葡聚糖凝胶LH-20使用方法
葡聚糖凝胶 Sephadex LH20 使用说明及使用心得
问：分得效果不是很好，上了有 8 毫升的样，我用甲醇洗脱，结果用 约一个保留体积就洗完了，东西不仅越分越少，而且仍然和没上柱之前差 不多，很让人困惑，郁闷。
了 1g 干态的,Sephadex LH20 对不同溶剂中的保留体积： water 2.1ml MeOH 1.9ml EtOH 1.8ml CHCl3 1.6ml n-BuOH 1.6ml 丙酮 0.8ml 乙酸乙酯 0.4ml 甲苯 0.2ml
2 "还有是不是样品的溶解是不是要与洗脱的起使浓度相同?如何确定样品 在最佳配比的容液中溶呢?"
不要着急,实验是一点一点做出来的,刚开始总是困难的.首先我要说 的是 Sephadex LH20 不是万能的,你的样品不一定适于用它分离,
1 "结果用约一个保留体积就洗完了",这很正常,这也是 Sephadex LH20 这种填料的特点:"洗脱体积一般为 2-3 个保留体积，对特殊保留强的化合 物，可洗脱 5 个保留体积",
3. 样品的处理和洗脱溶剂的选择。
如果样品极性大，选用反相溶剂洗脱（甲醇－－水），样品用最少体积 的甲醇－－水（尽可能甲醇少一些）溶解，过滤后，湿法上样（必须要进 行过滤！否则把 Sephadex LH-20 堵塞，就必须将 Sephadex LH-20 的柱头 部分弃去，造成不必要的浪费）。
如果样品极性小，这选用正相溶剂洗脱（氯仿－－甲醇），样品用最少 体积的氯仿－－甲醇溶解，过滤后，湿法上样。
当然有影响,Sephadex LH20 在不同的溶剂中的吸涨程度是不同的(任何 填料都是这样,只是 Sephadex LH20 很明显),一般在丙酮，乙酸乙酯 中收 缩很厉害,所以一般不用丙酮，乙酸乙酯 作溶剂,如果前后使用的两种洗脱 溶剂对 Sephadex LH20 的吸涨程度相差很大,还会产生大量气泡.以下列举
Sephadex LH20
Sephadex LH-20葡聚糖凝胶
——最适合天然产物的纯化,特别是嗜脂性分子纯化及制备
Sephadex 葡聚糖凝胶通过表氯醇交联多个葡聚糖得到。
葡聚糖与双官能团的表氯醇交联得到产品为G-10、G-25等。
通过羟丙基化将Sephadex G转化为可在有机溶剂中溶涨的葡聚糖凝胶得到产品Sephardex LH-20。
层析原理:
∙凝胶过滤--------依赖于分子的大小和形状
∙吸附层析-----依赖于被分离化合物与凝胶之间的氢键数量和质量
∙分配层析----------------依赖于被分离化合物在流动相（溶剂）和固定相（凝胶）之间的分配，这主要由样品的极性和溶剂的极性决定的。
特点:
∙适合用有机溶剂分离嗜脂性分子，可以非常经济地大规模制备各种天然产物
∙结合凝胶过滤、分配色谱及吸附性层析于一身，分离结构非常相近的分子∙载量可高达300mg样品/ml凝胶，极少需要再生，分离效果可保持十几年不变。
LH-20使用说明书
葡聚糖凝胶LH-20使用说明
适合用于有机溶剂分离嗜脂性分子，可以非常经济的大规模制备各种天然产物，尤其在中药有效成分提取中作为大孔吸附树脂解析物的纯化。
结合凝胶过滤﹑分配色谱及吸附层析于一身，能分离结构相近的分子。
因此使用中要考略几种色谱的作用机制。
最高载量可达250mg样品/ml凝胶﹑极少需要再生﹑使用得当，分离效果可保持不变。
上样量视被分离物的结构性能的差异而定－差异大，可大；差异小，应小。
凝胶过滤的上样量一般为6－8％的床体积，我们建议初次上样量控制在3％的床体积，视分离情况可以逐步增加；柱高的选择也与分离要求相关――难分物质要有一定柱高和流速控制；流动相可参考TLC的条件，正确的流动相可以提高分离度并缩短分离时间。
（见附表“溶剂混溶性”）
流动相的常用溶剂为：
水甲醇丙酮乙酸乙酯二氯甲烷
上述溶剂的极性依次降低，对带有极性的被分离物而言，保留值和分离度依次递增；同理选用的凝胶柱高可依次降低，流速可以增大（或上样量可以增加）。
使用方法：将干粉浸泡于60—70％乙醇中过夜（充分搅拌），洗去可能存在的残留物，抽干然后湿态装柱，动态用一倍柱体积的60—70％乙醇淋洗，再用水洗净乙醇即根据自己选用的流动相体系平衡、上样
