薄层层析和低压柱色谱技术
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薄层色谱和低压柱层析技术
鞠培殿
2009-03-28
一、薄层色谱
主要内容 1、简介 2、制板 3、使用 4、TLC展开剂选择
1、简介
薄层色谱（Thin Layer Chromatography TLC）又叫薄板层析，是色谱法中的一种， 是快速分离和定性分析少量物质的一种 很重要的实验技术，属固-液吸附色谱。
1）洗板
2）搅拌
3）涂板
4）晾干
3、薄层板的使用
1）用于检测：将样品溶液用管口平整的 毛细管滴加于离薄层板一端约1cm处的 起点线上，间隔0.5-1cm，凉干或吹干后 置薄层板于盛有展开剂的展开槽内，浸 入深度为0.5cm。待展开剂前沿离顶端约 1cm附近时，将色谱板取出，干燥后喷 以显色剂，或在紫外灯下观察。
展开剂一般选择氯仿：甲醇=1：1， 也有用无水乙醇的 注意： 尽量一天过完 尽量少停（会扩散） 在一定条件下可以改变洗脱剂极性
4、TLC展开剂选择
选择适当的展开剂是首要任务.一般常用 溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概 为：石油醚<己烷<苯<乙醚<二氯甲烷< 氯仿<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇<水
使用单一溶剂一般不能达到很好的分离效 果，往往使用混合溶剂，通常使用一个高 极性和低级性溶剂搭配，高极性的溶剂还 有增加区分度的作用，常用的溶剂组合有： 石油醚/乙酸乙酯，石油醚/丙酮，石油醚/ 乙醚，石油醚/二氯甲烷，氯仿/乙酸乙酯， 氯仿/甲醇，乙酸乙酯/甲醇
1.3、洗脱剂比例的选择
1、梯度洗脱，一般从小极性溶剂开始， 冲10个柱体积或冲至洗脱下才物质种类 和浓度不在改变时，换下一个梯度。 2 、 分 离 纯 化 样 品 时 ， 样 品 TLC 的 Rf=0.05-0.1时的展开剂比例可以用做柱 层析。
2、凝胶柱层析
原理 凝胶过滤--依赖于分子的大小和形状 吸附层析--依赖于被分离化合物与凝胶之 间的氢键数量和质量 分配层析--依赖于被分离化合物在流动相 （溶剂）和固定相（凝胶）之间的分配， 这主要由样品的极性和溶剂的极性决定 的。
1.ຫໍສະໝຸດ Baidu、 装柱
在空柱内注入一定量的洗脱剂，硅胶 （细分时一般是样品质量的10倍，粗分 时最低可达到1：1）用洗脱剂溶胀无气 泡后尽量一次性倒入层析柱，装完的柱 子需要平衡4-5个柱体积，一定要均匀 （不然样品就会从一侧斜着下来）。
1.2、上样 湿法上样：将样品溶入尽可能少的低极 性溶剂后上样。 干法上样：将与干样品等质量（或更少） 硅胶和溶解的样品搅拌均匀，在溶剂挥 发的同时不停的搅拌，待硅胶干燥松散 后，慢慢加入柱中（硅胶面以上要留有 部分溶剂），加入洗脱剂就可以了。
2）用于制备 就是刮板，这种层析板是普通板硅胶层 的2-3倍厚，在点样时点样点间隔1mm， 样品溶液不易高，层析结束时有暗斑或 荧光的在紫外灯下用铅笔画出标记，按 标记刮下硅胶；
没有暗斑的需要在板的中间或两端隔出 一条窄缝，显色后将Rf值相同的硅胶刮 下，磨碎；准备一个小的层析柱，预装 1cm高的柱层析硅胶，先用甲醇冲洗， 再用石油醚替换甲醇，将刮下的硅胶装 柱后，用和跑板相同极性的溶剂快速冲 下。
在实际使用时，要尽量使目标物质的 Rf=0.5，这样的分离效果最好。 石油醚：丙酮=6：4系统能够最好的区分 物质极性大小。
二、低压柱层析
1、硅胶柱层析 2、凝胶柱层析
1、硅胶柱层析
原理 硅胶层析的分离原理是根据物质在硅胶 上的吸附力不同而得到分离，一般情况 下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性 较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析 过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸 的过程。
作用：主要用于快速检测目标样品的分 离效果；其次用于样品分离，一方面适 用于少量样品（几到几微克）的分离； 另一方面在制作薄层板时，把吸附层加 厚加大将样品点成一条线，则可分离多 达500mg的样品。
2、制板
1）准备干净的玻璃板：无油和水 2）按硅胶(g)：0.5%-0.7%CMC-Na溶液 （mL）=1：3比例混合，同方向搅拌 至无气泡 3）涂板 4）晾干两天左右备用
