总论-第五章杂质分析

A E1%
1cm

1 100

0.05 435

1 100

1.15 106 (g
/
ml
)
C样品＝100.20＝2.0 10－3 g / ml
L(%)

C酮体 C样品
100%

1.15 106 2.0 10 3
100%wenku.baidu.com

0.06%
计算中应注意
①单位一致 ②稀释体积 ③ ppm的表示方法
（二）红外吸收光谱法 检查药物中无效或低效晶型。
例：甲苯咪唑中A晶型的检查 （C晶型有效晶型， A无效） 样品25mg 对照品25mg：含10%A晶型 同法制样，记录IR图谱。
803cm-1 D2
620cm-1
D1 640 cm-1 662cm-1
基线： 消除背景吸收
640cm-1 662cm-1
第二节 药物中杂质的检查方法
药物中杂质检查的原理
常用方法
化学方法 色谱方法 光谱方法 物理方法
一、化学法
与试剂反应产生颜色
杂质
与试剂反应产生沉淀 与试剂反应产生气体
杂质与试剂 反应特征
杂质限量检测方法
药典应用示例
产生颜色 产生沉淀 产生气体
目视比色，分光光度法 比浊法
气体检查法
颜色 铁盐、氟、硒
药品纯度
• 药物的纯洁程 度，是反映药 品质量的一项 重要指标。
外观 性状
杂质 检查
药物纯 度的综 合评定
理化 常数
含量 测定
注意 药物纯度与化学纯度的区别
二、杂质的来源
• 在原料药的合成过程中，起始物质
生产过程中 不纯或未反应完全、反应的中间体
引入的杂质 与反应副产物在精制时未能完全除
去而引入杂质
全。
按
来源于生产过程，一般是已知
化 学
无机杂质
的和确定的，直接影响药物的
类
稳定性，反映生产工艺情况
别
和
合成中未反应完全的原料、中
特
有机杂质
间体、副产物、降解产物等
性
分
类
残留溶剂
生产中使用的有机溶剂
四、杂质的限量
定义 药物中所含杂质的最大允许量。
表示 百分之几或百万分之几（ppm）
计算
杂 质 限 量 ＝杂 质供的试最品大的允量许 量 100％
f = AS / S 杂质对照品的峰面积 AR / R 药物对照品的峰面积
消除杂质与主成分的响应可 能不同所引起的测定误差
• 方法
供试品溶液的制备 对照溶液的制备
稀释
调节检测灵敏度：对照溶液
主成分色谱峰的峰高约为满量程的10％~25％
进样：供试品溶液 分析时间：主成分色谱峰
对照溶液
保留时间的2倍
供试品溶液① ：5mg/ml 供试品溶液② ：0.2mg/ml 对照品溶液：马来酸麦角新碱对照品， 5mg/ml 判断结果：供试品溶液①主斑点的位置与颜色应与对 照品溶液的主斑点一致，如显杂质斑点，其颜色不得 深于对照品溶液对应的杂质斑点，并不得有对照品溶 液以外的杂质斑点；供试品溶液②除主斑点外，不得 显任何杂质斑点。
贮藏过程中 引入的杂质
• 在温度、湿度、日光、空气等外界条 件影响下，或因微生物的作用，引起 药物发生水解、氧化、分解、异构化、 晶型转变、聚合、潮解和发霉等变化， 使药物中产生有关的杂质。
• 原料药生产中引入的杂质
示例：安乃近的生产
O H2N
C6H5
N N CH3
甲酰化
O
HCOOH
CH3
OHC HN
2. 供试品溶液自身稀释对照法
适用于杂质的结构不能确定，或无杂质对照品的情况。 限于杂质斑点的颜色与主成分斑点颜色相同或相近的 情况下使用。
结果判断 供试品溶液所显杂质斑点与 自身稀释对照溶液或系列自 身稀释对照溶液所显主斑点 比较，不得更深。
样品 对照品
示例 吡罗昔康中有关物质的检查
供试品溶液：20mg/ml 对照溶液：0.2mg/ml
O
的颜色与对照溶液主斑点比较黄，酮不哌得酯更
CH3 O
3-甲 基 黄 酮 -8-羧 酸
深。
4. 对照药物法
当无合适的杂质对照品，或者是供试品显示的杂 质斑点颜色与主成分斑点颜色有差异，难以判断限量 时，可用与供试品相同的药物作为对照品，此对照药 物中所含待检杂质需符合限量要求，且稳定性好。
示例 马来酸麦角新碱中有关物质的检查
氯化物、硫酸盐、重金属、钡盐 砷、硫、碳酸盐、氨、氰化物
例4 苄氨噻嗪中芳香第一胺的检查
OO S
H2N
F3C
OO S NH
N H
苄氟噻嗪
分子结构中无芳香第一胺基，不 能发生重氮化-偶合反应，而芳香第 一胺杂质可以发生反应而产生颜色 ，采用分光光度法检查。
步骤
本品80mg
供试品溶液
1mol/L盐酸溶液 4％亚硝酸钠溶液
对照溶液
留时间的4倍
校正峰面积：
f
红霉素B
0.7
红霉素烯醇醚 0.09
杂质1
0.15
结果判断：A红霉素B校正 < A红霉素A对照液 A红霉素C校正< A红霉素A对照液
A红霉素烯醇醚校正 ≤ 0.6A红霉素A对照液
A杂质1校正 ≤ 0.6A红霉素A对照液
其他单个杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积
200
0.04%
示例2 谷氨酸钠中重金属的检查
已知：S＝1.0g C＝10µg/ml L＝10×10－6
求：V＝？
解：
L S 10106 1.0
V