LH-20在不同溶剂中的溶胀性能：
溶剂混溶性表。
sephadex lh-20 的分离葡聚糖范围
sephadex lh-20 的分离葡聚糖范围
Sephadex LH-20 是一种常用的凝胶过滤材料，用于分离并提
纯生物大分子，包括蛋白质、核酸和多糖等。
对于葡聚糖来说，Sephadex LH-20 主要可用于分离和纯化大小适中的葡聚糖。
具体而言，Sephadex LH-20 适用于分离葡聚糖的范围一般是
分子量在1000到10000之间的葡聚糖。
较小的葡聚糖可能会
在透明小球中渗透或扩散，从而导致分离效果不佳。
较大的葡聚糖则可能无法顺利进入透明小球内部，也会影响分离效果。
需要注意的是，具体的适用范围也可能会因实验条件、溶剂体系、温度等因素而有所变化。
因此，在实际操作中，最好根据具体的实验目的和实验条件进行优化和确定。
SEPHADEXLH-20葡聚糖凝胶的指标
SEPHADEX LH-20葡聚糖凝胶的指标
一、主要技术指标：
1.排阻极限：4-5KD；
2.尺寸排阻模式小于总体积的20％；
3.正相分配模式小于总体积的1％；
4.胶粒形状：球形，多孔；
5.颗粒大小（干）18-111μm（直径）；
6.颗粒大小中间值（干）：70μm（直径）；
7.颗粒大小（甲醇）27-163μm（直径）；
8.颗粒大小中间值（甲醇）：103μm（直径）；
9.最大线性流速：720cm/min，耐受pH值为2-13；
10.操作温度4-40℃。
11.产地：瑞典，GE进口原装；
二、参考品牌及型号：
GE公司产的SEPHADEX LH-20葡聚糖凝胶
三、数量及包装（封装）方式：
8瓶500g原包装
四、到货地点与时间：
到货地点：厦门市大学路184号国家海洋局海洋生物资源综合利用工程技术中心
到货时间：中标后____14__天到货。
五、服务要求：
1、保质期限为以货到买方现场之日起___12___个月内；超过保质期限后，卖方继续提供有偿技术服务。
六、需要上传的资质附件
1.投标单位必须是正规经销商或具备正规代理资质供货商，要求供应商上传投标产品正规渠道证明，并上传相关附件；
2.法人营业执照的复印件（须加盖本单位公章）,税务登记证书复印件（须加盖本单位公章）,组织机构代码证复印件（须加盖本单位公章）,厂家长期代理协议或授权书（须加盖本单位公章）,请供应商将以上资质需求上传。
3.。
LH-20介绍及应用
Sephadex LH-20
国内其它厂家生产的LH-20
FunctiontestforLH20drum201:1_UV1_254nm FunctiontestforLH20drum201:1_UV2_280nm mAU
在Sephadex LH-20 上的分离 p193
Sephadex LH-20 纯化植物激素及 蛋 白抑制剂
可利用Sephadex LH-20 分离细胞分裂素、脱落酸 和生长素。 可利用Sephadex LH-20 分离出几丁质酶的抑制剂 Psmmaplin A,它是一种酪氨酸的衍生物。 Shigeo Suzuki 从海底真菌TUF139中分离出抑制微 管蛋白组装的抑制剂，为脂肪酸的混合物。
•Sephadex LH-20 纯化黄酮及黄酮苷
5m柱 甲醇
槲皮素 Quercetin
山奈酚 Kaempferol
2m柱 甲醇
橙皮素 Hesperetin
几种黄酮类物质的分离 （上图：1. 芹菜苷配基 2. 漆黄素 3山萘酚） （下图：1.橙皮素 2.山萘酚 3. 槲皮素）
LH-20 应用：黄酮类化合物
葛根素 Puerarin
前处理后的葛根素半成品在 不同乙醇浓度的层析比较
左图：70%乙醇洗脱
右图：100%乙醇洗脱
前处理后的葛根素半成品1ml Q HiTrap 上的层析结果
•葛根素 •↙
Q柱后葛根素样品在LH-20柱上的层 析结果
•↙ 葛根素
Sephadex LH20纯化大豆异黄酮
大豆异 黄酮
Sephadex LH-20的的溶剂系统
