第三章液相色谱分析演示文稿
合集下载
液相色谱法ppt课件
二、液相色谱分离原理及分类 和气相色谱一样，液相色谱分离系统也由两相——固定
相和流动相组成。液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键 合固定相（或在惰性载体表面涂上一层液膜）、离子交换树 脂或多孔性凝胶；流动相是各种溶剂。被分离混合物由流动 相液体推动进入色谱柱。根据各组分在固定相及流动相中的 吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异 进行分离。色谱分离的实质是样品分子（以下称溶质）与溶
分子筛及聚酰胺等。非极性吸附剂最常见的是活性炭。 极性吸附剂可进一步分为酸性吸附剂和碱性吸附剂。酸性
吸附剂包括硅胶和硅酸镁等，碱性吸附剂有氧化铝、氧化
21
第四节 液—固色谱法
镁和聚酰胺等。酸性吸附剂适于分离碱，如脂肪胺和芳香胺。 碱性吸附剂则适于分离酸性溶质，如酚、羧和吡咯衍生物等。
各种吸附剂中，最常用的吸附剂是硅胶，其次是氧化铝。
5
第一节 概 述
等，作为分析时选择余地大；而气相色谱并不可 能的。
③ 液相色谱通常在室温下操作，较低的温度，一般 有利于色谱分离条件的选择。 （3）由于液体的扩散性比气体的小105倍，因此，溶质 在液相中的传质速率慢，柱外效应就显得特别重要；而 在气相色谱中，柱外区域扩张可以忽略不计。 （4）液相色谱中制备样品简单，回收样品也比较容易， 而且回收是定量的，适合于大量制备。但液相色谱尚缺 乏通用的检测器，仪器比较复杂，价格昂贵。在实际应 用中，这两种色谱技术是互相补充的。
所用的固定相柱效低，分析周期长。而现代液相色谱法引用 了气相色谱的理论，流动相改为高压输送（最高输送压力可 达4.9107Pa）;谱（每米塔板数可达几 万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流
1
第一节 概 述
出物进行连续检测。因此，高效液相色谱具有分析速度快、 分离效能高、自动化等特点。所以人们称它为高压、高速、 高效或现代液相色谱法。
相和流动相组成。液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键 合固定相（或在惰性载体表面涂上一层液膜）、离子交换树 脂或多孔性凝胶；流动相是各种溶剂。被分离混合物由流动 相液体推动进入色谱柱。根据各组分在固定相及流动相中的 吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异 进行分离。色谱分离的实质是样品分子（以下称溶质）与溶
分子筛及聚酰胺等。非极性吸附剂最常见的是活性炭。 极性吸附剂可进一步分为酸性吸附剂和碱性吸附剂。酸性
吸附剂包括硅胶和硅酸镁等，碱性吸附剂有氧化铝、氧化
21
第四节 液—固色谱法
镁和聚酰胺等。酸性吸附剂适于分离碱，如脂肪胺和芳香胺。 碱性吸附剂则适于分离酸性溶质，如酚、羧和吡咯衍生物等。
各种吸附剂中，最常用的吸附剂是硅胶，其次是氧化铝。
5
第一节 概 述
等，作为分析时选择余地大；而气相色谱并不可 能的。
③ 液相色谱通常在室温下操作，较低的温度，一般 有利于色谱分离条件的选择。 （3）由于液体的扩散性比气体的小105倍，因此，溶质 在液相中的传质速率慢，柱外效应就显得特别重要；而 在气相色谱中，柱外区域扩张可以忽略不计。 （4）液相色谱中制备样品简单，回收样品也比较容易， 而且回收是定量的，适合于大量制备。但液相色谱尚缺 乏通用的检测器，仪器比较复杂，价格昂贵。在实际应 用中，这两种色谱技术是互相补充的。
所用的固定相柱效低，分析周期长。而现代液相色谱法引用 了气相色谱的理论，流动相改为高压输送（最高输送压力可 达4.9107Pa）;谱（每米塔板数可达几 万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流
1
第一节 概 述
出物进行连续检测。因此，高效液相色谱具有分析速度快、 分离效能高、自动化等特点。所以人们称它为高压、高速、 高效或现代液相色谱法。
《液相色谱分析法》课件
液相色谱分析法
,
汇报人：
目录
01 添 加 目 录 项 标 题 03 液 相 色 谱 分 析 法 的
技术原理
05 液 相 色 谱 分 析 法 的 优缺点
