各种型号Waters色谱柱使用指南

液相色谱柱的使用常识1版

液相色谱柱的使用常识 色谱柱信息 (1) 安装色谱柱 (2) 平衡色谱柱 (2) 平衡色谱柱的意义（反相柱、硅胶柱、极性柱） (2) 平衡色谱柱的方法 (2) 色谱柱的保存 (3) 色谱柱的再生 (4) 色谱柱的维护 (4) 液相色谱工作中和色谱柱有关的故障及解决办法 (5) 色谱柱信息 从色谱柱上的标签可以至少获得以下一些信息： 1）生产商、商品名称、规格、货号（Part No.）、填料类型、批次、柱号。 其中，生产商、商品名称、规格和货号，方便下次采购同样产品，对于药物质检这是常见的需求。 而填料类型、批次和柱号，是发现新柱存在质量问题时联系销售商或生产商时重要和必需的信息之一。原因：批次，往往与填料信息密切相关，填料是一批批生产出来的，重现性上的严重缺陷可能是某个批次填料的整体问题，提供批次信息，可以帮助技术服务人员在第一时间查询全球是否有同样批次的投诉报告；柱号，是这根柱子的“身份证”，换柱和退柱时的必需信息，也是实验室器材管理应当记录存档的必要信息。 2）流向。绝大部分色谱柱都有方向的要求。应当仔细检查，按流向标志将色谱柱接入HPLC 系统。 注意在使用此色谱柱的过程中不要遗失、毁坏或沾污这个标签，以便在使用过程中出现问题时我们可以对该柱子的生产过程进行追溯。为方便管理，还可以自行在柱上贴一些管理标签，如购入时间、负责人员，等。 贴心提示： ①当您接到一根新的色谱柱时，要阅读并保存好使用说明书（使用前应当至少阅读一遍）、 出厂技术证书或分析测试报告（Certificate of Analysis），有时为两份，一份是该批次填料 选择性测试报告，一份是该柱的柱效测试报告。

Waters高效液相色谱柱简单介绍与选择

Waters高效液相色谱柱简单介绍与选择 2016-04-25 Bruce Lee 生产高效液相色谱柱的厂家有很多，如Waters，Agilent，Phenomenex，Shimadzu，Thermo等，每家供应商又生产多个系列，导致市场上的液相色谱柱的可选择性极强。 目前实验室以及公司，企业使用最多的是Waters以及Agilent所生产的RP液相色谱柱。Waters主要有Symmetry，Sunfire，XTerra，XBridge，XSelect，CORTECS以及Atlantis系列等，其详细分类以及键合相如下。 Figure 1 Waters Symmetry column family Figure 2 Waters Sunfire column family Symmetry与Sunfire系列色谱柱使用高纯度硅胶（B型）作为固定相基质，摒除金属离子杂质对固定相Si-O键的促进水解作用，此外由于金属离子含量特别低，在对其表面键合选择性烃基或内嵌极性官能团烃基时，可通过配体添加量控制硅胶表面键合相的多少，因此其最大特点在于批次之间的重现性。两个系列均采用封端技术，Sunfire C8与C18表面载碳量分别为12%和16%；SymmetryC8与C18载碳量均为12%，因此两个系列的C8色谱柱对于分析物的保留能力上没有本质的区别，而Sunfire C18色谱柱则相比Symmetry C18色谱柱，对于非极性比较大的分析物具有更强一些的保留能力，当然对于有机相的最低比例也相对比较高一些。Symmetry C8 Prep与C18 Prep色谱柱的填料粒径为7 um，其设计用途为制备；Symmetry300 C18（孔径300埃，载碳量8.5%）与Symmetry300 C4（孔径300埃，载碳量2.8%）则是为生物大分子多肽以及蛋白质的分离，分析而设计。Symmetry Shield RP 18内嵌极性官能团色谱柱，由于在靠近硅胶表面的极性官能团的存在，增加了硅胶表面的水分子浓度，改善了与水之间的浸润状况;因此可以允许使用极高水相作为分离，分析条件，而不会

气相色谱操作规范流程

安捷伦7890B气相色谱仪-GC-001操作规程 1.仪器分析原理 气相色谱仪是以气体作为流动相（载气），当样品由微量注射器“注射”进入进样器,在衬管中快速挥发后被载气携带进入填充柱或毛细管色谱柱。由于样品中各组份在色谱柱中的流动相（气相）和固定相（液相或固相）间分配或吸附系数的差异，在载气的冲洗下，各组份在两相间作反复多次分配，使各组份在柱中得到分离，然后用接在柱后的检测器根据组份的物理化学特性，将各组份按顺序检测出来。 图1 MDI-100产品异构体色谱图 2.仪器组成及各部件作用 2.1气相色谱仪主要由载气系统、进样系统、分离系统（色谱柱系统）、检测系统、记录系统等五大系统组成。各系统的作用分别为： 载气系统――提供洁净的具有一定流速的载气（流动相）。 进样系统――样品在此气化后进入到色谱柱。 分离系统――分离样品中的各组分。 检测系统――将分离后由色谱柱流出的组分的浓度或质量转变为相应的电信号。 记录系统――将检测到的电信号经处理后记录、并显示。

2.2各部件介绍： 图2 Agilent 7890B GC-001 的前视图 2.2.1进样口 进样口是将样品注射到GC 中的位置。Agilent 7890B GC 最多可以有两个进样口，标为Front Inlet（前进样口）和Back Inlet（后进样口）。GC-001前后进样口为分流/ 不分流进样口 图3 Agilent 7890B GC-001 的前后进样口 2.2.2自动进样器