Sephadex LH-20常选用单一的溶剂系统，应 用最多的是极性强弱不同的如下五种： 1、水； 2、甲醇； 3、丙酮； 4、乙酸乙脂 5、二氯甲烷 根据溶剂极性的不同，样品分别发生正相或 反相分配作用。 预试验时推荐使用40cm长层析柱。然后根据 预试时样品峰的分离情况，加长层析柱进行进 一步的分离。一般水、甲醇、丙酮为流动相 时，由于其洗脱能力强，柱长常使用5m；而 二氯甲烷、乙酸乙脂则更多地使用1m柱进行 分离。 优点：单一溶剂系统有利于溶剂系统的回 收。
葡聚糖凝胶柱的使用方法
葡聚糖凝胶柱的使用方法：(1) 预处理 称取Sephadex G-25（50－100目）约5g，加入蒸馏水100ml，置室温下3h 进行溶胀。
(2) 装柱 凝胶层析柱的直径与柱长之比一般为1:15。
柱的底部用装有细玻璃管的橡皮塞塞紧，用洗净的玻璃丝（约200目尼龙布）垫底或购买类似规格的商品柱。
然后将柱垂直安装好，先加入1/3柱体积蒸馏水，接着将溶胀好的凝胶边搅匀边连续装入，使它们在柱内自然沉降。
同时大开下口慢速流出蒸馏水。
装柱后的凝胶必须均匀，不能有气泡或明显条纹。
否则，必须到出重装，装好后，用蒸馏水平衡2－3h 即可加样品分离。
(3) 加样加样前，首先把柱内凝胶上面多余的蒸馏水放出，直到柱内液面与凝胶表面相齐（或留一极薄液层）为止。
然后，由柱的上端加水解液2ml ，注意不要让溶液把凝胶冲松浮起，加完样品后，打开下口缓慢放出液体至液面与凝胶面相齐，再用少量蒸馏水冲洗原来盛样品的容器2－3次，待全部进入层析柱后，即可进行洗脱。
(4) 洗脱与收集洗脱时，用蒸馏水作洗脱剂，并且要连续不断地进行，使凝胶柱上端保持一定的液层，防止凝胶柱表面的液体流干。
本实验洗脱液流出的速度应控制在0.8－1.0ml/min 。
洗脱液的收集采用分管连续顺序收集，每管收集3ml ，共收集10管。
据经验，4或5号管核苷酸浓度最大，可作为层析鉴定的样品液。
但因层析柱长度的差异，管号会有变化，必要时可用紫外检测A260nm ，找出浓度最大的管号。
For personal use onlyin studyand research ; not for commercial use(5) 凝胶的再生和回收凝胶柱使用一次后，必须反冲疏松一次，平衡后再使用。
若使用数次，就需要再生处理。
用0.1mol/L NaOH-0.5mol/L NaCl溶液浸泡，然后用蒸馏水洗至中性备用。
若实验完毕，将再生后的凝胶在布氏漏斗上用蒸馏水洗涤抽干，再用95%乙醇洗两次，在60℃烘箱中烘干，回收保存。
葡聚糖凝胶Sephadex LH-20在天然产物分离纯化中的应用
葡聚糖凝胶Sephadex LH-20在天然产物分离纯化中的应用陈亚军;高岩;杨春娟;苏晓琳;王蒙;王知斌【期刊名称】《化学工程师》【年(卷),期】2016(0)8【摘要】凝胶过滤色谱法是分离纯化天然产物的有效方法之一,Sephadex LH-20是最常用的一种葡聚糖凝胶填料,具有操作简便、分离纯度高,适用于多种有机溶剂等优点,可用于分离纯化苯丙素、黄酮、醌类、生物碱和萜类等天然产物.本文对Sephadex LH-20的分离原理和特性及在天然产物分离纯化中的应用方面进行系统综述,为相关的分离纯化研究和实际生产提供了重要的参考依据.【总页数】4页(P53-55,80)【作者】陈亚军;高岩;杨春娟;苏晓琳;王蒙;王知斌【作者单位】黑龙江中医药大学,教育部北药基础与应用研究重点实验室,黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学,教育部北药基础与应用研究重点实验室,黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学,教育部北药基础与应用研究重点实验室,黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学,教育部北药基础与应用研究重点实验室,黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学,教育部北药基础与应用研究重点实验室,黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学,教育部北药基础与应用研究重点实验室,黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室,黑龙江哈尔滨150040【正文语种】中文【中图分类】R284.2【相关文献】1.