微生物发酵技术

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一 碳源的影响及其控制 1 碳源的种类影响代谢情况 迅速利用的碳源:迅速参与代谢,合成菌体和产
生能量,并产生分解产物,因此有利于菌体生 长,但对产物(特别是次级代谢)有抑制作用(例 如葡萄糖)。 缓慢利用的碳源:可被菌体缓慢利用,有利于延 长代谢产物的合成(例如乳糖、蔗糖、麦芽糖、 糊精、饴糖等)。
• 浓度低能消泡; • 能力持久(持久存在,不被消耗)。 • 不影响氧和提取;
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• 天然油脂质量:酸价。 • 泡敌:聚氧乙烯氧丙烯甘油(GPE)。 • GP • 化学消泡剂增效: • 加载体、并用、乳化。
长,但对部分产物,特别是次级产物合成有 抑制作用。 • 缓慢氮源:延长产物合成期。
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• 发酵培养基一般采用速效与缓慢氮源的混 合物,且中间还要补充。
• (1) 补加有机氮源 • (2) 补加无机氮源(补氮和调pH双重功效)。
• 三 磷酸盐的影响和控制 • 适合微生物生长的磷盐浓度偏高; • 适合微生物药物合成的磷盐浓度偏低。 • 发酵过程一般采用亚适量。
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第六节 温度的影响及其控制
• 一 温度对发酵的影响 • 1 影响各种酶反应的速率和蛋白质的性
质; • 菌体生长所需温度与产物合成温度不
一致(如青霉素);温度不同还可能影响产 物合成的方向(如金霉素和四环素)。 • 2 影响发酵液的物理性质。(粘度、氧和 基质的溶解与传递、分解和吸收)
• 例如产黄青霉在低pH 下为丝状,高pH为酵 母状
• 3 影响产物的稳定性; • 噻呐霉素在pH6.7-7.5时稳定; • 青霉素在碱性条件下发酵产量低
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• 二 发酵pH的变化(影响因素) • 1 菌种的遗传特性 • 菌种具有自我调节pH能力,但能力有限
度(地中海卡诺氏菌发酵生产利福霉素SV) • 2 营养成分的分解代谢 • 碳源分解代谢产生中间产物丙酮酸,产
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• 二 影响发酵温度变化的因素 • 产热的因素: • 1 生物热(Q生物) • 与培养基成分和培养阶段有关。 • 2 搅拌热(Q搅拌) • 散热的因素: • 1 蒸发热(Q蒸发) • 2 辐射热(Q辐射)
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• 三 温度的控制 • 1 最适温度的选择 • 2 温度的控制
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生丙酮酸的多少与碳源种类和浓度有关。 • pH变化是菌体产酸或产碱的综合作用
结果,可能通过pH变化反应发酵情况。
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三 发酵pH的确定和控制
四 1 发酵 pH的确定

根据实验结果确定
六 2 pH控制
七 最适pH在微生物生长和产物形成相互 关系:
八 (1) 二者的pH相似且在较宽的内;
九 (2) 生长的pH较宽,而合成的pH较窄;
• 菌体浓度:单位体积培养液中菌体的含 量。
• 一 影响菌体生长的因素 • 1 比生长速率:越大,菌体生长越快;决
定于细胞的复杂性(越复杂越慢); • 2 营养物质和环境条件: • 营养物质浓度在一定限度内,浓度与
菌体生长成正比。
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• 其它环境条件越适合,生长越快。 二 菌浓对初级代谢和次级代谢的影响
长偶联型
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第二节 发酵过程工艺参数控制
• 一 物理参数 • 1 温度 • 2 压力: 内部压力高于外部压力。 • 3 搅拌转速: 转/分钟 • 4 搅拌功率:每立方米发酵液所消耗的功率,
kw/m3 • 5 空气流量:每分钟内每单位体积发酵液通入
空气的体积,V/V.min • 6 粘度:反映氧传递阻力和菌体浓度。
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• (2) 摄氧率的变化 • 随菌浓增加,摄氧率不断增加,溶氧浓
度下降,菌浓至临界,溶氧至最低。
• (3) pH • 先下降后下升:利用葡萄糖产生酸,而
后再被利用。 • 先上升后下降:利用氨基酸的碳骨架,
剩下氨,而后氨又被利用。 • 限制性因素的出现,使菌体由生长向生
产转化。
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第九节 二氧化碳影响及其控制
• 一 二氧化碳对发酵的影响 • 二氧化碳的作用: • 1 刺激作用,如环状芽孢杆菌发芽孢子开
始生长时就需要二氧化碳,此谓二氧化 碳效应。 • 2 抑制作用,影响生长速度、菌体形态、 产物合成和培养基pH。