带有样品盘的Agilent 7683B 自动液体进样器将会自动处理液体样品。Agilent 7890B GC 最多可以有两个自动进样器，标为Front Injector（前进样器）和Back Injector （后进样器）。 2.2.3色谱柱和柱箱 GC 色谱柱位于温度控制柱箱的内部。通常，色谱柱的一端连接进样口，另一端连接检测器。色谱柱因长度、直径和内涂层而异。每个色谱柱被设计为可以处理不同化合物。色谱柱和柱箱的用途是将注入的样品在经过色谱柱时分离成各种化合物。要协助此过程，可以对GC 进行编程，以加速样品流过色谱柱。GC-001前后色谱柱均采用HP-5色谱柱 图4 Agilent 7890B GC-001 柱箱视图 2.2.4检测器 当化合物流出色谱柱时，检测器用于测定其是否存在。当每种化合物进入检测器时，会产生与已检测到的化合物的量成比例的电子信号。此信号通常会被发送到数据分析系统－如EZchrome OpenLab －信号是以色谱图上峰的形式出现在系统中。Agilent 7890B GC-001容纳两个检测器，分别标为Front Det （前检测器）、Back Det （后检测器）。前后检测器均为FID检测器。

色谱柱使用操作规程

【分享】色谱柱使用操作规程-sop 1.目的： 建立色谱柱使用操作规程. 2.范围：适用于仪器分析（HPLC、GC）前对检测条件适用性的确认和HPLC分析结束后对的色谱柱的清洗。 3.责任：QC检验员对本标准实施负责. 4.内容： 4.1. 系统适用性试验的定义：按SOP项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。 4.1.1.色谱柱的理论板数（n）: n=5.54(tR/Wh/2)2 TR—保留时间，min； Wh/2—半峰宽高度。 4.1.2.分离度： tR2—为相邻两峰中后一峰的保留时间； tR1—为相邻两峰中前一峰的保留时间； W2及W1—为此相邻两峰的峰宽。 4.1.3.重复性：取各品种项下的对照溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0％。4.1.4.拖尾因子： W0.05h--为0.05峰高处的峰宽； d1—为峰极大至峰前沿之间的距离； 除另有规定外，T应在0.95—1.05之间。 4.2步骤： 4.2.1.按具体分析方法操作，用流动相走基线约40分钟（正常流速），待基线平稳。 4.1. 5.基线平稳后，按要求进系统适用性溶液或对照溶液分析，记录色谱图，进行评估，符合要求后，待测样品。 4.1.6.进样品溶液，记录结果。 4.1.7.测试完毕后，清洗约30min，一般流速为正常测样流速的1至1.5倍，冲洗约40min。 走空白，按1000积分无任何杂质显示。当所测样品杂质在30min 后出峰时，走空白时间约为60min。如果有杂质显示，继续清洗

常用液相色谱柱的规范化使用与保养标准操作规程

.. . 目的：规液相色谱柱的使用与管理；液相色谱柱标准化老化与再生；剖析液相色谱柱常见问题与解决办法。延长色谱柱使用寿命，降低色谱柱使用成本。提高分析人员液相色谱柱使用与维护水平。 围：适用于使用高效液相色谱仪的仪器分析操作人员及相关管理人员。 责任：设备员、液相操作人员、质控主管、质量管理部经理、质量受权人。 容： 1.定义 1.1 液相色谱柱：指用于液相色谱分离的柱形固定相，由柱管、压帽/卡套、筛板（滤片）、填料、接头等组合而成，可用于液相色谱分析与制备。 1.2 色谱柱再生：指色谱柱在非正常情况下，针对异常现象及原因采取的一系列修复补救措施，以提高色谱柱柱效和延长其使用寿命的处理过程。 1.3 运载溶剂：指色谱柱生产厂商在柱出厂测试合格后饱和于色谱柱的合适溶剂，以利于运输保存，多与保存溶剂相同。 1.4 保存条件：指色谱柱生产厂商根据不同柱类型及其色谱柱填料的制备、键合、装填、高压定型、净化干燥等工艺条件的不同要求而特别制定的色谱柱保存前净化饱和的处理程序与储存条件，包括净化程序、净化溶剂和保存溶剂、保存条件。 1.5 保存溶剂：用于保存色谱柱并指定了溶剂组成与比例的溶液。 1.6 反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等。常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。 1.7正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱，常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。 1.8氨基柱（-NH2）：可以同时用于正相条件和反相条件，但多用于正相色谱条件。使用时需注意，正相反相交替使用时必需用异丙醇过度，保证柱保存溶剂与流动相互溶。[氨基柱出厂保存溶剂多用正相溶剂，例如：正己烷-乙腈（99：1）]。 2.液相色谱柱的使用及保养