葡聚糖凝胶Sephadex LH-20分离苷类的研究进展 [J], 梁耀光;吕巧莉2.大孔树脂联合Sephadex LH-20葡聚糖凝胶纯化蜂胶总黄酮工艺研究 [J], 李治;汤毛毛;李景;常相伟;刘劲松;彭代银;王国凯;桂双英3.大孔树脂联合Sephadex LH-20葡聚糖凝胶纯化蜂胶总黄酮工艺研究 [J], 李治;汤毛毛;李景;常相伟;刘劲松;彭代银;王国凯;桂双英4.PVP,C_(18)-柱和Sephadex LH-20在激素纯化中的应用 [J], 袁朝兴;沈镇德;商慧琛5.葡聚糖凝胶PT-25在两种生物制品分离纯化中的应用 [J], 王芝祥;张培华;李永清;李彬;叶世德因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
SephadexLH-20的应用综述
1. Sephad ex LH-20简介羟丙基葡聚糖凝胶LH-20是一种S ephad ex G-25的羟丙基衍生物，字母LH的含义是这种凝胶骨架在亲脂溶剂中或在水溶剂中都能溶胀。
在G-25分子中引入羟丙基以代替分子中羟基上的氢，葡聚糖凝胶分子的葡萄糖部分将与羟丙基形成醚键连接：R—OH――→R—O—CH2CH2CH2OH与Sepha dex G相比，Sephad ex LH-20分子中-OH总数虽无改变，但碳原子所占比例却相对增加了，从而使葡聚糖的亲脂性增大。
这种凝胶既有亲水性，又有亲脂性，不仅可在水中应用，也可在极性有机溶剂或它们与水组成的混合溶剂中膨润使用，如丁醇、氯仿、四氢呋喃、二氧六环等，应用范围增大，对黄酮、蒽醌、香豆素等成分也能分离。
Sephad exLH-20除保留有Sepha dex G-25原有的分子筛特性，可按分子量大小分离物质外，在有极性与非极性溶剂组成的混合溶剂中常常起到反相分配色谱的效果，适用于不同类型有机物的分离，在天然药物分离中得到了越来越广泛的应用。
使用注意事项：羟丙基葡聚糖凝胶Sep hadex LH-20虽然是一种两性凝胶，但由于在不同溶剂中的溶胀因子各不相同（见表1），因此在柱中直接更换溶剂是不允许的，床体积在2.5mL ／g干胶以下的不能用于G PC分析。
这种凝胶在有机溶剂中分离较小分子量的脂溶性化合物是十分有效的。
但在使用时不允许有氧化剂存在。
再生与保存：Sephad ex LH-20价格比较昂贵。
用过的Sep hadex LH-20可以反复再生使用，而且柱子的洗脱过程往往就是柱子的再生过程。
短期不用时可以水洗→含水醇洗(醇的浓度逐步递增)→醇洗，最后泡在醇中贮于磨口瓶中备用。
Sephadex LH-20使用说明
Sephadex LH-20使用说明Sephadex LH-20是由葡聚糖G-25羟丙基化加工而成，属于分子筛凝胶，尤其适用于天然产物在有机溶剂中的纯化。
例如：类固醇、萜类、脂类以及小分子多肽等，Pharmadex LH-20同时适用于分子类别非常相似的物质的分离和工业规模的制备，既可用于初步纯化步骤，也可用于最终精制步骤，如非对映同分异构体的分离。
制备凝胶悬浮液Sephadex LH-20在使用之前必须进行溶胀。
在溶胀的过程中，要尽量避免过分搅拌，否则会破坏球形胶粒，且要避免使用磁力搅拌器。
1．在室温下，将凝胶溶胀于层析溶剂中至少三小时，溶胀后胶体积的大小决定于所使用的溶剂系统，请参考后页之干胶溶胀表计算特定柱体积所需要干胶的量。
2．使溶胀胶体积沉淀之后占总体积的75%，上层溶剂占25%，这时，悬浮液从一个容器倒入另一容器时胶粒可移动。
3．将溶胀后的凝胶根据装柱要求均匀倒入柱内，在保证胶粒不变形的前提下，应在尽可能高的压力下装柱，反压不要超过1.5ba。
平衡上样前，用洗脱液平衡层析柱至少两个柱体积直到基线变得平稳为止，如改变溶剂应该注意凝胶在新溶剂中的溶胀性质，并根据性质确定柱高调节器的位置，如使用相同的溶剂，在以后的层析中柱平衡可以省略。
