微生物遗传育种实验-PowerPointPresent

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5、知人者智，自知者明。胜人者有力 ，自胜 者强。 20.9.72 0.9.716 :06:271 6:06:27 Septe mber 7, 2020
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6、意志坚强的人能把世界放在手中像 泥块一 样任意 揉捏。 2020年 9月7日 星期一 下午4 时6分27 秒16:0 6:2720. 9.7
三、实验材料
•源自文库1）菌种： 细菌1299
• 2）培养基： 细菌完全培养基； 细菌基本培养基 无氮基本培养基；2 倍氮源基本培养基
3）仪器： 台式离心机、恒温培养箱、电炉等
四、实验步骤
（一）培养基制备、细菌对数期培养 1.配制培养基：每组的配量 肉汤培养基：100ML 取10ML分装2支小试管，包扎，灭菌。 完全培养基：在剩余的90ML肉汤培养基中加入琼脂，装入 三角瓶中，包扎，灭菌。 无氮培养基：100ML 取10ML分装2支大试管，包扎，灭菌。 2倍氮培养基：在剩余的90ML无氮培养基中加入0.2% （NH4）2 SO4 ，装入三角瓶中，包扎，灭菌。 生理盐水：100ML
• 10、你要做多大的事情，就该承受多大的压力。9/7/20
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• 11、自己要先看得起自己，别人才会看得起你。9/7/20
谢 谢 大 家 20 4:06 PM9/7/2020 4:06 PM20.9.720.9.7
• 12、这一秒不放弃，下一秒就会有希望。7-Sep-207 Sep tember 202020.9.7
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7、最具挑战性的挑战莫过于提升自我 。。20 20年9 月下午4 时6分2 0.9.716 :06Sep tember 7, 2020
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8、业余生活要有意义，不要越轨。20 20年9 月7日星 期一4 时6分27 秒16:0 6:277 September 2020
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9、一个人即使已登上顶峰，也仍要自 强不息 。下午 4时6分 27秒下 午4时6 分16:0 6:2720. 9.7
融化CM、MM培养基，各制备一个平板。 在平板下贴好画有20个小格的纸。 • 2.用逐个检出法检测 用牙签挑取20个长势 良好的菌落，先接在
MM培养基的一个位 点上，再接CM培养 基的相应位点上。 32度培养48小时。
（六）测定生长谱
1.制备MM平板 在培养皿底部划分5个区域，做好标记 2.将可能是营养缺陷型的菌株，制备菌悬液，接
注：配方见《微生物实验讲义》69页。
2.做对数期培养： 取一支肉汤培养基，接入1299，于30度下培养24 小时。
（二）制备菌悬液、紫外线诱变 1.离心洗涤菌体： 将对数期培养的菌液，进行2500转/分离心5分， 倒掉上清夜，加入5ML生理盐水振荡混匀后，再 进行一次离心。
2.配制菌液和诱变 ： • 菌液：在离心后的菌体中加入生理盐水，振荡混
• 13、无论才能知识多么卓著，如果缺乏热情，则无异 纸上画饼充饥，无补于事。Monday, September 07, 2020
7-Sep-2020.9.7
• 14、我只是自己不放过自己而已，现在我不会再逼自 己眷恋了。20.9.716:06:277 September 202016:06
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2、阅读一切好书如同和过去最杰出的 人谈话 。16:0 6:2716: 06:2716 :069/7/ 2020 4:06:27 PM
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3、越是没有本领的就越加自命不凡。 20.9.71 6:06:27 16:06S ep-207-Sep-20
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4、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的 错儿。 16:06:2 716:06: 2716:0 6Monday, September 07, 2020
2.青霉素杀死野生型：
加入200U/ML的青霉素1ML，于30度下培 养。
（四）涂CM平皿、培养突变型 • 1.倒CM平板：
融化完全培养基，倒2个平板。 • 2.稀释和涂CM平皿：
将培养液进行10-1、10-2稀释剃度，各吸取 0.1ML分别接入2个平板，进行培养。
（五）检出缺陷型 • 1.倒CM、MM平板：
微生物遗传育种实验
-氨基酸营养缺陷型突变株的筛选
一、目的要求
• 了解营养缺陷型突变株选育的原理。 • 学习并掌握细菌氨基酸营养缺陷型的
诱变、筛选与鉴定方法。
二、基本原理
• 营养缺陷型是指野生型菌株由于某些物理因素 或化学因素处理，使编码合成代谢途径中某些 酶的基因突变，丧失了合成某些代谢产物(如 氨基酸、核酸碱基、维生素)的能力，必须在 基本培养基中补充该种营养成分，才能正常生 长的一类突变株。这类菌株可以通过降低或消 除末端产物浓度，在代谢控制中解除反馈抑制 或阻遏，而使代谢途径中间产物或分支合成途 径中末端产物积累。在氨基酸、核苷酸生产中 已广泛使用营养缺陷型菌株。
匀后，倒入无菌平皿中，加入生理盐水，使总液 量达到10ML。 • 诱变：在30厘米处，用15W紫外灯照射菌液40秒 后，置于暗处2小时。 • 中间培养：取诱变后的菌液1ML，加入5ML肉汤 培养基中，32度培养。
（三）淘汰野生型菌株
1.无氮、二倍氮培养：
将菌液离心洗涤后，加入5ML无氮培养基 中，饥饿培养2小时后，加入2氮培养基中 再培养2小时，恢复野生型的生长。
种于平板上。
3.在相应的区域加入不同的氨基酸组，进行培养。
（七）鉴定缺陷型 观察菌的生长情况，确定氨基酸缺陷型。
1 组氨酸 苏氨酸 谷氨酸 天冬 亮氨酸 甘氨酸 氨酸
组2
3
别4
6
五、试验结论
• 得出结论，分析实验中遇到的问题。 • 进行考试。
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1、有时候读书是一种巧妙地避开思考 的方法 。20.9. 720.9.7 Monda y, September 07, 2020