PCR反应体系电子教案
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在150μl的Eppendorf管中依次加入：
ddH2O 12.25μl
10×PCR buffer 2μl
10mM dNTP mix 1μl
Taq 0.25μl
Primer 1 1 μl
Primer 2 1 μl
基因组DNA 2μl（10-50ug/ul，如果高于此浓度需要稀释）
以上先配好混合，分装，在分别加入基因组
基因组DNA（2μl如果浓度太大稀释10-100倍）
Total（20μl）
充分混匀后，于PCR仪中进行扩增反应。
PCR的扩增参数为：
95℃预变性5min，94℃变性45 s，62℃退火45s ，72℃延伸1 min30s，30个循环后，72℃延伸7 min。将扩增后的目的片段在电泳缓冲液、1%琼脂糖凝胶、和90V电压条件下电泳30min，以检测其大小、纯度和亮度。
注：
当模板DNA的GC含量为55%或更低的线性DNA时我们推荐常规PCR的变形条件是94-95变形45s。当DNA的GC含量超过55%时需要更高的变形温度。
退火温度低于60有很多非特异扩增，测序的时候条带会很乱。
如果退火温度太高引物不能与模板很好地复性。复性温度通常在比理论计算的引物和模板的溶解温度低3-5度的条件下进行。最好通过对复性温度比两条寡核苷酸引物的溶解温度按低2-10度范围内进行系列PCR预实验来对复性条件进行优化。
对Taq酶来说最适延伸温度为72-78℃。