洗脱液为确保延长层析柱的使用寿命，所有的缓冲液都应该离心或经过0.45um的膜过滤以除去杂质。
样品样品体积应该占柱总体积的1-2%，同样在使用之前样品应该离心或经过0.45um 的膜过滤。
洗脱洗脱流速应根据情况而定，最大张性流速约12cm/min（反压1.5ba），建议流速为1-10cm/h。
总体来说，较低的流速，具有较高的分辩率。
再生凝胶再生通常是先用2-3个柱体积的洗脱液进行清洗，如更换洗脱液，则需要重新平衡。
体积流速与线性流速的关系线性流速=体积流速/横截面积溶胀体积由于Pharmadex LH-20的溶胀体积依赖于溶剂，所以对于不同直径的柱可根据比例增加或减少旧柱体积以便计算出新体积。
葡聚糖凝胶的操作方法
葡聚糖凝胶的操作方法
1.将葡聚糖凝胶粉末放入1.5ml离心管中，并加入所需的培养基或溶液（通常是0.1M PBS缓冲液）
2.用紫外灯或消毒灯照射管子和粉末，以杀菌消毒。
3.将管子在室温下静置15分钟，使凝胶充分水解。
4.在使用前，用无菌过滤器或离心管转运转移液体中的小颗粒或杂质。
5.将细胞或材料悬浮在凝胶中，并快速转移和组装需要的实验器具（如培养皿、培养板等）。
6.将实验器具放置在37的恒温箱中，使凝胶在液体中固定并形成3D结构。
7.根据实验的需要，可以选择添加细胞营养物质或生长因子等，以促进细胞的生长和分化。
8.在实验结束后，可以用酶解剂将凝胶中的细胞和材料溶解，并收集并分离细胞和其他成分，进行后续的分析和研究。
葡聚糖凝胶使用说明书
上课下子棋保证书详细(第一篇)此文档协议是通用版本，可以直接使用，符号*表示空白。
敬重的班主任老师：在此，非常愧疚地向你递交我这份保证，由于一次保证意味着我犯了一次重大过错。
此次，我由于上课玩五子棋、不好好听课，给班级上课秩序造成了比较严峻的影响。
您观看到我的不良行为，准时加以制止，并且没收我的手机作为惩罚。
如今，经过面壁思过与深刻反剩我深深地觉悟到自己所犯错误的严峻性：第一，我身为一名在校同学，学习无疑是自己的本职工作，也是必需履行的义务。
其次，在高校期间的教育对于每个人来说都是非常宝贵的，而我却不思进取，甚至严峻到在上课期间玩手机、不用心听课。
这更是犯了非常严峻的错误，这是对于教育资源的铺张。
第三，身为一名同学，我犯这样的错误，无疑是大大辜负了我父母对我的殷切期望。
这对于我年迈的父母来说，是一个很大的打击。
我的父母辛苦赚钱，送我们进入高校深造，为的就是我们能够努力学习，找到一份好的工作，将来能够生活得更好。
而为的使我们能够在各方面活动好的条件，父母为我们购得手机。
而我却恰恰不用功读书，不能全身心的投入学习，反倒是上课玩五子棋。
如今我做了错事，辜负了我的父母，我觉得很惭愧，想起父母的辛苦，不由地流泪。
再看我的。
错误，我也是很抱歉辛勤教育我的老师的。
老师为我们辛勤工作，为我们努力备课，而我却辜负老师的辛苦，上课不好好听讲是对老师的不敬重。
此次保证过后，我也会跟老师做当面正式赔礼的。
最终我写一下对今后保证：我保证今后上课期间不做任何**行为了，上课期间不再玩五子棋。
今后仔细听每一节课，在校当一名好同学，在家做一个孝顺的儿子，将来为社会做出自己的一份贡献。
此致敬礼！保证人：******日期：*****上课下子棋保证书详细(第二篇)合同范本合同编号：[合同编号]标题：上课下子棋保证书日期：[签署日期]甲方：[甲方机构/个人名称]地址：[甲方地址]电话：[甲方电话]乙方：[乙方机构/个人名称]地址：[乙方地址]电话：[乙方电话]鉴于甲方作为[甲方机构/个人名称]（以下简称“甲方”）提供上课下子棋服务，乙方作为[乙方机构/个人名称]（以下简称“乙方”）接受上述服务，双方达成以下协议，以兹共同遵守：一、合作内容1.1 甲方将为乙方提供专业的上课下子棋服务，包括但不限于教授棋谱、指导棋局策略等。
葡聚糖凝胶柱使用及注意事项
葡聚糖凝胶柱使用及注意事项葡聚糖凝胶柱是一种常用的色谱柱，其主要由多糖聚合物构成，具有多孔结构以及极高的比表面积。
葡聚糖凝胶柱在生物分离、蛋白质纯化以及分析等方面有重要的应用。
下面将介绍葡聚糖凝胶柱的使用方法以及注意事项，并列举了几种常见溶剂的溶胀系数作为参考。