色谱柱使用维护保养操作规程

目的：建立色谱柱使用维护保养操作规程，规范色谱柱的使用、维护行为。 范围：适用于色谱柱的使用、维护和保养。 依据： 责任：药分部 内容: 1.操作规程 一般要求是一根柱子用于同一个系列的产品，稳定性试验用专用柱。 1.1.新色谱柱在使用之前，首先应查看说明书，检查柱子的pH值范围是否与待验产品的要求相一致，确认柱子和仪器的接头以及管路是否相匹配，并注意柱子上标示的流向箭头，一切确认无误后，编上编号，在《色谱柱启用、报废台帐》上登记开始使用时间、生产厂家、型号规格等。 1.2.使用时，应按各色谱柱的要求进行色谱柱的维护保养，并在色谱柱使用登记表中登记使用日期、所测产品的名称及批次、使用前后维护保养的具体内容； 1.3使用后，及时填写《色谱柱使用台帐》。 2.维护规程 2.1.液相色谱柱的维护 2.1.1. 色谱柱使用时，确认柱子的编号、型号规格与待验产品的要求相一致，流动相的pH值应与柱子说明书上规定的pH值相适应，然后旋开两端的封头，接到高效液相色谱仪上，使色谱柱的箭头指向与流动相流向一致。 2.1.2.流动相应经过0.45um滤膜过滤并脱气后使用，柱压不要超过300bar（3000psig），最高操作温度不得超过60℃。 2.1. 3.流动相如果是非盐类的，用流动相冲洗约30min，按《高效液相色谱仪操作规程》进行操作，然后进行样品的检验。如果是盐类的，用有机相：水=10：90的溶液冲洗约10min，再换上相对应的流动相，按《高效液相色谱仪操作规程》进行操作，然后进行样品的检验。 2.1.4.检验完毕，如流动相中含有盐类物质，应先用有机相：水=10：90的溶液以1ml/min的流速冲洗约40min，然后用HPLC级的乙腈或甲醇以1ml/min的流速冲洗约30min，关闭液相色谱仪，取下色谱柱，在柱两端旋上封头，以防止柱内的有机溶剂流失而使柱内填料发干变松，柱效下降。不用的色谱柱放入液相色谱分析室的专用贮存柜中。 2.1.5.拿用时要轻拿轻放，避免剧烈震动。 2.1.6.不允许反向连接和冲洗柱子。 2.1.7.柱子的再生：每使用二十次，就按以下程序进行再生一次，以延长柱子的使用寿命。冲洗程序：按柱子上所示箭头方向，依次用高纯水－甲醇－氯仿－甲醇以1ml/min的流速分别冲洗约

(完整版)Agilent1260液相色谱系统操作规程

1目的 规范Agile nt 1260系列高效液相色谱的日常使用和维护保养，保证仪器的正常运转，确保检测工作的顺利进行。 2适用范围 适用于Agile nt 1260系列高效液相色谱系统的日常使用和维护。 3职责 实验室分析人员负责Agile nt 1260系列高效液相色谱系统的日常使用和维护。 4系统组成 4.1 Agile nt 1260 系列四元泵（G1311C）和脱气机； 4.2可变波长紫外检测器（VWD G1314F ； 4.3 Chemstation A.01.04 色谱工作站 4.4国产柱温箱（AT-550）色谱柱； 4.5电脑、打印机等辅助设备。 5定义 无 6操作程序 6.1开机前的准备 6.1.1检查仪器校验标识，确认仪器处于校验周期内。 6.1.2检查上次《实验室仪器设备使用记录表》和仪器状态，确认仪器处于正常状态； 6.1.3流动相的制备： 6.1.3.1按《高效液相色谱法流动相配制标准操作规程》配制需要的流动相。 6.1.3.2用前超声脱气（一般10?20min）。 6.1.4更换流动相： 6.1.4.1将泵的吸滤器从旧流动相中取出，用新流动相冲洗后放入新流动相的储液瓶中，并盖好瓶盖； 6.1.4.2将排液管的出口端放入废液瓶中，并盖好瓶盖。 6.1.5供试溶液的配制：

6.1.5.1供试品用规定溶剂配制成供试品溶液。 6.1.5.2定量测定时，对照品溶液和供试品溶液均应分别配制 2份。 6.1.5.2如有必要，样品需预处理，如过滤等，以免对色谱系统产生污染和色谱干扰。 6.1.6选择色谱柱： 6.1.6.1根据待检供试品的检测方法确定所需的色谱柱； 6.1.6.2检查仪器上安装的色谱柱是否与其相同，若不同则需进行更换。 6.1.7更换色谱柱 6.1. 7.1拆卸原色谱柱： 先握住色谱柱，再松动色谱柱出口端螺帽，取下出口端的管线； 松动色谱柱入口端螺帽，取下入口端的管线； 用止动塞将色谱柱的进出口塞住拧紧后，将色谱柱放回原专用包装盒内 6.1. 7.2安装新色谱柱： 从专用包装盒内取出色谱柱，松动并取下色谱柱出入口的止动塞； 将与进样器相连的管线一端插入色谱柱入口端，拧紧螺帽； （注意：安装时色谱柱上的流向标志应与管路的流动相流向一致。 ） 将与检测器相连的管线一端插入色谱柱出口端，拧紧螺帽。 6.2开机 6.2.1通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。 6.2.2接通电源，打开计算机和打印机开关 6.2.3等待计算机自检完毕后，进入 Windows 桌面，依次打开泵、进样器、检测器各模块电源。 打开柱温箱开关。 6.2.4待各模块自检完成后，点击 6.2.5确定仪器与工作站已连接，若未连接，需关闭工作站，重新连接。注意必须先打开检测器, 再连接 工作站。 6.2.6从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面 ，也可单击工作站画面左侧的“方法和运行 控制”项，进入方法和运行控制窗口。 6.3 操作 6.3.1泵的开启和设置 6.3.1.1打开Purge 阀（逆时针），右键点击四元泵下面的空白处，选择“方法”选项，进入泵 编辑画面。 Win dows 桌面 lc ”图标进入化学工作站画面