02 液 相 色 谱 分 析 法 的 概述
04 液 相 色 谱 分 析 法 的 应用实例
06
液相色谱分析法的 发展趋势和未来展
望
Part One
单击添加章节标题
数据处理：对检测到的信号 进行处理，得到样品的色谱 图和定量结果
结果分析：根据色谱图和定 量结果，对样品进行分析和 鉴定
Part Four
液相色谱分析法的 应用实例
在药物分析中的应用
药物稳定性研究：研究药物 在储存过程中的稳定性
药物成分分析：分析药物中 的有效成分、杂质等
药物质量控制：控制药物的 质量，确保药物的安全性和
液相色谱分析法的研究热点和前沿技术
超高效液相色谱技术：提高分离效率，降 低检测限
生物样品分析：应用于生物医药、食品安 全等领域
质谱联用技术：提高检测灵敏度和准确性
环境样品分析：应用于环境监测、污染治 理等领域
微流控芯片技术：实现样品的微型化和快 速分析
智能化、自动化技术：提高分析效率，降 低人工操作误差
添加标题
核磁共振检测器：利用核磁共振原理，检测样品中的核磁共振信号，用于结构分析和定量分析
液相色谱分析法的操作流程
样品制备：将样品进行适当 的处理，如稀释、过滤等
样品注入：将样品注入到色 谱柱中
色谱分离：样品在色谱柱 中分离，根据不同组分的 性质和亲和力进行分离
检测器检测：样品经过检 测器时，检测器对样品进 行检测，得到相应的信号பைடு நூலகம்
,
汇报人：
目录
01 添 加 目 录 项 标 题 03 液 相 色 谱 分 析 法 的
技术原理
05 液 相 色 谱 分 析 法 的 优缺点
02 液 相 色 谱 分 析 法 的 概述
04 液 相 色 谱 分 析 法 的 应用实例
06
液相色谱分析法的 发展趋势和未来展
望
Part One
单击添加章节标题
数据处理：对检测到的信号 进行处理，得到样品的色谱 图和定量结果
结果分析：根据色谱图和定 量结果，对样品进行分析和 鉴定
Part Four
液相色谱分析法的 应用实例
在药物分析中的应用
药物稳定性研究：研究药物 在储存过程中的稳定性
药物成分分析：分析药物中 的有效成分、杂质等
药物质量控制：控制药物的 质量，确保药物的安全性和
液相色谱分析法的研究热点和前沿技术
超高效液相色谱技术：提高分离效率，降 低检测限
生物样品分析：应用于生物医药、食品安 全等领域
质谱联用技术：提高检测灵敏度和准确性
环境样品分析：应用于环境监测、污染治 理等领域
微流控芯片技术：实现样品的微型化和快 速分析
智能化、自动化技术：提高分析效率，降 低人工操作误差
添加标题
核磁共振检测器：利用核磁共振原理，检测样品中的核磁共振信号，用于结构分析和定量分析
液相色谱分析法的操作流程
样品制备：将样品进行适当 的处理，如稀释、过滤等
样品注入：将样品注入到色 谱柱中
色谱分离：样品在色谱柱 中分离，根据不同组分的 性质和亲和力进行分离
检测器检测：样品经过检 测器时，检测器对样品进 行检测，得到相应的信号பைடு நூலகம்
高效液相色谱法教学精【全】ppt课件
§1-3 色谱柱的分离效率
一、塔板理论 塔板理论认为: 一根柱子可以分为n
段，每段内组分在两相间迅速达到平衡， 把每一段称为一块理论塔板。
设柱长为L，理论塔板高度为H，则
H=L/Ｎ
Ｎ为理论塔板数。
理论塔板数一N
①色谱峰对称 ： N 16(tR )2
说明：
tW
a. 在给定的操作条件下，N几乎相同
三、高效液相色谱法的特点
高压: 以液体作为流动相，液体流经色谱柱时，
受到阻力较大 必须对流动相施加高压。 一般可达到150～300kg／cm2， 甚至可达700kg／cm2以上。
高速:
分析时间较经典液相色谱少得多（交 换速度快），一个复杂样品的分析仅需几 分钟到几十分钟。
高效:
气相色谱的分离效能很高，高效液相 色谱的柱效则更高（化学键合相），一般 约可达 6000理论塔板／米
②一定色谱条件下，对k’有差异的组
分，则柱效愈高，分离效果愈好。
塔板理论的特点和不足：
(1)当L一定时，N 越大(H 越小)，被测组
分在柱内被分配的次数越多，柱效越 高，所得色谱峰越窄。 (2)柱效不能表示被分离组分的实际分离
效果：如两组分的分配系数K 相同，
无论该色谱柱的柱效多大，都无法 分离。
① 柱效较高，ΔK(分配系数)较大，完全分离。 ② ΔK 不是很大，柱效较高，峰较窄，基本分离。 ③ 柱效较低，ΔK 较大，但分离的不好。 ④ ΔK 小，柱效低，分离效果更差。