使用方法：1.预处理：新柱使用前需进行预处理。
首先，在使用前用适当的缓冲液再生柱子，一般推荐使用PBS缓冲液进行再生。
其次，用去离子水进行洗脱，去除缓冲液中的离子。
2.样品准备：准备好带有样品的溶液，可以是蛋白质溶液、核酸溶液或者其他需要分离的溶液。
3.进样：将样品溶液注入到柱子中，可以使用曲线尖管或者注射器进行。
4.溶剂流动：使用适当的流动缓冲液进行柱子的着色，常用的缓冲液有PBS缓冲液、甲醇和乙醇。
5.收集分离的组分：通过收集分离的组分，可以进行后续的实验操作或者分析。
注意事项：1.柱子的平衡：在使用柱子前，将柱子放入合适的缓冲液中，进行平衡处理，通常需要约30分钟。
2.柱子的保管：使用完毕后，需将柱子用适当的缓冲液保存，避免干燥。
3.柱子的温度：柱子的运行温度一般在室温下进行，避免过高温度的使用，以免影响柱子的性能。
4.溶液选择：在选择适当的缓冲液时，应根据样品的性质以及需求进行选择，不同的缓冲液对分离的效果会有影响。
5.柱子的清洗：使用完毕后的柱子需要进行彻底的清洗工作，尤其是对于经常使用的柱子，清洗工作要做得彻底。
下面是几种常见溶剂的溶胀系数参考值：1.水：溶胀系数为1，对于葡聚糖凝胶柱来说，水是适用的溶剂。
2.硫酸：溶胀系数为0.57，硫酸能够完全渗透葡聚糖凝胶柱。
3.乙醇：溶胀系数为0.44，适量的乙醇可以使用，但过高浓度的乙醇可能会影响柱子的性能。
4.甲醇：溶胀系数为0.65，甲醇也可以使用，但同样需要注意控制浓度。
总结：葡聚糖凝胶柱是一种常见的色谱柱，具有广泛的应用。
在使用葡聚糖凝胶柱时，需进行适当的处理以及注意事项，以保证柱子的性能和寿命。
葡聚糖凝胶柱使用及注意事项(包含各种溶剂的溶胀系数)
葡聚糖凝胶柱使用及注意事项1 Sephadex G型葡聚糖凝胶只适合在水中使用，Sephadex G-25羟丙化后就是Sephadex LH-20。
其既有分子筛作用，在由极性与非极性溶剂组成的溶剂中还有反相层析效果。
虽然价位很高，但由于性能颇佳，可再生利用，所以倍受亲睐。
此外上柱样品损失很少，对处理小样品较好，这也是我们实验室常用的原因之一。
2 Sephadex LH20 的原理。
Sephadex LH20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。
因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，最后出柱。
如果使用反相溶剂洗脱，Sephadex LH20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。
如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。
3 Sephadex LH20 洗脱溶剂。
看完第2点后，就应该清楚Sephadex LH20 洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。
用得最多的是反相溶剂洗脱，以甲醇－－水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。
正相系统以氯仿－－甲醇最为常见，先用50％氯仿－－甲醇，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。
4 Sephadex LH20 样品的处理和洗脱溶剂的选择。
如果样品极性大，这选用反相溶剂洗脱（甲醇－－水），样品用最少体积的甲醇－－水（尽可能甲醇少一些）溶解，过滤后，湿法上样（一定要滤喔！要是把Sephadex LH20 堵啦，就得将Sephadex LH20 的柱头部分弃去，很心痛呀）。
如果样品极性小，这选用正相溶剂洗脱（氯仿－－甲醇），样品用最少体积的氯仿－－甲醇溶解，过滤后，湿法上样。
5 Sephadex LH-20的步骤。
(1) 选择条件：梯度洗脱在Sephadex使用中并不象在正相柱层析中那么重要。
凝胶Sephadex LH-20使用方法及注意事项