鞠培殿
2009-03-28
一、薄层色谱
主要内容 1、简介 2、制板 3、使用 4、TLC展开剂选择
1、简介
薄层色谱（Thin Layer Chromatography TLC）又叫薄板层析，是色谱法中的一种， 是快速分离和定性分析少量物质的一种 很重要的实验技术，属固-液吸附色谱。
1）洗板
2）搅拌
3）涂板
4）晾干
3、薄层板的使用
1）用于检测：将样品溶液用管口平整的 毛细管滴加于离薄层板一端约1cm处的 起点线上，间隔0.5-1cm，凉干或吹干后 置薄层板于盛有展开剂的展开槽内，浸 入深度为0.5cm。待展开剂前沿离顶端约 1cm附近时，将色谱板取出，干燥后喷 以显色剂，或在紫外灯下观察。
展开剂一般选择氯仿：甲醇=1：1， 也有用无水乙醇的 注意： 尽量一天过完 尽量少停（会扩散） 在一定条件下可以改变洗脱剂极性
4、TLC展开剂选择
选择适当的展开剂是首要任务.一般常用 溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概 为：石油醚<己烷<苯<乙醚<二氯甲烷< 氯仿<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇<水
使用单一溶剂一般不能达到很好的分离效 果，往往使用混合溶剂，通常使用一个高 极性和低级性溶剂搭配，高极性的溶剂还 有增加区分度的作用，常用的溶剂组合有： 石油醚/乙酸乙酯，石油醚/丙酮，石油醚/ 乙醚，石油醚/二氯甲烷，氯仿/乙酸乙酯， 氯仿/甲醇，乙酸乙酯/甲醇
1.3、洗脱剂比例的选择
1、梯度洗脱，一般从小极性溶剂开始， 冲10个柱体积或冲至洗脱下才物质种类 和浓度不在改变时，换下一个梯度。 2 、 分 离 纯 化 样 品 时 ， 样 品 TLC 的 Rf=0.05-0.1时的展开剂比例可以用做柱 层析。
2、凝胶柱层析
原理 凝胶过滤--依赖于分子的大小和形状 吸附层析--依赖于被分离化合物与凝胶之 间的氢键数量和质量 分配层析--依赖于被分离化合物在流动相 （溶剂）和固定相（凝胶）之间的分配， 这主要由样品的极性和溶剂的极性决定 的。
1.ຫໍສະໝຸດ Baidu、 装柱
在空柱内注入一定量的洗脱剂，硅胶 （细分时一般是样品质量的10倍，粗分 时最低可达到1：1）用洗脱剂溶胀无气 泡后尽量一次性倒入层析柱，装完的柱 子需要平衡4-5个柱体积，一定要均匀 （不然样品就会从一侧斜着下来）。
1.2、上样 湿法上样：将样品溶入尽可能少的低极 性溶剂后上样。 干法上样：将与干样品等质量（或更少） 硅胶和溶解的样品搅拌均匀，在溶剂挥 发的同时不停的搅拌，待硅胶干燥松散 后，慢慢加入柱中（硅胶面以上要留有 部分溶剂），加入洗脱剂就可以了。
2）用于制备 就是刮板，这种层析板是普通板硅胶层 的2-3倍厚，在点样时点样点间隔1mm， 样品溶液不易高，层析结束时有暗斑或 荧光的在紫外灯下用铅笔画出标记，按 标记刮下硅胶；
没有暗斑的需要在板的中间或两端隔出 一条窄缝，显色后将Rf值相同的硅胶刮 下，磨碎；准备一个小的层析柱，预装 1cm高的柱层析硅胶，先用甲醇冲洗， 再用石油醚替换甲醇，将刮下的硅胶装 柱后，用和跑板相同极性的溶剂快速冲 下。
在实际使用时，要尽量使目标物质的 Rf=0.5，这样的分离效果最好。 石油醚：丙酮=6：4系统能够最好的区分 物质极性大小。
二、低压柱层析
1、硅胶柱层析 2、凝胶柱层析
1、硅胶柱层析
原理 硅胶层析的分离原理是根据物质在硅胶 上的吸附力不同而得到分离，一般情况 下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性 较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析 过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸 的过程。
作用：主要用于快速检测目标样品的分 离效果；其次用于样品分离，一方面适 用于少量样品（几到几微克）的分离； 另一方面在制作薄层板时，把吸附层加 厚加大将样品点成一条线，则可分离多 达500mg的样品。
2、制板
1）准备干净的玻璃板：无油和水 2）按硅胶(g)：0.5%-0.7%CMC-Na溶液 （mL）=1：3比例混合，同方向搅拌 至无气泡 3）涂板 4）晾干两天左右备用