一．分离度的数学表达式：
Rs
2(tR 2 tR1 ) W2 W1
2(tR 2 tR1 )
1.699 [Y1/ 2(2) Y1/ 2(1) ]
于世林编著)
第一章 高效液相色谱法基本原理 §1－1 概述 一、色谱法
第三章 高效液相色谱法(1).ppt
扩散项B/U较小，可以忽略不计，
即：
H=A+Cu
故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状
不同，如图所示。
1）液体的黏度比气体大一百倍， 密度为气体的一千倍，故降低传质 阻力是提高柱效主要途径。 2）由速率方程，降低固定相粒度 可提高柱效。 3）液相色谱中，不可能通过增加 柱温来改善传质，恒温。 4）改变淋洗液组成、极性是改善 分离的最直接的因素。
葡聚糖凝胶、琼脂凝胶等。多孔网状结构；水为流动相。 适用于常压排阻分离。
（2）半硬质凝胶 苯乙烯-二乙烯基苯交联共聚物，有机凝胶；非极性有机
溶剂为流动相，不能用丙酮、乙醇等极性溶剂 （3）硬质凝胶
多孔硅胶、多孔玻珠等；化学稳定性、热稳定性好、机 械强度大，流动相性质影响小，可在较高流速下使用。 可控孔径玻璃微球，具有恒定孔径和窄粒度分布。
阳离子交换：R-SO3H + M+ = R-SO3M + H+
阴离子交换：R-NR4OH + X- = R-NR4X + OH-
应
用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。
四、离子色谱
离子色谱是在20世纪70年代中期发展起来的一中 技术，其与离子交换色谱的区别是其采用了特 制的、具有极低交换容量的离子交换树脂作为 柱填料，并采用淋洗液抑制技术和电导检测器， 是测定混合阴离子的有效方法。
缺
点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾。
二、液-液分配色谱 固定相与流动相均为液体（互不相溶）；
基本原理：组分在固定相和流动相上的分配； 流 动 相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，
即流动相的极性小于固定液的极性（正相），反之， 流动相的极性大于固定液的极性（反相）。正相与反 相的出峰顺序相反； 固 定 相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合 到硅胶担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。
第三章液相色谱分析法
05:20:20
选择内容
第一节 高效液相色谱的特点与仪器
feature and instrument of HPLC
第二节 基本原理与主要分离类型
basic principle and main separating type
第三节 固定相与流动相
stationary phase and mobile phase
[动画]
05:20:20
1.离子色谱法原理
离子交换原理，与传统离子交 换的不同点： 采用交换容量非常低的特制离子 交换树脂为固定相； 细颗粒柱填料，高柱效；采用高 压输液泵； 低浓度淋洗液或本底电导抑制（在分离柱后，采用抑制柱 来消除淋洗液的高本底电导）； 可采用电导检测器，快速分离分析微量无机离子混合物； 各种抑制装置及无抑制方法的出现，发展迅速。
第四节 影响分离的因素与操作条件选择
factors influenced separation and choice of operation condition
第五节 离子色谱法
ion chromatograph
第六节 超临界流体色谱
supercritical fluid chromatograph
05:20:20
离子色谱连续抑制装置图
05:20:20
三、离子色谱的应用
application of IC
阴离子分析: 双柱；薄壳型阴离子交换树脂分离柱(3×250mm), 流 动 相 ： 0 . 0 0 3 mol·L-1 NaHCO3 / 0.0024 mol·L-1 Na2CO3，流量138 mL/hr。 七种阴离子在20分钟内基本上得到完全分离，各组 分含量在3～50 ppm。
05:20:20
选择内容
第一节 高效液相色谱的特点与仪器