C
10 106
1.0(ml )
示例3 肾上腺素中酮体的检查
已知：
E1% 1cm
=435
A=0.05
求：L＝？
解： C酮 体
比较法
取一定量供试品依 法检查，测定特定 待检杂质的参数与 规定的限量比较， 不得更大。
示例1 茶苯海明中氯化物的检查
已知： S 0.30g 25 200
C 10g / ml V 1.5ml
求：L＝？
解：
L
C V 100%
10106 1.5 100%
S
0.30 25
R卡托普利和卡托普利二硫化物大于4.0
以峰面积计算其含量，原料药中的二硫化物不得超 过1.0%，片剂中的不得超过卡托普利标示量的3.0%
2. 加校正因子的主成分自身对照测定法 适用于已知杂质的控制。 用杂质对照品测定f杂质，f杂质和相对保留时间直接 载入各品种质量标准中，在常规检验时用相对保 留时间定位，以f杂质校正该杂质的实测峰面积。
稀释
结果判断：供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液所 显的主斑点比较，不得更深。
3.杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照 法并用
当药物中存在多个杂质
时，其中已知杂质有对照品时，
采用杂质对照品法检查；共存
的未知杂质或没有对照品的杂
质，可采用供试品溶液自身稀
释对照法检查。
样品 对照品 对照
示例 盐酸黄酮哌酯中有关物质的检查
＝标 准供液试浓品度的量体 积 100％
L(%) C V 100% S
检查方法
限度检查法 定量测定
对照法
灵敏度法
比较法
• 对照法
L C V 100% S
样品管
标准管
注意事项：平行操作原则。
灵敏度法
在供试品溶液中加 入一定量的试剂， 在一定反应条件下 不得有正反应出现， 从而判断供试品中 所含杂质是否符合 限量规定
3. 不加校正因子的主成分自身对照法
适用于没有杂质对照品的情况 对照溶液：供试品的稀释液 调节检测灵敏度 进样：供试品溶液
对照溶液
分析时间：供试品溶液 主成分色谱峰保留时间的2倍
供试品溶液中各杂质的峰面积与对照溶液主成 分的峰面积比较.
自身对照液
A杂总=A1＋A2＋A3
供试品溶液
示例 甲氨蝶呤中有关物质的检查
A晶型 有强吸收 吸收很弱
C晶型 吸收很弱 有强吸收
640cm-1 662cm-1
A晶型 有强吸收 吸收很弱
C晶型
吸收很弱 有强吸收
662cm-1 对照品（含 10％A晶型） D2
供试品
D2’
640cm-1 D1 D1’
• 结果判断
D1
D1'
D2 > D'2
（三）原子吸收分光光度法
通过测定药物中所含待测元素原子蒸气，吸 收发自光源的该元素特定波长的程度，以求出药 物中待测元素的 含量。
限量检查
对照品液：供试品＋对照品 供试品液
b<(a-b) 符合规定 b>(a-b) 不合格
吸光度 a b
三、色谱法（chromatography）
药物中的有机杂质的结构和性质往往和药物相近， 色谱法可以利用药物与杂质在色谱性质的差异，能有 效的将杂质与药物进行分离和检测。
常用的方法
TLC
HPLC
GC
源
分
特
在个别药物的生产和贮藏过程中
殊
引入的杂质。如阿司匹林中的游
杂
离水杨酸、甲硝唑中的2-甲基-5-
质
硝基咪唑等。
本身一般无害，但其含量的
信号杂质
多少可以反映出药物的纯度 水平，称其为“信号”杂质。
按
如氯化物、硫酸盐等属于信
毒
号杂质。
性
分
对人体有毒害的杂质。如重
毒性杂质
金属、砷盐、氰化物等应严 格加以控制，以保证用药安
432nm 地蒽酚 无吸收 二羟基蒽醌 有最大吸收
规定0.01%地蒽酚氯仿溶液A432nm<0.12
示例 两性霉素B中两性霉素A的检查
在305nm处两性霉素 A的吸收最强，而两性霉 素B的吸收很小，ChP 通 过测定两性霉素B供试品 溶液在305nm处的吸光度 来控制两性霉素A的限量。