凝胶使用方法及注意事项1原理Sephadex LH-20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。
因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，最后出柱。
如果使用反相溶剂洗脱， Sephadex LH-20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。
如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。
2.前处理及装柱Sephadex LH-20在使用前必须进行溶胀，溶胀过程中必须避免过分搅拌，否则会破坏球形胶粒。
（1）室温下，将凝胶溶胀于层析液（一般为甲醇）中至少三小时（2）使溶胀胶体积沉淀后占总体积的75%，上层溶剂占25%凝胶悬浮液黏度要适宜A．太稠会在搅拌时产生气泡；太稀会导致装柱时沉降时间长，加凝胶悬浮液的次数增加；B．将凝胶悬浮液静止后所得上清液弃去，保留高于凝胶液面约1 cm的液体即可；C 装柱混悬液的浓度以流动性好，搅拌阻力小为宜。
（3）装柱的要点A 装柱前，先在色谱柱中加入约1/4柱高的液体（溶胀时所用的试剂）；B 装柱时，将下端活塞打开，流速尽量大，但要保证小于凝胶沉降速度，否则会干柱；C将凝胶悬浮液搅拌均匀，以漏斗倒入柱子中即可；3.流动相1.分子筛作用，常用的是甲醇、甲醇+氯仿混合溶剂。
甲醇：氯仿一般为1：1左右，切不可用氯仿做为流动相！氯仿比重大，用单纯的氯仿做流动相，填料将浮起来，严重影响分离效果！！2.反相分配作用，常用的是甲醇/水，比例可以根据实际情况进行调整，也可以是梯度洗脱（先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100%甲醇冲柱）4.样品的处理及洗脱过程（1）.最重要的一点：用尽可能少的溶剂溶解样品，样品可以很浓。
如果溶解体积很大，一定要先进行浓缩，否则基本没有多大的分离效果。
上样体积一般为柱体积的1%~5%。
（2）.很重要的一点：尽可能用起始洗脱溶剂溶解样品（很多情况下样品并不能在起始溶剂中很好地溶解）。
GE公司的葡聚糖凝胶填料LH-20的使用说明
equilibration
sample injection volume
wash
5–10 CV
5–10 CV
non-bound molecules elute before
gradient begins
gradient elution
10–20 CV
salt-free elution buffer
2–5 CV
Highly hydrophobic proteins bind tightly to highly hydrophobic ligands. Screen several hydrophobic media. Begin with a medium of low hydrophobicity if the sample has very hydrophobic components. Select the medium which gives the best resolution and loading capacity at a low salt concentration.
Weak ion exchangers DEAE and ANX (anion exchange) and CM (cation exchange): fully charged over a narrower pH range (pH 2 to 9 and pH 6 to 10, respectively), but give alternative selectivities for separations.
Choice of ion exchanger Begin with a strong exchanger, to allow work over a broad pH range during method development .