feature and instrument of HPLC
第二节 基本原理与主要分离类型
basic principle and main separating type
第三节 固定相与流动相
stationary phase and mobile phase
[动画]
05:20:20
1.离子色谱法原理
离子交换原理，与传统离子交 换的不同点： 采用交换容量非常低的特制离子 交换树脂为固定相； 细颗粒柱填料，高柱效；采用高 压输液泵； 低浓度淋洗液或本底电导抑制（在分离柱后，采用抑制柱 来消除淋洗液的高本底电导）； 可采用电导检测器，快速分离分析微量无机离子混合物； 各种抑制装置及无抑制方法的出现，发展迅速。
第四节 影响分离的因素与操作条件选择
factors influenced separation and choice of operation condition
第五节 离子色谱法
ion chromatograph
第六节 超临界流体色谱
supercritical fluid chromatograph
05:20:20
离子色谱连续抑制装置图
05:20:20
三、离子色谱的应用
application of IC
阴离子分析: 双柱；薄壳型阴离子交换树脂分离柱(3×250mm), 流 动 相 ： 0 . 0 0 3 mol·L-1 NaHCO3 / 0.0024 mol·L-1 Na2CO3，流量138 mL/hr。 七种阴离子在20分钟内基本上得到完全分离，各组 分含量在3～50 ppm。
05:20:20
液相色谱分析演示文稿
一、吸附色谱（液－固吸附色谱） ➢吸附色谱是基于各组分在固体吸附剂表面上具有不同吸附能 力而进行分离。 以固体吸附剂为固定相，如极性的硅胶、氧化铝、分 子筛和非极性的活性炭等（较常使用硅胶）。流动相可 以是各种不同极性的一元或多元溶剂。 宜于分离极性不同或含极性基团相同但数目不同的试样，也 适于分离异构体，但不宜于分离同系物。
3333
第33页，共50页。
2. 固定相
3. 流动相的要求：能溶解样品且与凝胶相似（润湿凝 胶）、粘度小（增加扩散速度）。
3344
第34页，共50页。
第四节 色谱分离方法的选择
一般可根据试样相对分子质量范围、溶解度及分 子结构等进行分离方法的初步选择。 一、根据相对分子质量选择
二、根据溶解性选择
1144 第14页，共50页。
➢光电二极管阵列检测器
1155
第15页，共50页。
皮质酮
可的松
氟美松
波长
快速扫描—光电二极管阵列（PDA）检测所获得的三维色谱-光谱图
1166
第16页，共50页。
2）示差折光检测器
平面镜
样品
透镜
遮光板
光源
参比
光学零
光电转换 调零
放大器
记录仪
原理：利用两束相同角度的光照射溶剂相和样品+溶剂 相，利用二者对光的折射率不同。
微孔
微孔
微孔型
离子交换层
惰性核
2277
薄膜型
大孔型
离子交换剂硅胶层涂覆
惰性核
表面多孔型
第27页，共50页。
3. 流动相 离子交换色谱流动相为无机酸或无机碱的盐类缓冲
溶液（有一定pH和离子强度），通过改变pH、缓冲剂 类型、离子强度、加入有机试剂和配位剂等条件来控 制分配比k，改变交换剂的选择性，进而影响样品待测物的
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
04:39:46
04:39:46
（4）进样装置 流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的
六通阀进样装置，其结构如图所示：
04:39:46
（5）高效分离柱 柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长
5～40 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高 柱效。
04:39:46
（6）液相色谱检测器 a. 紫外检测器，应用最广，对大部分有机化合物有 响应。特点：
04:39:46
（2）脱气装置 真空脱气装置： 将流动相通过一段由多孔性合成
树脂膜制造的输液管，该输液管外有真空容器，真空 泵工作时，膜外侧被减压，分子量小的氧气、氮气、 二氧化碳就会从膜内进入膜外而被脱除。一般的真空 脱气装置有多条流路，可同时对多个溶液进行脱气。
04:39:46
