除去皮肤上的污垢和灰尘，从而减少 手上细菌的数量，但并不能有效的杀死细菌。而日常医 疗、试验工作中常用的化学消毒剂如碘酒、酒精等有很 好的杀菌作用，它们不仅对细菌的繁殖体，对芽孢也有 一定的杀灭效果，所以在临床医疗中广泛应用。
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实验主要内容
1．录相：细菌的培养方法 2．操作： ⑴空气中细菌的检查 （沉降法 血平板 1块/6人） ⑵呼吸道细菌的检查 （咽拭子法培养 血平板 1块/3人） ⑶随身物品的细菌检查（手指消毒前后 普通平板1块/3 人） ⑷细菌的接种法（液体、半固体、固体 1套/3人）
材料： ⑴ 大肠埃希菌培养物 （1支/6人） ⑵ 碘酒、75%酒精、棉签等 （1套/6人）