常见液相色谱柱性能比较

常见液相色谱柱性能比较 一、高性能色谱柱特点：柱效高，价格高，通用性好，使用寿命长，pH范围宽 1、Waters公司Xbridge 2005年waters公司推出，杂化颗粒柱。 优点：pH 1-12,在高pH状态下，没有能与此色谱柱匹敌的，目前市场的宽pH色谱柱在高pH的状态下（9-12）普遍寿命很短，如Gemini，资生堂公司Capcell，YMCPro-C18，包括waters 的第一代杂化柱Xterra都是寿命不长，Zorbax Extend更是不堪。柱效与一流的硅胶柱相当，甚至有过之无不及，杂化颗粒柱和聚合物色谱柱的问题在于柱效，Xterra和常见的PSDVB的色谱柱都有不错的pH范围，但是柱效低的问题无法解决，这是聚合物填料一般比较软且不耐压的原因造成。在如此宽的pH范围，最大的好处是可以在化合物的保留平台区去开发方法 （pH1-3,pH9-12），这样能得到更稳定更容易重现的方法，对酸性，中性，尤其是碱性化合物都能得到理想的峰形。 注：Waters UPLC色谱柱与Xbridge采用同类型填料，只是颗粒度是1.7um，所以不再重复。缺点：价格高，平均每支￥7000多的，不是大多数中国客户可以接受的。 2、MerckChromolith整体化色谱柱 Merck公司2001年推出。 优点：高流速、低压力，可以快速分析样品，因为压力低，所以可以串联色谱柱以获得更高的柱效而不用担心色谱柱耐压问题，低压力是因为硅胶棒的大量中孔的存在，中孔的存在也让这支色谱柱不怕堵，在处理比较脏的样品的时候会优势很大（如中药），实际的寿命也因此延长。这个色谱柱最大的特点是柱效高出峰时间快，特别适合之前分析时间超长的实验条件，目前很好的例子就是人参的指纹图谱，因为成分复杂，之前出峰要2个小时，现在用整体化色谱柱30min 就可以分析完了（已有报导），且不影响柱效，类似于UPLC，但不像UPLC那么容易堵。 缺点：规格单一，单价比较高，单价￥7000左右，所以通过串联获得更高柱效的方式显得比较奢侈。 3、Phenomenex公司Gemini ，采用硅胶球聚合物包被技术。pH范围1-12。 优点：因为聚合物涂层抑制了碱性溶液水解硅胶，所以可以承受一定的碱性条件，由于是硅胶球颗粒，所以柱效不错，比Xterra或者PSDVB这类色谱柱柱效好。单价比较低，￥3000以内。 缺点：聚合物涂层稳定性比较差，所以当涂层损失时，色谱柱会很坏被碱性溶液溶解，这也是其寿命远不及Xbridge的原因。另外涂层损失也会影响结果重现性。 4、资生堂Capcell ，采用硅胶球聚合物包被技术。pH范围1-10。 类似于Gemini同样的技术，只是参数指标比phenomenex低调。 单价偏高，￥5000以内。 5、Agilent ZorbaxExtend，采用双配位键和相技术。pH2-10 优点：不详 缺点：在使用高pH时，基本上都会介绍Extend，但是实测数据说明该款色谱柱的耐高pH 能力较差。 二、高纯硅胶柱特点：柱效高，峰形好，适用广泛，价格合适，为各色谱柱公司目前主流色谱柱 1、Merck的Purosphere STAR ，为Merck公司1999年推出，pH 1.5-10.5，通用性好，柱效高；缺点：市场推广较差，知名度比较低， 2、Phenomenex的Luna ，Phenomenex公司的主打色谱柱，pH1.5-10，通用性好，在进口色谱柱市场上占有一定份额；缺点：装填相对松散，柱头填料容易塌陷

液相色谱仪原理及使用操作规程、原子吸收仪使用规程

液相色谱仪原理及使用操作规程 原理 液相色谱法就是同一时刻进入色谱柱中的各组分，由于在流动相和固定相之间溶解、吸附、渗透或离子交换等作用的不同，随流动相在色谱柱中运行时，在两相间进行反复多次（103～106次）地分配过程，使得原来分配系数具有微小差别的各组分，产生了保留能力明显差异的效果，进而各组分在色谱柱中的移动速度就不同，经过一定长度的色谱柱后，彼此分离开来，最后按顺序流出色谱柱而进入信号检测器，在记录仪上或色谱数据机上显示出各组分的色谱行为和谱峰数值。测定各组分在色谱图上的保留时间（或保留距离），可直接进行组分的定性；测量各峰的峰面积，即可作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定相应组分的含量。 液相色谱仪工作原理图 高效液相色谱仪是实现液相色谱分离分析过程的装置，如上图所示。贮液器中存贮的载液（用作流动相的液体常需除气）经过过滤后由高压泵输送到色谱柱入口（当采用梯度洗脱时，一般需用双泵系统来完成输送）。样品由进样器注入载液系统，而后送到色谱柱进行分离。分离后的组分由检测器检测，输出信号供给记录仪或数据处理装置。如果需收集馏分作进一步分析，则在色谱柱出口将样品馏分收集起来，对于非破坏型检测器，可直接收集通过检测器后的流出液。其中输液泵，色谱柱及检测器是仪器的关键部件。 仪器使用操作步骤 1、打开主机（Waters1525泵）；待泵稳定后（大约需要2~5秒钟，即有两次“嘀”