（3）梯度淋洗装置 在进行多成分的复杂样品的分离时，经常会碰
灵敏度高；线形范围宽； 流通池可做的很小（1mm × 10mm ，容积 8μL）； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗脱。
04:39:46
b. 光电二极管阵列检测器 紫外检测器的重要进展；1024个二极管阵列，各检测特 定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。
04:39:46
二、高效液相色谱法的特点
高压、高效、高速、高灵敏度、应用范围广 高沸点、热不稳定有机物及生化试样的高效分离分析 方法。
04:39:46
三、高效液相色谱仪器（Waters）
04:39:46
三、高效液相色谱仪器（安捷伦）
04:39:46
三、高效液相色谱仪器（岛津）
04:39:46
高灵敏度、高选择性； 对多环芳烃，维生素B、 黄曲霉素、卟啉类化合物 、农药、药物、氨基酸、 甾类化合物等有响应；
04:39:46
e. 蒸发光散射检测器
ELSD是基于溶质 的光散射性质的检 测器。由雾化器、 加热漂移管（溶剂 蒸发室）、激光光 源和光检测器（光 电转换器）等部件 构成。
第三章 高效液相色谱分析法
04:39:46
04:39:46
光电二极管阵列检测器
04:39:46
c.示差折光检测器
除紫外检测器之外应用最多的检测器； 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光 指数差值。差值与浓度呈正比； 通用型检测器 （每种物质具有不 同的折光指数）； 灵敏度低、对 温度敏感、不能用 于梯度洗脱。
d. 荧光检测器
04:39:46
（2）脱气装置
目前，液相色谱流动相脱气使用较多的是离线 超声波振荡脱气、在线惰性气体鼓泡吹扫脱气和在 线真空脱气。
超声波振荡脱气： 将配制好的流动相连容器放入超声 水槽中脱气10-20min。
惰性气体鼓泡吹扫脱气： 将气源（钢瓶）中的气体（ 氦气）缓慢而均匀地通入储液罐中的流动相中，氦气 分子将其它气体分子置换和顶替出去，而它本身在溶 剂中的溶解度又很小，微量氦气所形成的小气泡对检 测无影响。色谱的发展
气相色谱只适合分析较易挥发、且化学性 质稳定的有机化合物，而HPLC则只需要样品 能够制成溶液，大多数情况下不需要加热，所 以对样品的挥发性没有要求。因此对于那些用 气相色谱难以分析的物质，如挥发性差、极性 强、具有生物活性、热稳定性差的物质（约占 有机物质的75％～80％）也能够分析。现在， HPLC的应用范围已经远远超过气相色谱，位 居色谱法之首。
04:39:46
单活塞往复柱塞泵
04:39:46
04:39:46
气动放大泵
04:39:46
（2）脱气装置
流动相溶液往往因溶解有氧气或混入了空气而形 成气泡。气泡进入检测器后会在色谱图上出现尖锐的 噪音峰。小气泡慢慢聚集后会变成大气泡，大气泡进 入流路或色谱柱中会使流动相的流速变慢或出现流速 不稳定，致使基线起伏。气泡一旦进入色谱柱,排出 这些气泡则很费时间。在荧光检测中,溶解氧还会使 荧光淬灭。溶解气体还可能引起某些样品的氧化或使 溶液pH值发生变化。
第三章液相色谱分析演示文稿
04:39:46
（优选）第三章液相色谱分析
一、高效液相色谱的发展
在所有色谱技术中，液相色谱法是最早（1903年 ）发明的，但其初期发展比较慢。
20世纪60年代后期，将已经发展得比较成熟的气相 色谱的理论与技术应用到液相色谱上来，使液相色谱 得到了迅速的发展。液相色谱仪于1969年商品化。从 此，这种分离效率高、分析速度快的液相色谱就被称 为高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）。
四、流程及主要部件
1.流程
04:39:46
2.主要部件
(1) 高压输液泵 主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm） ，液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因 此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。
04:39:46
