猪伪狂犬病病毒gB蛋白表达及免疫原性分析

收 稿 日 期 ：２０１６－０７－０６ 基 金 项 目 ：国 家 ８６３ 计 划 专 项 基 金 （新 型 抗 感 染 功 能 型 微 生 态 制 剂 的 研 制 与 应 用 ）（２０１３ＡＡ１０２８０６） 作 者 简 介 ：贾 刚 （１９８８－），男 ，山 东 泰 安 人 ，硕 士 ，研 究 方 向 ：动 物 微 生 态 学 ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｇａｎｇ０７１２＠１６３．ｃｏｍ ＊ 通 信 作 者 ：樊 梅 娜 （１９８７－），女 ，河 南 南 阳 人 ，硕 士 ，研 究 方 向 ：动 物 微 生 态 学 ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｕｅｍｅｉ４１２．ｃｏｍ＠１６３．ｃｏｍ
伪 狂 犬 病，又 称 Ａｕｊｅｓｚｋｙ’ｓ病，是 一 类 由 疱 疹 病毒科 α疱疹病毒亚科伪狂犬病病毒（ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ ｖｉｒｕｓ，ＰＲＶ）引 起 的 危 害 家 畜 及 多 种 野 生 动 物 的 急 性传染病［１］，主要感染猪等动物，可造成怀孕母 猪 流 产或死胎，新生仔 猪 发 热，出 现 神 经 症 状 等，极 大 地 影响了中国养殖业的健康发展 。 ［２－４］ 该病传 播 快、传 播范围广、传播途 径 多、死 亡 率 高，已 成 为 危 害 养 猪
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｐｏｒｃｉｎｅ ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ ｖｉｒｕｓ （ＰＲＶ）ｇＢ ｐｒｏｔｅｉｎ，ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｅｒｅ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｔｅｍｐｌａｔｅ ｏｆ ＰＲＶ ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ａｎｄ ｔｈｅ ６１２ｂｐ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｇｅｎｅ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ，ｔｈｅｎ ｉｔ ｗａｓ ｃｌｏｎｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｐＥＴ－２８ａａｎｄ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｉｎｔｏ Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１ （ＤＥ３），ｔｈｅ ｔａｒｇｅｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ａｆｔｅｒ ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｔｏ ａｎａｌｙｓБайду номын сангаас ｉｔｓ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｇＢ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ３０ｋｕ，ｗｈｉｃｈ ｍａｉｎｌｙ ｅｘ－ ｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｒｍ ｏｆ ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ ｂｏｄｙ，ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ １０６μｇ／ｍＬ，ｗｉｔｈ ｗｅｌｌ ｒｅａｃｔｏｇｅｎｉｃｉｔｙ．１３ＰＲＶ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ １６ｎｅｇａｔｉｖｅ ｓｅｒｕｍ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ ｏｎ ｓａｌｅ，ｕｓｉｎｇ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｓｅｒｕｍ，ｔｈｅ ＰＲＶ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｉｎｉｔｉａｌｌｙ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＰＲＶ ｇＢ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｓ ａｎｔｉｇｅｎ ｐａｃｋａｇｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｐｏｒｃｉｎｅ ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ ｖｉｒｕｓ；ｇＢ ｐｒｏｔｅｉｎ；ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ；ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｐｏｒｃｉｎｅ Ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ Ｖｉｒｕｓ ｇＢ Ｐｒｏｔｅｉｎ
ＪＩＡ Ｇａｎｇ１，ＦＡＮ Ｍｅｉ－ｎａ２＊ ，ＧＵ Ｗｅｉ １ （１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｂａｏｌａｉ－ｌｅｅｌａｉ Ｂｉｏ－ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｇｒｏｕｐ，Ｔａｉ’ａｎ２７１０００，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｔａｉａｎ ＤａＦａｎＳｈｅｎＮｏｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｔａｉ’ａｎ２７１０００，Ｃｈｉｎａ）
（１．山东宝来利来生物工程股份有限公司研究院，泰安 ２７１０００；２．泰安大凡神农制药有限公司研究院，泰安 ２７１０００）
摘 要：本试验旨在研究猪伪 狂 犬 病 病 毒 （ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ ｖｉｒｕｓ，ＰＲＶ）ｇＢ 蛋 白 的 表 达 并 分 析 其 免 疫 原 性，以 ＰＲＶ 病毒液为模板，设计特异性引物，扩增大小为６１２ｂｐ的保守片段并 测 序，将 其 克 隆 到 表 达 载 体 ｐＥＴ－２８ａ中，转 化 表 达菌 ＢＬ２１（ＤＥ３），经诱导表达、纯化得到目的蛋白，进行 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析验证并分析免疫原性。结果表明，表 达的 ｇＢ 蛋白大小为３０ｋｕ，主要以包涵体形式存在，复性后浓度为１０６μｇ／ｍＬ，且具有良好的反应原性。应 用 市 售 试剂盒检测到样品中含１３份 ＰＲＶ 阳性血清和１６份阴性血清，利用检出的 阳 性 血 清，初 步 可 建 立 以 ＰＲＶ ｇＢ 蛋 白 为包被抗原的 ＰＲＶ 抗体 ＥＬＩＳＡ 检测方法。 关键词：猪伪狂犬病病毒；ｇＢ 蛋白；原核表达；免疫原性 中图分类号：Ｓ８５２．６５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７１－７２３６（２０１７）０４－１１７５－０７
业最为严重的疾病之一，需要加以重视 。 ［５］ ＰＲＶ 作为一种猪疱疹病毒，基因组为双链线 性
ＤＮＡ，其病毒粒 子 脂 质 囊 膜 由 多 达 １６ 种 糖 蛋 白 组 成［６］。其中，ｇＢ 蛋 白 是 ＰＲＶ 最 主 要 的 保 护 性 抗 原 蛋白，是 ＰＲＶ 复 制、感 染 必 不 可 少 的 囊 膜 组 分，不 仅能够诱导宿主产 生 免 疫 应 答，而 且 也 是 病 毒 入 侵 增殖和在细胞间传播的必需组分［７－９］。ｇＢ 基因位 于
中 国 畜 牧 兽 医 ２０１７，４４（４）：１１７５－１１８１
Ｃｈｉｎａ Ａｎｉｍａｌ Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ ＆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
ｄｏｉ：１０．１６４３１／ｊ．ｃｎｋｉ．１６７１－７２３６．２０１７．０４．０３３
猪伪狂犬病病毒ｇＢ 蛋白表达及免疫原性分析
贾 刚１，樊梅娜２＊ ，谷 巍１