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• 二 二氧化碳浓度的控制 • 二氧化碳受呼吸强度、发酵液流变学
• 2 产物合成阶段 • 产物产量不断增多,起至达到最大值,生
产速率也达最大,直至产物合成能力衰退。 • 该阶段要严格控制发酵条件,对产物的合
成最为关键。例如营养浓度。
3 菌体自溶阶段 菌体衰老、开始自溶,氨氮含量升高,pH
上升,产物合成能力衰退,生产速率下降。 此时结束发酵。
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第四节 菌体浓度影响及其控制
• 二 次级代谢产物发酵的代谢变化 • 次级代谢发酵的菌体生长(生长期)和产物
合成期(生产期)是分开的。 • 发酵过程可分为:菌体生长、产物合成、
菌体自溶三个阶段。 • 1 菌体生长阶段 • (1) 营养成分的变化 • 碳源、氮源和磷酸盐等营养物质不断被
消耗,浓度明显减少,而新菌体不断合成, 菌浓明显增加。
恒定; • 蛋白质的消耗。 • 3 前期稍微降低,后又
回升;
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• 4 开始低,以后上升。 • 5 综合方式(无规律性) • 控制泡沫方法: • 防止(气体、发泡物质:有机氮源,
降低有机氮源浓度,需求量不足,补料) 不能斗绝 治理
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• 天然油脂(豆油、菜籽油);高碳醇、 脂肪酸或脂类;聚醚类;硅酮。
期。 • 延迟期的长短与培养条件和菌种生理
状态有关。 • 在未达死亡期之前放罐。
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• 2 营养基质浓度的变化 • 随发酵时间的延长不断降低,用于菌体的
生长和产物的形成。 • 溶氧的变化规律(后面讲)。 • 3 产物浓度的变化 • (1) 与菌体浓度平行; • (2) 与培养条件有关。
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• 二 化学参数
• 1 pH • 2 基质浓度:糖、氮、磷等。 • 3 溶解氧浓度 • 4 氧化还原电位 • 5 产物浓度 • 6 废气中氧的含量 • 7 废气中CO2的含量。 • 三 生物参数 • 1 菌体浓度 • 2 菌丝形态
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第三节 发酵过程中的代谢变化
• 一 初级代谢产物发酵的代谢变化 • 1 菌体浓度的变化 • 延迟期、对数生长期、静止期和死亡
产物的产率: Rp = Qp · X
其中: Qp 为比生产速率; X 为菌体浓度。
X太大的负面影响: 1 营养物质消耗太快; 2 生产毒素; 3 溶氧供应不上。
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三 发酵过程中菌浓度的控制

通过调节生长速率实现,而这又要通
过调节培养基的营养基质浓度。

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第五节 营养基质影响及其控制
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机理解释: 乳糖的利用速度刚好符合青霉素的合成
速度。 控制方法:流加葡萄糖或采用混合碳源。 2 碳源浓度的影响
浓度合适。 控制方法:中间补料。
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• 二 氮源的影响和控制 • 1 氮源浓度的影响 • 以谷氨酸发酵为例: • NH4+太高:合成谷氨酰氨; • NH4+不足:积累-酮戊二酸。 • 2 氮源的种类的影响 • 速效氮源:氨基态氮和玉米浆,促进菌体生
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• 间接方法的例子:以CO2和pH为控制参 数。
• 2 无反馈控制 • 经验补料法。
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第十一节 泡沫的影响及控制
• 泡沫(机械泡沫和流态泡沫)的危害: • 1 装料系数减小; • 2 增加染菌机率。 • 消泡方法:
• 1 机械消泡; • 2 消泡剂消泡。
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• 1 泡沫保持恒定的水平; • 2 早期稳定下降,以后
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• 二 补料的方式和控制 • (一) 补料方式 • 连续流加、不连续流加(多周期流加)。 • (二) 补料控制 • 1 有反馈控制 • 反馈控制系统:传感器、控制器和驱
动器。
• 直接方法:以限制性营养物浓度作为反 馈参数;
• 间接方法:以溶氧、pH、呼吸商、排气 中的CO2及代谢产物浓度等为参数。
(3) (3) 对代谢关键酶或细胞组分产生抑制 作用;
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• (4) 改变菌体的生化代谢而影响生长。 • 部分前体物有毒性,部分是由于溶解度
小。 • (二) 可以解除或减弱分解产物阻遏 • 部分合成酶受到易利用的碳或氮源的