(1) 高压输液泵 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀 等特性 可分为恒流泵和恒压泵两大类。 恒流泵包括气动泵和机械泵两大类 机械泵：螺旋传动注射泵、单活塞往复柱塞泵、双 活塞往复泵和往复式隔膜泵
第二节 主要分离类型与原理
04:39:46
一、 液-固吸附色谱
固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常 使用的是5～10μm的硅胶吸附剂； 流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：组分在固定相吸附剂上有吸附作用，且 吸附力有差异，经过多次吸附与解吸而被分离；
适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样， 对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性； 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；
到前面的一些成分分离不完全，而后面的一些成分 分离度太大，且出峰很晚和峰型较差。为了使保留 值相差很大的多种成分在合理的时间内全部洗脱并 达到相互分离，往往要用到梯度洗脱技术。
04:39:46
梯度洗脱操作
高压梯度： 一般只用于二元梯度，即用两个高压泵 分别按设定的比例输送A和B两种溶液至混合器，混 合器是在泵之后，即两种溶液是在高压状态下进行 混合的 。 低压梯度： 只需一个高压泵，与等度洗脱输液系统 相比，就是在泵前安装了一个比例阀，混合就在比 例阀中完成。
04:39:46
（4）进样装置 流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的
六通阀进样装置，其结构如图所示：
04:39:46
（5）高效分离柱 柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长
5～40 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高 柱效。
04:39:46
（6）液相色谱检测器 a. 紫外检测器，应用最广，对大部分有机化合物有 响应。特点：
04:39:46
（2）脱气装置 真空脱气装置： 将流动相通过一段由多孔性合成
树脂膜制造的输液管，该输液管外有真空容器，真空 泵工作时，膜外侧被减压，分子量小的氧气、氮气、 二氧化碳就会从膜内进入膜外而被脱除。一般的真空 脱气装置有多条流路，可同时对多个溶液进行脱气。
04:39:46
（3）梯度淋洗装置 在进行多成分的复杂样品的分离时，经常会碰
灵敏度高；线形范围宽； 流通池可做的很小（1mm × 10mm ，容积 8μL）； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗脱。
04:39:46
b. 光电二极管阵列检测器 紫外检测器的重要进展；1024个二极管阵列，各检测特 定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。
04:39:46
二、高效液相色谱法的特点
高压、高效、高速、高灵敏度、应用范围广 高沸点、热不稳定有机物及生化试样的高效分离分析 方法。
04:39:46
三、高效液相色谱仪器（Waters）
04:39:46
三、高效液相色谱仪器（安捷伦）
04:39:46
三、高效液相色谱仪器（岛津）
04:39:46
高灵敏度、高选择性； 对多环芳烃，维生素B、 黄曲霉素、卟啉类化合物 、农药、药物、氨基酸、 甾类化合物等有响应；
04:39:46
e. 蒸发光散射检测器
ELSD是基于溶质 的光散射性质的检 测器。由雾化器、 加热漂移管（溶剂 蒸发室）、激光光 源和光检测器（光 电转换器）等部件 构成。
第三章 高效液相色谱分析法
04:39:46
04:39:46
光电二极管阵列检测器
04:39:46
c.示差折光检测器
除紫外检测器之外应用最多的检测器； 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光 指数差值。差值与浓度呈正比； 通用型检测器 （每种物质具有不 同的折光指数）； 灵敏度低、对 温度敏感、不能用 于梯度洗脱。