的响声）打开紫外检测器；检测器预热需要6~10min钟的时间，在此时间内你可以执行第2步操作。 2、打开电脑（电脑必须进入英文界面）待检测器稳定后，方可打开Breeze应用程序，应用程序有个自检过程（需要1～2分钟）。 3、建立新方法（打开Breeze程序时，系统默认为上次使用的方法和文件名。如果需要建立新的文件名和方法，你可以继续下一步操作）： （1）点击“Manage Breeze”按钮→“Make a new project”→“Next”→在“project Name”框内输入新的文件名，也可以在“comment”内输入需要说明的一些注释，也可以不填→“Finish”； （2）建好新的文件夹后，还要转换到该文件夹中，即在“Manage Breeze”界面下点击“change project/user”按钮→在project内选择刚建立的或是需要的文件名→“OK”； （3）此时已经在刚建立的新文件夹下，那么，现在应该再建立一个新的方法，操作步骤是： ①、点击“View Method”→选择“LC或GPC”→点OK→点击“pump”在“Isocratic<等度> Flow A/B”内输入A/B流动相的比值（例如：A：B=70：30 且流速为1ml/min，那么，就在A下输入0.7，在B下输入0.3；再如A：B=70：30 且流速为0.8mL/min，那么，就在A下输入0.56，在B下输入0.24；依此类推）； ②、点击“UV Det（紫外检测器）”→选择“Channel1”→在“wavelength/nm”框内输入检测波长； （4）保存新方法，点击菜单栏中的“File”选择“save As...”→在“Name”框内输入刚建立的新方法的名称，如“LC method1”，然后点击“save”按钮，即可保存刚刚设立的各项色谱条件。 4、用新建的方法平衡系统： 单击左下角的“Equilibrate”→在“method for Equilibrate”内选择新建立的方法（如：LC method 1）→点击“Equilibrate”即开始基线平衡（基线平衡大约需要20min）。 5、待基线平衡后即可进行单次进样： （1）点击单次进样按钮→在“Sample Name”内输入样品名称，或备注（可不填）

高效液相色谱法操作规程(2015版药典)

目的：建立一个高效液相色谱法试验操作规程，保证此项工作顺利进行。 范围：原料、中间体、成品检验。 责任：检验员、QA监控员、化验室主任、质保科科长、质量部负责人。 内容： 高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。 1.对仪器的一般要求和色谱条件 高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。色谱柱内径一般3.9～4.6mm，填充剂粒径为3～10μm。超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。 1.1色谱柱 反向色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。常用的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等。常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。 正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。常用的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可作反向色谱。 离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。 手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。 系统使用离子交换填充剂；分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多空微球等填充剂；对应异构体的分离通常使用手性填充剂。 色谱柱的内径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。 温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但不宜超过60℃。

waters色谱柱-XTerra色谱柱

基于第一代杂化颗粒技术的XTerra?系列高效液相色谱柱, 可以让色谱工作者在药物发现，方法开发和纯化分离领域使用高pH值流动相。 ?XTerra颗粒能耐受二甲基亚砜（DMSO）溶剂，可延长高通量药物发现研究中色谱柱的寿命。?宽pH 范围使得方法开发研究人员在所需的pH值条件下操作，以获得最佳选择性。 ?高载荷量使得分离纯化的科学家在高pH值条件下，在纯化碱性化合物时，一次进样量增加六十倍。 XTerra 色谱柱特性 键合相类型颗粒状态孔径(s) (μm)碳载量 (?)端基(%)是否端基封尾 XTerra MS C18 球形 2.5, 3.5, 5, 10 μm 125 15.5 是 XTerra MS C8 球形 2.5, 3.5, 5, 10 μm 125 12 是 XTerra RP18 球形 3.5, 5, 10 μm 125 15 是 XTerra RP8 球形 3.5, 5, 10 μm 125 13.5 是 XTerra Phenyl 球形 3.5, 5 μm 125 12 是 [ 杂化颗粒技术] 药物发现 方法开发分离和纯化 XTerra?色谱柱将硅胶和聚合物的最优特性与革命性的杂化颗粒专利*技术相结合，在合成中，使用甲基取代了部分硅羟基。疏水性Si-C基团分布在颗粒骨架结构中，最后获得耐用的杂化（无机/有机）颗粒，可在如下条件操作: ?高速 ?高温 ?高pH值. 经过键合和封端处理后，填料表面的残留硅羟基减少了33%，因此XTerra色谱柱分析碱性化合物时可得到尖锐对称的色谱峰，从而获得更好的分离。 *美国专利号6,686,035 B2 不同键合相的XTerra色谱柱对分离选择性的影响

高效液相色谱仪操作规程-U3000(已打印)