两性霉素B
两 性 霉 素 A
判断：供试品溶液中各杂质的峰面积分别乘以相应的 校正因子后，与对照溶液中主成分的峰面积比较。
示例 红霉素A中红霉素B、C组分及有关 物质的检查
供试品溶液：4mg/ml 对照溶液：0.2mg/ml
稀释
调节检测灵敏度：对照溶液 主成分色谱峰的峰高约为满量程 的20％
进样：供试品溶液 分析时间：主成分色谱峰保
（一） TLC 法 1. 杂质对照品法
适用于已知杂质并能制 备杂质对照品的情况。
样品 对照品
示例 枸橼酸乙胺嗪中N-甲基哌嗪的检查
供试品溶液：枸橼酸乙胺嗪（50mg/ml） 对照品溶液： N-甲基哌嗪对照品(50 μg/ml)
点样 → 展开 → 晾干薄层板→检视斑点
判断结果 供试品溶液如显与对照品相应的杂质斑点，其颜色与 对照溶液品溶液主斑点比较，不得更深。
（二）HPLC 法
1. 外标法测定法
X =
AX AR
R
供试品溶液 对照品溶液
进样
记录色谱图：AX和AR 计算
示例 卡托普利及其片剂中卡托普利二硫化物的检查
供试品溶液： 0.5mg/ml 对照品溶液：卡托普利二硫化物对照品，5 μg/ml 混合溶液： 卡托普利和卡托普利二硫化物对照品
0.1mg/ml和15 μg/ml 适用性试验：用混合溶液
易发生氧化反应的结构：醚、醛、酚羟基、 巯基、亚硝基、 双键等
氧化反应：利血平——氧化产物无降压作用
严格控制药品的贮藏条件，是保证临床用药安 全、有效的一个重要方面。
三、杂质的种类与分类
一
在自然界中分布较广泛，在多种
般
药物的生产和贮藏过程中容易引
按 来
杂 质
入的杂质。如酸、碱、水分、氯 化物、硫酸盐、重金属、砷盐等
药物分析学 总论
第五章 药物的杂质分析 Chapter 5
Analysis of Impuries in Drugs
目录
1 第一节 药物中的杂质与杂质限量 2 第二节 药物中杂质的检查方法 3 第三节 降解物和杂质的分离与鉴定
第一节 药物中的杂质与杂质限量
一、药物的杂质与纯度
杂质
• 任何影响药品 纯度的物质均 称为杂质。
2％二盐酸萘基乙二胺溶液
10％氨基 磺酸铵溶液
各试剂 的作用？
有色溶液
测定
二、光谱方法
依据药物和杂质对光选择吸收性质差异进行检查。 （一）紫外吸收光谱法
在某一波长处杂质有最大吸收，药物无吸收。
示例 地蒽酚中二羟基蒽醌的检查
HO
O
OH
HO
O
OH
地蒽酚
HO
O
OH
HO
O
OH
二羟基蒽醌
均有O紫外吸收
O
二羟基蒽醌 地蒽酚
供试品溶液： 20mg/ml
N
OO
H
对照溶液： 0.10 mg/ml
稀释
O
对照品溶液：3-甲基黄酮-8-羧酸0.10 mg/ml 判断：供试品溶液如显杂质斑点不得多
CH3 O
黄酮哌酯
3
于2个，其中在与对照N 品溶O液相O 同的位 置上所显杂质斑点的颜色与对照O品溶液
HO O O
主斑点比较，不得更深，另一杂质杂CH3质
AA
C6H5
N N CH3
甲基化
CH3 (CH3)2SO4，NaOH
FAA
O
OHC N H3C
C6H5 N
N CH3
水解
C6H5 ON
N CH3
缩合
C6H5 ON
N CH3
CH3 H2O,H2SO4 HN
CH3 NaHSO3，HCHO H3C N
CH3
FMAA
CH3 MAA
CH2SO3Na
可能引入的杂质为中间体MAA中存在少量的AA与甲醛、亚硫酸氢钠缩合
产生的4－N－去甲基安乃近，以及微量MAA、双甲氨基安替比林甲烷 (MAA-CH2-MAA)、甲醛亚硫酸氢钠和亚硫酸氢钠等。
• 制剂生产中引入的杂质
示例 肾上腺素注射液 抗氧剂——焦亚硫酸钠 稳定剂——EDTA-2Na
HO HO
OH C CH2NHCH3 H 肾上腺素
肾上腺素 肾上腺素磺酸
• 药物贮藏中引入的杂质