d. 荧光检测器
04:39:46
（2）脱气装置
目前，液相色谱流动相脱气使用较多的是离线 超声波振荡脱气、在线惰性气体鼓泡吹扫脱气和在 线真空脱气。
超声波振荡脱气： 将配制好的流动相连容器放入超声 水槽中脱气10-20min。
惰性气体鼓泡吹扫脱气： 将气源（钢瓶）中的气体（ 氦气）缓慢而均匀地通入储液罐中的流动相中，氦气 分子将其它气体分子置换和顶替出去，而它本身在溶 剂中的溶解度又很小，微量氦气所形成的小气泡对检 测无影响。色谱的发展
气相色谱只适合分析较易挥发、且化学性 质稳定的有机化合物，而HPLC则只需要样品 能够制成溶液，大多数情况下不需要加热，所 以对样品的挥发性没有要求。因此对于那些用 气相色谱难以分析的物质，如挥发性差、极性 强、具有生物活性、热稳定性差的物质（约占 有机物质的75％～80％）也能够分析。现在， HPLC的应用范围已经远远超过气相色谱，位 居色谱法之首。
04:39:46
单活塞往复柱塞泵
04:39:46
04:39:46
气动放大泵
04:39:46
（2）脱气装置
流动相溶液往往因溶解有氧气或混入了空气而形 成气泡。气泡进入检测器后会在色谱图上出现尖锐的 噪音峰。小气泡慢慢聚集后会变成大气泡，大气泡进 入流路或色谱柱中会使流动相的流速变慢或出现流速 不稳定，致使基线起伏。气泡一旦进入色谱柱,排出 这些气泡则很费时间。在荧光检测中,溶解氧还会使 荧光淬灭。溶解气体还可能引起某些样品的氧化或使 溶液pH值发生变化。
第三章液相色谱分析演示文稿
04:39:46
（优选）第三章液相色谱分析
一、高效液相色谱的发展
在所有色谱技术中，液相色谱法是最早（1903年 ）发明的，但其初期发展比较慢。
20世纪60年代后期，将已经发展得比较成熟的气相 色谱的理论与技术应用到液相色谱上来，使液相色谱 得到了迅速的发展。液相色谱仪于1969年商品化。从 此，这种分离效率高、分析速度快的液相色谱就被称 为高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）。
四、流程及主要部件
1.流程
04:39:46
2.主要部件
(1) 高压输液泵 主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm） ，液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因 此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。
04:39:46
(1) 高压输液泵 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀 等特性 可分为恒流泵和恒压泵两大类。 恒流泵包括气动泵和机械泵两大类 机械泵：螺旋传动注射泵、单活塞往复柱塞泵、双 活塞往复泵和往复式隔膜泵
第二节 主要分离类型与原理
04:39:46
一、 液-固吸附色谱
固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常 使用的是5～10μm的硅胶吸附剂； 流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：组分在固定相吸附剂上有吸附作用，且 吸附力有差异，经过多次吸附与解吸而被分离；
适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样， 对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性； 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；
到前面的一些成分分离不完全，而后面的一些成分 分离度太大，且出峰很晚和峰型较差。为了使保留 值相差很大的多种成分在合理的时间内全部洗脱并 达到相互分离，往往要用到梯度洗脱技术。
04:39:46
梯度洗脱操作
高压梯度： 一般只用于二元梯度，即用两个高压泵 分别按设定的比例输送A和B两种溶液至混合器，混 合器是在泵之后，即两种溶液是在高压状态下进行 混合的 。 低压梯度： 只需一个高压泵，与等度洗脱输液系统 相比，就是在泵前安装了一个比例阀，混合就在比 例阀中完成。