戴安中国有限公司 液相色谱操作规程-U3000 一、操作前准备： 1.1流动相的配制： 1.1.1根据所供试品的性质、相关的文献资料、工作经验等按比例配制流动相。 1.1.2根据流动相的性质确定采用有机膜（0.45um）还是水相膜(0.45um)对流动相进行过滤。 1.1.3将过滤后的流动相进行超声脱气10~15分钟。 1.2对照品供试品处理： 1.2.1称取或量取适量的对照品或供试品，用适当的溶剂（最好采用流动相或流动相的主成分）进行充分溶解（也可借助超声波进行超声溶解），使其浓度为0.1~1mg/mL（根据检测结果再适当调节溶液的浓度）。 1.2.2根据对照品或供试品的性质确定采用有机针头滤膜（0.45um）还是水相针头滤膜(0.45um)进行过滤。 1.3色谱柱的选择：根据样品的性质选择适当的色谱柱。 二、开机： 2.1打开UPS（不间断电源）电源，打开仪器接线板电源开关； 2.2打开电脑显示器电源，打开电脑主机电源（POWER），启动电脑； 2.3依次打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器的电源； 2.4选择开始＞程序＞Chromeleon＞Sever Monitor或双击屏幕右下角快捷图标,出现对话界面后点击Ｓtart启动,等Dongle序号出来以后（表示Sever Monitor程序运行正常）可以点击Close来关闭界面。 2.5打开“开始”/“程序”/“Chromel”/“Chromeleon”或双击在桌面上的Chromeleon图标（工作站主程序）打开HPLC软件系统主界面。 2.6 在左窗口中单击根目录，此时会在右边的窗口中出现一个“hplc.pan”文件，双击此文件打开HPLC控制面板程序。 2.7在控制面板“Pump”控制框中选中“connect”选框，Purge流路中气泡，设置总流速为适当的数值（建议要由0.2ml/min逐渐增加到适当的流速）后并按回车键（“Enter”）以示确定。此时泵自动会以设置的流速进行运行。若是多元梯度泵可以分别设置B、C、D等流动相的流

常用液相色谱柱的规范化使用与保养标准操作规程

目的：规液相色谱柱的使用与管理；液相色谱柱标准化老化与再生；剖析液相色谱柱常见问题与解决办法。延长色谱柱使用寿命，降低色谱柱使用成本。提高分析人员液相色谱柱使用与维护水平。 围：适用于使用高效液相色谱仪的仪器分析操作人员及相关管理人员。 责任：设备员、液相操作人员、质控主管、质量管理部经理、质量受权人。 容： 1.定义 1.1 液相色谱柱：指用于液相色谱分离的柱形固定相，由柱管、压帽/卡套、筛板（滤片）、填料、接头等组合而成，可用于液相色谱分析与制备。 1.2 色谱柱再生：指色谱柱在非正常情况下，针对异常现象及原因采取的一系列修复补救措施，以提高色谱柱柱效和延长其使用寿命的处理过程。 1.3 运载溶剂：指色谱柱生产厂商在柱出厂测试合格后饱和于色谱柱的合适溶剂，以利于运输保存，多与保存溶剂相同。 1.4 保存条件：指色谱柱生产厂商根据不同柱类型及其色谱柱填料的制备、键合、装填、高压定型、净化干燥等工艺条件的不同要求而特别制定的色谱柱保存前净化饱和的处理程序与储存条件，包括净化程序、净化溶剂和保存溶剂、保存条件。 1.5 保存溶剂：用于保存色谱柱并指定了溶剂组成与比例的溶液。 1.6 反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等。常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。 1.7正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱，常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。 1.8氨基柱（-NH2）：可以同时用于正相条件和反相条件，但多用于正相色谱条件。使用时需注意，正相反相交替使用时必需用异丙醇过度，保证柱保存溶剂与流动相互溶。[氨基柱出厂保存溶剂多用正相溶剂，例如：正己烷-乙腈（99：1）]。 2.液相色谱柱的使用及保养

HPLC色谱柱使用维护与保养规程

公司 标准操作规程编号：STD-SOP－EM－033－00题目液相色谱柱使用维护与保养规程颁发部门分析测试中心 制定日期 审核日期 批准日期 分发分析测试中心研发部 目的：建立HPLC色谱柱使用、维护与保养规程 范围：HPLC色谱柱 职责：分析测试中心对本规程的实施负责 正文： 1.色谱柱的构造 色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝等组成。 2.液相色谱柱的使用： 色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。 2.1样品的前处理： 2.1.1最好使用流动相溶解样品。 2.1.2使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。 2.1.3使用0.45μm（或0.45μm以下）的过滤膜过滤除去微粒杂质。 2.2流动相的配制： 液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此

要求流动相具备以下的特点： 2.2.1流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。 2.2.2流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。 2.2.3流动相的黏度要尽量小，以便在使用较长的分析柱时能得到好的分离效果；同时降低柱压降，延长液体泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。 2.2.4流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。 2.2.5流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。 2.2.6在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。 2.3流动相流速的选择： 因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml／min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml／min为佳。 当选用最佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。 注意： 2.3.1由于甲醇廉价，对于反相柱推荐使用甲醇体系(必须使用乙腈的场合除外)。 2.3.2对于正相柱推荐使用沸程为30-60℃的石油醚或提纯后的己烷作流动相，没有提纯的己烷不得使用。用水最好使用超纯水(电阻率大于18兆欧)，去离子水及双蒸水中含有酚类杂质，有可能影响分析结果。 2.3.3含水流动相最好在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不

Waters HPLC色谱柱介绍

如何选择理想的 HPLC分析柱 HPLC分析柱
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如何看待色谱柱？
色谱柱是液相色谱工作的最重要又最常使用的工具
对工具了解越多，越有可能尽早选对合适的工具，使工作开展的更顺 利
工欲善其事，必先利其器！
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沃特世价值所在： 技术能力+品质保障+专业服务
Better traceability & control of the entire process
Waters
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? Manufactures under cGMP, ISO 9001 and ISO 13485 guidelines ? Registered with FDA as a medical device manufacturer
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概要
如何认识色谱柱？ 如何认识色谱柱？ 沃特世色谱柱： 沃特世色谱柱：为色谱工作者的任务而设计 XBridge Atlantis SunFire XSelect UPLC—HPLC方法转换 HPLC—OBD 制备柱无优放大
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实验室色谱柱管理规程

