pUC系列质粒的蓝白斑筛选原理

pUC系列质粒的蓝白斑筛选原理

在培养受体细胞的培养基中一般会存在三种细胞情况：含空pUC载体的受体细胞、含携带外源基因的pUC载体受体细胞、不含pUC载体的受体细胞。因此，在培养基中除了基本营养物质外还需要加入氨苄、X-gel染色剂和IPTG乳糖类似物。

①区分不含载体和含载体的受体细胞。

没有导入pUC载体的受体细胞是没有氨苄抗性的，即加入氨苄的培养基只可培养出含pUC载体的细胞。

②区分含空pUC载体和含携带外源基因的pUC载体的受体细胞。

pUC载体上的lac Z’基因编码的是β-半乳糖苷酶，它可以表达出β-半乳糖苷酶小亚基，它与受体细胞lacZ基因表达的β-半乳糖苷酶大亚基结合，可以变成有活性的β半乳糖苷酶。培养基中的IPTG乳糖类似物，可以激活乳糖操纵子lacZ、lacZ’，使受体细胞表达出β-半乳糖苷酶大亚基，而载体上的lac Z’表达出β-半乳糖苷酶小亚基，它们结合激活后，可以将培养基中无色的X-gel降解成蓝色的溴氯吲哚蓝色＋β-半乳糖苷。因此培养基中观察到蓝色的菌落即为含携带外源基因的pUC载体的受体细胞。