葡聚糖凝胶的使用说明
葡聚糖凝胶的使⽤说明葡聚糖凝胶使⽤说明化学和物理性质葡聚糖凝胶是⼀种珠状的凝胶，含有⼤量的羟基，很容易在⽔中和电解质溶液中溶胀。
G型的葡聚糖凝胶有各种不同的交联度，因此它们的溶胀度和分级分离范围也有所不同。
葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在⽽受影响。
葡聚糖凝胶有不同的粒度。
超细级的葡聚糖凝胶是⽤于需要极⾼分辨率的柱⾊谱和薄层⾊谱。
粗级和中级的凝胶⽤于制备性⾊谱过程，可在较低的压⼒下获得较⾼的流速。
另外，粗级也可⽤于批量⼯艺。
化学稳定性葡聚糖凝胶不溶于⼀切溶剂（除⾮它被化学降解）。
它在⽔、盐溶液、有机溶剂、碱和弱酸性溶液中都是稳定的，在强酸中凝胶⾻架的糖苷键被⽔解。
长期接触氧化剂将破坏凝胶，因⽽应避免使⽤。
物理稳定性葡聚糖凝胶并不熔融，可以在湿态、中性PH进⾏灭菌或在⾼压灭菌器120℃、30分钟⽽不影响它的⾊谱性质。
⼲态的凝胶加热⾄120℃以上将开始焦糖化。
葡聚糖凝胶的机械强度取决于交联度。
产品说明：使⽤⽅法：1. ⼄醇浸泡：在室温下，将⼲粉浸泡于50-60%⼄醇中⾄少24⼩时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，⽤⽆盐⽔洗去残存的⼄醇滤⼲;2. ⽆盐⽔浸泡：室温下，在⽆盐⽔中充分溶胀24⼩时，间隙搅拌，以保证凝胶的完全溶胀，然后；3. 盐酸浸泡：在常温下再⽤0.2N HCl浸泡12⼩时，间隙搅拌，滤⼲，⽔洗只中性；4. 将溶胀好的凝胶脱⽓后（真空抽滤或超声波）根据装柱要求⼀次性置⼊柱内，注意保持湿态装柱，并避免柱内产⽣⽓泡或断层；5. 上样前平衡层析柱⾄少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为⽌（流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值）；6. 凝胶过滤的上样量⼀般为5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的床体积，视分离情况可以调整；脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积，柱⾼的选择也与分离要求相关，柱⾼控制在40-50cm 以下，过⾼的凝胶层会引起较⼤的反压，应当尽可能避免。
难分离物质要有⼀定柱⾼和流速控制，脱盐时⾼径⽐为5：1即可；7. 洗脱⽅法：可以⽤⽆盐⽔，也可以采⽤上柱时的缓冲液洗脱；在上柱Buffer中加⼊NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化；8. 在位清洗（CIP）凝胶使⽤⼗次后作⼀次CIP，⽬的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋⽩。
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产品简介：Sephadex G型葡聚糖凝胶只适合在水相中使用，羟基化得到的Sephadex LH-20适合用于有机溶剂分离嗜脂性分子，在有机溶剂中纯化天然产物。
葡聚糖凝胶LH-20分离主要以凝胶过滤为主，兼具反相分配的作用。
在凝胶过滤的作用下，大分子化合物的保留力弱，先被洗脱下来，分子最小的最后出柱；在反相洗脱溶剂中，起反相分配作用，极性大的物质的保留弱先被洗脱，极性小的化合物后出柱；
产品名称: 葡聚糖凝胶LH-20
英文名称：Sephadex LH-20
规格：25g
性状：多孔，白色微球
基质：交联葡聚糖
粒径：100-200目
工作Ph：2-11
操作温度：4-40度
球蛋白分离范围：100-4000
排阻极限：4-5kd(与所用溶剂有关)
保存条件：4-25度
使用说明：
1.凝胶悬浮液的制备
将干粉浸泡于60-70%乙醇中，充分搅拌过夜，洗去可能存在的残留物，根据自己的洗脱液平衡层析至少两个柱体积直到基线平稳为止。
2.洗脱溶剂
如果样品极性大，选用反相溶剂洗脱（甲醇-水），样品用最少体积的甲醇-水溶解，
过滤上柱；如果样品极性小，选用氯仿-甲醇正相洗脱。
3样品处理
用尽量少的洗脱试剂溶解样品，常压过滤。
4.湿法上柱
5.洗脱
控制流速，一般小于1drop/s。
6.再生以后下次使用。