【CN110343661A】一种人体脂肪干细胞的提取及培养扩增方法【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910335143.0
(22)申请日 2019.04.24
(71)申请人 朗姿赛尔生物科技（广州）有限公司
地址 510000 广东省广州市白云区机场路
131号四楼D09房
(72)发明人 陈忠平　
(74)专利代理机构 广州一锐专利代理有限公司
44369
代理人 杨昕昕
(51)Int.Cl.
C12N 5/0775(2010.01)
(54)发明名称
一种人体脂肪干细胞的提取及培养扩增方
法
(57)摘要
本发明涉及细胞工程技术领域，具体涉及一
种人体脂肪干细胞的提取及培养扩增方法，包含
人体脂肪干细胞的提取步骤和人体脂肪干细胞
的培养扩增步骤；人体脂肪干细胞的提取通过人
脂肪消化液实现，所述的人脂肪消化液包含：胆
酸、甘氨酸、α1-抗胰蛋白酶、二甲基亚砜、0.9%
生理盐水、氯化镁、氯化胆碱、Trypsin -EDTA；人
体脂肪干细胞的培养扩增通过脂肪干细胞培养
基实现，所述的脂肪干细胞培养基包含：DMEM/
F12基础培养基、甲状腺素、胰岛素、谷氨酰胺、葡
萄酸铁、硒酸钠、维生素C、成纤维细胞生长因子、
L -脯氨酸、氯化胆碱、青霉素；本发明所述人体脂
肪干细胞的提取及培养扩增方法，可显著提高所
获得的干细胞的数量、
成活率和活性。

权利要求书2页 说明书5页 附图1页CN 110343661 A 2019.10.18
C N 110343661
A
1.一种人体脂肪干细胞的提取及培养扩增方法，其特征在于，包含如下步骤：人体脂肪干细胞的提取步骤和人体脂肪干细胞的培养扩增步骤。

2.根据权利要求1所述人体脂肪干细胞的提取及培养扩增方法，其特征在于，所述人体脂肪干细胞的提取通过一种人脂肪消化液实现，所述的人脂肪消化液包含：0.3~0.8 mg/ml 胆酸、0.5~1.5 mg/ml甘氨酸、0.5~2.5 mg/ml α1-抗胰蛋白酶、3~25μl/ml二甲基亚砜、175~220mg/mL 0.9% 生理盐水、60~85 mg/ml氯化镁、10~30mg/mL氯化胆碱、2.5~7.5mg/ml Trypsin -EDTA。

3.根据权利要求1所述人体脂肪干细胞的提取及培养扩增方法，其特征在于，所述人体脂肪干细胞的提取通过一种人脂肪消化液实现，所述的人脂肪消化液包含：0.5~0.7 mg/ml 胆酸、0.8~1.2 mg/ml甘氨酸、1~2 mg/ml α1-抗胰蛋白酶、10~18μl/ml二甲基亚砜、200~210mg/mL 0.9%生理盐水、70~80 mg/ml氯化镁、15~25 mg/mL氯化胆碱、4~6mg/ml Trypsin -EDTA。

4.根据权利要求1所述人体脂肪干细胞的提取及培养扩增方法，其特征在于，所述人体脂肪干细胞的提取通过一种人脂肪消化液实现，所述的人脂肪消化液包含：0.6 mg/ml胆酸、1 mg/ml甘氨酸、1.5mg/ml α1-抗胰蛋白酶、15μl/ml二甲基亚砜、205 mg/mL 0.9%生理盐水、75 mg/ml氯化镁、20 mg/mL氯化胆碱、5 mg/ml Trypsin -EDTA。

5.根据权利要求1所述人体脂肪干细胞的提取及培养扩增方法，其特征在于，所述的人体脂肪干细胞的培养扩增通过一种脂肪干细胞培养基实现，所述的脂肪干细胞培养基包含：DMEM/F12基础培养基、8~20μg/ml甲状腺素、5~10μg/ml胰岛素、8~12mmol/L谷氨酰胺、100~300ng/ml葡萄酸铁、10~25mg/ml硒酸钠、5~18mg/ml维生素C、20~30mg/ml成纤维细胞生长因子、5~13mg/ml L -脯氨酸、0.5~4.5mg/ml氯化胆碱、1~2mg/ml青霉素。

6.根据权利要求1所述人体脂肪干细胞的提取及培养扩增方法，其特征在于，所述的人体脂肪干细胞的培养扩增通过一种脂肪干细胞培养基实现，所述的脂肪干细胞培养基包含：DMEM/F12基础培养基、12~16μg/ml甲状腺素、6~9μg/ml胰岛素、9~11mmol/L谷氨酰胺、150~250ng/ml葡萄酸铁、15~20mg/ml硒酸钠、10~15mg/ml维生素C、22~28mg/ml成纤维细胞生长因子、7~10mg/ml L -脯氨酸、1~3.5mg/ml氯化胆碱、1.2~1.8mg/ml青霉素。

7.根据权利要求1所述人体脂肪干细胞的提取及培养扩增方法，其特征在于，所述的人体脂肪干细胞的培养扩增通过一种脂肪干细胞培养基实现，所述的脂肪干细胞培养基包含：DMEM/F12基础培养基、14μg/ml甲状腺素、8μg/ml胰岛素、10 mmol/L谷氨酰胺、200 ng/ml葡萄酸铁、18mg/ml硒酸钠、12mg/ml维生素C、25mg/ml成纤维细胞生长因子、9mg/ml L -脯氨酸、2.5mg/ml氯化胆碱、1.5 mg/ml青霉素。

8.根据权利要求1所述人体脂肪干细胞的提取及培养扩增方法，其特征在于，人体脂肪干细胞的提取通过包含如下步骤的方法实现：
将人脂肪组织置于入离心分离装置中，再加入生理盐水置完全浸没后充分搅拌均匀，使用离心装置分离人体脂肪组织，得上层油层、中层脂肪层、下层沉积层；将中层脂肪层置于离心分离装置中，添加等体积的人脂肪消化液混合均匀，离心分离后去浮游脂肪并取上层液体，再向上层液体中加入Dulbecco ’s磷酸盐缓冲液，然后离心，取下层沉积细胞，使用Dulbecco ’s磷酸盐缓冲液重复离心洗涤2次，下层沉积细胞即为人体脂肪干细胞；将下层沉积层置于离心分离装置中，加入等体积的脂肪组织消化剂混合均匀，离心后的下层沉积细
权　利　要　求　书1/2页2CN 110343661 A。