实验室色谱柱管理规程 1目的为了规范实验室内色谱柱的使用。确保操作人员能正确规范地使用色谱柱，以保证色谱柱的使用寿命，制定本规程。 2 范围本规程适用于实验室内所有分析用色谱柱的管理。 3 职责QC人员对本规程的实施负责。 4程序 4.1 色谱柱的采购 4.1.1 分析人员视实验室内的欲检验样品情况及现有的色谱柱使用情况，提出色谱柱的采购申请，报相关负责人审核后交采购人员采购。 4.1.2 分析人员提交申请时应仔细说明欲采购色谱柱的型号、规格和数量及购买期限。 4.2 色谱柱的使用 4.2.1 对新购进的色谱柱，应检查色谱柱的外表面、封口情况，随柱色谱图、柱效、分离度、拖尾因子测定，说明书等，不符合要求的应退货，符合要求的应在SOP-QC020-01-R1“色谱柱登记表”上进行登记，注明领用日期和开始使用日期，并且进行统一的编号。 4.2.2 色谱柱编号规则 表示色谱柱的流水号 表示购入的月份 表示购入的年份 表示液相色谱柱 表示分析部门

4.2.3 液相色谱柱 4.2.3.1 液相色谱柱的使用前注意事项 色谱柱的储存液若无特殊说明，均为有机溶剂，反相柱常用甲醇、乙腈或者高比例的甲醇/乙腈-水溶液，正相柱常用脱水处理后的纯正己烷。使用前，一定要注意色谱柱的储存液与待分析样品的流动相之间是否互溶。在反相色谱中，如果流动相中缓冲盐的浓度较高（＞0.1mmol/L），必须先用低浓度的甲醇/乙腈-水溶液（10～20%）冲洗10～20min，否则缓冲盐在高浓度的有机相中很容易析出，从而使色谱柱堵塞，无法恢复。 4.2.3.2 液相色谱柱使用方向 装色谱柱时应使流动相流路的方向与色谱柱标签上箭头所示方向一致。除另有规定外，不宜反向使用，否则会导致色谱柱柱效明显降低，无法恢复。 4.2.3.3 液相色谱柱的评价(必要时自己做，没其它要求时以出厂报告为准) 流动相：反相柱（C18）一般用甲醇：水=85：15（V/V）或乙腈：水=60：40（V/V）. 样品物质：可用预订用途的供试品代替。 除另有规定外，色谱柱的理论板数应不小于1500、分离度应不小于1.5、重复进样间的RSD不超过2.0%。 4.2.3.4 流动相 流动相中所使用的各种有机溶剂应尽可能使用色谱纯，水应为纯化水或注射用水,如果流动相含盐，还应将配制好的流动相经0.45μm或0.22μm 的滤膜过滤。另外，装流动相的容器和色谱系统的在线过滤器等装置应清洁，否则将影响色谱柱寿命。以硅胶为基质的各种键合相对酸和碱都很敏感，一般pH使用范围为2.0～8.0，应参阅色谱柱使用说明书使用。 4.2.4 色谱柱使用后，应填写SOP_QC020-01-R2“色谱柱的使用日志”。使用日志的内容应包括以下方面的内容： 4.2.4.1 色谱柱的名称、型号、规格、编号 4.2.4.2 色谱柱的使用日期、用途 4.2.4.3 色谱柱的清洁/老化过程、系统适用性评价数据 4.2.4.4 封柱的溶液等 4.2.5 色谱柱使用时，必须对分析样品进行系统适用性试验。原则上一个品种专用一支色谱柱。且必须在色谱柱上标注专用于哪个产品的标识。 4.3 色谱柱的维护和保养 4.3.1 液相反相色谱柱用后长时间不使用时的保存

√ 色谱柱使用常识

色谱柱使用常识 1.色谱柱的安装 ⑴、用过滤和脱气的流动相（不含缓冲盐）彻底冲洗色谱仪的泵和管路，务必使系统中不含气泡。 ⑵、根据色谱柱上所标示的流动相流向，将色谱柱入口与泵端管路相连，柱出口不连。 ⑶、将泵的流速设为0.1mL/min或更低，流速缓慢地上升到正常流速（t>5min）。 ⑷、当溶剂从色谱柱出口端自由流出时，将流速设为0，把柱出口与检测器端的管路相连。 ⑸、用10－30倍柱体积的流动相、正常流速平衡色谱柱。 ⑹、氨基柱、氰基柱既可在正相环境下使用，也可在反相环境下工作。当需要从反相变为正相或正相变为反相时，需要用20－30倍柱体积的THF作为过渡溶剂冲洗系统，否则易使泵的单向阀堵塞，出现压力异常的现象。 2.色谱柱使用注意事项 ①、流动相： a、溶剂必须是HPLC级的，试剂则尽可能使用高纯度的； b、不与固定相发生化学反应，粘度小，且对样品有适宜的溶解度，要求k在1～ 10范围内（可用范围）或2～5（最佳范围），k值太小，不利于分离；k值太大，可能使样品在流动相中沉淀； c、流动相使用之前必须过滤和脱气； d、确保溶剂间是相互混溶的； e、流动相必须与检测器相匹配，如用紫外检测器时，不能选用截止波长大于检 测波长的溶剂。