阻遏,例如葡萄糖的分解代谢产物引起的 阻遏。 • (三) 可以使发酵过程最佳化
十 (3) 二者都敏感,但最适点相同;
十一 (4) 二者都敏感,但最适点不同。
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• pH的控制方法: • 1 培养基配比适当,使pH在合适的范围
内变化; • 2 直接补加酸碱或补料; • 其中采用补料的方法可以同时实现补
充营养、延长发酵周期、调节pH和改变 培养基性质等几种目的。
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期出现最低谷的时间不同。 • 溶氧异常下降的原因: • 1 污染好气性杂菌; • 2 菌体代谢异常; • 3 某些设备或工艺控制发生故障,如搅拌。
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• 引起溶氧异常升高的原因: • 1 代谢异常,菌体过早衰老; • 2 污染噬菌体。 • 三 溶氧浓度的控制 • 溶氧浓度是由氧的供需平衡所决定的。
特性、通气搅拌程度和外界压力大小影 响。 • 通过 通气和搅拌 来控制。
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第十节 补料分批发酵
• 一 补料分批发酵的作用 • 补料分批发酵的概念。 • 补料分批发酵的优点: • (1) 解除了底物抑制、产物反馈抑制和分解
产物阻遏; • (2) 避免在分批发酵中因一次投料过多造成
细胞大量生长所引起的不良影响,降低发酵 液的粘度;
第七节 pH的影响及其控制
• 一 pH对发酵的影响 • 1 影响微生物的生长及产物的合成(通过
影响酶活性实现); • 生长最适pH与合成最适pH不一致 • 菌体内的pH近中性,因为发酵培养基中
的pH是通过间接方式作用与胞内酶的
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• 2 影响菌体对基质的利用速度和细胞结构 (通过影响膜实现);
充足,产量才大; • 2 异亮氨酸、赖氨酸和苏氨酸,供氧充分
可获得最高产量,但供氧受限时,不会 有太大影响; • 3 亮氨酸、缬氨酸和苯丙氨酸,供氧受限 对产物合成有利。
微生物发酵Baidu Nhomakorabea术
• 二 发酵过程的溶氧变化 • 在一定的发酵条件下,每种产物发酵的
溶氧变化都有自身的规律。 • 总的规律:先下降,后上升,不同产物后
品控部:制定发酵过程控制的方案。 总经理:协调监督各部工作,最后拿出 完整的计划书。
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3. 计划书实施。 计划书要先经过老师的审核,然后
实施。 实施过程中考核操作技能。 实施后及时进行实训报告的撰写也
总结。
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第一节 微生物发酵类型
• 一 分批发酵、补料分批发酵与连续发酵 • 二 需氧发酵与厌氧发酵 • 三 生长偶联型、部分生长偶联型和非生
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2020/11/14
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教学安排: 1. 员工培训 由老师讲解发酵过程的理论基础。 分配实操任务:发酵过程控制。
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2. 学生模拟组建运营一个发酵车间,撰写 计划书(在理论教学期间完成)。
市场部:当前发酵过程控制的技术进展。 关键技参术数部的:控确制定方p法H、,温撰度写、操溶作O规2程、。补料等
供大于需时,溶氧上升;供小于需时,溶 氧下降。 • 提高供氧的方法: • 提高氧传递动力和液相体积氧传递系数。
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• 氧传递动力的提高受限,只能通过搅拌、 通气及发酵液粘度控制。
• 控制需氧的方法: • 需氧量受菌体浓度、营养基质的种类
和浓度、培养条件影响,其中重要的是 菌体浓度。菌体浓度可通过控制比生长 速率来实现,这又要通过营养基质浓度 的控制来实现。
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• (3) 可用作控制细胞质量的手段,以提 高发芽孢子的比例;
• (4) 一种理论研究方法。
(一) 可以控制抑制性底物的浓度
高密度的生物量需要投入几倍的基质, 但高浓度的基质有抑制作用。抑制原因:
(1) 有的基质浓度过浓使渗透压过高,细胞 因脱水而死亡;
(2) (2) 高浓度基质能使微生物热致死;
第八节 溶氧的影响及控制
• 一 溶氧对发酵的影响 影响菌体生长、产物合成及产物的性质。
1 有时,氧充分促进产物合成,如谷氨酸 和金霉素发酵;
2 有时,氧充足会对产物有抑制作用,如 维生素B12发酵。 因此溶氧并非越高越好。
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• 氨基酸发酵对氧的需求分三类: • 1 谷氨酸、精氨酸和脯氨酸,氧必须供应
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