痕量的杂质会极大地降低色谱柱的性能，当需要更换流动相时，确保溶剂（缓冲液）之间是相互混溶的。若使用的溶剂与色谱柱中的溶剂不能混溶，则需使用过渡溶剂，否则会对色谱柱产生永久性的伤害。盐或缓冲液从流动相中析出也会对色谱柱产生永久性的伤害。每次进样前应该检查样品在流动相中的溶解性，如果可能尽量使用流动相溶解样品。 ②、固定相： a、流动相的pH值应保持在2.0－8.0之间（除非有特殊说明）； b、如果有必要可使用预饱和柱和保护柱； c、使用氨基柱时，流动相和样品中尽量避免含醛类和酮类物质。 当前的反相色谱柱填料可分为以下三种： ⒈硅胶柱：柱效高，机械强度大，但对pH敏感，低pH值(<2.0)会使键合相水解（除去键合的功能集团）；高pH值（>8.0），硅胶溶解。如果流动相的pH值接近2.0或8.0，需要使用预饱和柱。 ⒉有机聚合物填料：在宽pH范围内稳定，残留硅羟基效应较小；但其柱效低，机械强度不高，在不同的溶剂中可能缩水或溶胀。在应用过程中，压力绝对不能超过其最大能承受的限制，且流动相中有机溶剂如甲醇、异丙醇、乙醇的含量不能超过10％。 ⒊有机－无机杂化粒填料：新开发的一种新型填料，由两种高纯的单体（有机聚合物和无机硅烷）合成的高纯度填料，此类填料将硅胶填料和有机聚合物填料的优点有机地结合起来，柱效高、机械强度高、稳定性好、pH范围宽，特别是表面和颗粒内部的硅羟基大部分被有效的屏蔽，使其对碱性物质的保留性能非常好。 ③、背压（backpressure）和流速： a、保持背压低于3500psi（245bar）； b、避免任何突然的压力变化；

层析柱(色谱柱)填料介质的装载及洗脱操作规程

层析柱（色谱柱）填料介质的装载及洗脱操作规程 工业制备层析柱（色谱柱）的填料装载充填和洗脱操作的规范直接影响色谱分离纯化工艺过程的效率，迈思通公司经过多年的实践经验和该行业专家的指导，编写了关于《层析柱（色谱柱）吸附介质的充填及洗脱规程》的方法，供广大用户和科研者参考。 一、柱头安装是否合适及是否严密的检查 1、检查下柱头是否按图纸要求安装?（要求按图纸要求安装） 2、检查下柱头内，是否安装了防止吸附剂（例如硅胶）漏出的滤布（或滤网）。 3、所用滤布（滤网）的材质要求能耐所用溶剂的腐蚀，而且孔径很小，一般要求使用500目 以上孔径大小的滤布（网）。 4、下柱头安好，紧固后，从柱上端（开口）加入所用洗脱剂中极性较小的一种溶剂（例如已 烷、石油醚、甲苯等），使溶剂液面比下柱头上部分离出20-30厘米，仔细观察下柱头是否漏溶剂。如果漏，则必须坚固（或重装），直至不漏为止。 5、检查确实不漏后，放出柱内溶剂，准备装吸附剂（例如硅胶等）。 二、充填吸附剂 以充填（或称装填）硅胶为例，作如下说明： 1、干法装柱 ①、取吸附剂（例如硅胶）记下硅胶的量，（等装完柱后，检查剩余硅胶量，就可以知道装入

柱中的硅胶量了）。 ②、工作人员戴上口罩，准备好木槌，有人从柱上端倒入一定时的硅胶，柱下边有人用木槌敲 击柱外壁，振实硅胶；一边加硅胶，一边敲击柱；最好硅胶加到什么高度，就在此高度敲击； 且向上下移动敲击。如此，直至硅胶装满时为止；再上下移动敲击一阵子；至硅胶上平面不再下沉，而且硅胶面很实时为止。 ③、如果体系中没有设预柱，层析柱中上端硅胶不把装满，留出空间待“上样”用。 ④、如果有预柱的体系，层析柱应装满硅胶。 ⑤、干法装柱，粉尘大，且敲击声大，柱外表易变成不光亮，但不耗溶剂。 2、湿法装柱 ①、同上，准备一定时的硅胶，且记录下硅胶量。 ②、准备一只30-50升的耐溶剂腐蚀的塑料桶，例入极性小的且配洗脱剂时需用的溶剂（例如 已烷，石油醚、甲苯等），再例入硅胶，搅拌混合。再将此浆液倒入（或用勺舀）层析柱中。这样，一次次倒入后，柱内浆液面上升到柱上部；再将柱下端出液管通过一缓冲罐与真空系统接通（事先接好）。开关真空，使柱上端浆液慢慢下降，再不断补浆液（最好使硅胶面总是在液面下，这样柱中几乎没有空气），直至装满。再不断开真空抽液，不断从柱上端加入溶剂，直至硅胶面基本不降为止。 ③、湿法装柱，有一部分溶剂损耗，且溶剂气味大，环境不佳；但粉尘少，且不伤柱的外表面。 ④、干法装的硅胶量，有可能比湿法装得稍多一点 三、上样 1、干法上样