血液实验实验报告
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血液实验实验报告
09 生物技术
摘要:血液在体内承担着物质运输、免疫等重要的生理功能。比较不同动物的血液组成和血细胞的差异,对了了解血液的功能以及不同动物体的特征有重要意义。制作血涂片用于观察红细胞、白细胞、血小板形态;使用血细胞计数板于显微镜下直接计数,计算分别得到红细胞、白细胞数目。
关键字:血液红细胞白细胞血细胞计数血涂片
第一章前言
血液在维持内环境稳定上起着重要作用,具有运输、缓冲、防御等功能。比较不同动物的血液组成和血细胞的差异,对了了解血液的功能以及不同动物体的特征有重要意义。
动物红细胞的形态、大小、数目与动物的进化和生态适应均有一定的关系,一般来说,动物越高等,红细胞的数目越多,而体积越小,同时血细胞也高度分化;白细胞体积(除鱼类)比红细胞大,但比重却比红细胞小。白细胞按其组成又分为粒细胞和无粒细胞。在不同生理状态下,白细胞数目波动较大。
通过观察不同脊椎动物的血涂片,并在镜下计数,即可初步观察到不同脊椎动物血细胞形态变化即数目变化。
第二章材料与方法
2.1 血涂片的制作与观察
2.1.1 材料
鲤鱼、牛蛙、家鸽、家兔、小白鼠血液样品,洁净载玻片,毛吸管,瑞氏染液,蜡笔
2.1.2方法
取末血样少量置于玻片的一端,左手
持载玻片,右手以边缘平滑的推片的一端
从血滴前方后移接触血滴,血滴即沿推片
散开,推片与载片夹角保持30-45度平稳
地向前移动,载片上保留下一薄层血膜。
待干后用蜡笔在血膜两侧划线,以防染液
溢出。然后将血膜平放在染色架上,加瑞
氏染液2-3滴,使覆盖整个血膜。固定
0.5-1.0分钟,滴加等量或稍多的新鲜蒸
馏水。与染料混匀染色5-10分钟。当液
面浮现一层金黄色金属状物质,表示染液
起了作用。用蒸馏水冲去染液,待自然干燥
后,即可置血涂片于显微镜下进行镜检。
红细胞
淡红色,无核的圆形细胞,因红细胞为双凹形,故边缘部分染色较深,中心较浅,直径7-8微米。
颗粒白细胞
嗜中性颗粒白细胞:体积略大于红细胞,细胞核被染成紫色分叶状,可分1-5叶。直径10-12微米。
嗜酸性颗粒白细胞:略大于嗜中性白细胞,细胞核染成紫色,通常为2叶,胞质充满嗜酸性大圆颗粒,被染成鲜红色。直径10-15微米。
嗜碱性颗粒白细胞:体积略小于嗜酸性白细胞,细胞质中有大小不等被染成紫色的颗粒,颗粒数目较嗜酸性白细胞的颗粒少,核1-2叶,染成淡蓝色。直径10-11微米。
淋巴细胞
胞质少,常为围绕细胞核的一薄层,其中无颗粒细胞核是肾形或马
蹄形,染成蓝紫色。
血小板
血小板体形甚小,形态不规则,染淡蓝色,内含紫色颗粒,无核,常聚集成团。
2.2 血细胞计数
2.2.1 材料
鲤鱼、牛蛙、家鸽、家兔、小白鼠、人体血液样品,柠檬酸钠,血细胞计数板,盖玻片,毛吸管。
2.2.2方法
1.计数原理:
血细胞计数板由一块长约7.5cm、宽3.5cm的厚玻璃制成,在中部1/3面积处有4条槽,内侧两条槽之间还有1条横槽相通,在中部构成2块长方形平台。此平台比整个载玻片平面低0.1mm。平台中部各有一个计数室,每个计数室分九大格,每格边长1mm,面积为1mm2,盖上盖玻片后体积为0.1mm3。四角的大格被划分为16个中方格,一般用作白细胞、血小板及组织培养的细胞计数。中央的大方格则由双线划分为25个中方格,每个中方格面积为0.04mm2,盖上盖玻片后体积为0.004mm3,每个中方格又分成16个小方格,用于红细胞、微生物细胞的计数。
计数方格为:
2.方法:
用毛吸管吸取10μl血液样本加柠檬酸钠至1ml(即稀释100倍)或2ml(即稀释200倍),轻轻摇匀。将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片,再用无菌的毛细滴、管将摇匀的血液稀释液由盖玻片边缘滴一小滴,让稀释液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室,使计数室均能充满稀释液。取样时先要摇匀菌液,加样时计数室不可有气泡产生。
加样后静止2-3min,然后将血细胞计数板置于显微镜载物台上,先用低倍镜找到计数室所在位置,然后换成高倍镜进行计数。
红细胞数/L=N*25/(5*10*106*稀释倍数)
白细胞计数/L=N*稀释倍数*10*106/4
第三章结果
3.1血涂片的制作与观察
3.1.1鲤鱼、牛蛙、家鸽的血涂片都只观察到了红细胞,经查阅相关资料,白细胞有如下特点:
1、含量少由于白细胞含量为5000~10000个/立方毫米,而红细胞为400~500万个/立方毫米(男),其比例大约为1∶500(按最高含量),也即,大约观察500个红细胞才能看到1个白细胞。
2、颜色浅白细胞体积比红细胞大,圆球形,是无色有核的细胞。因而,在光镜下观察,由于其透光能力强,所以看到的白细胞颜色浅。
主观因素主要是来自于实验技能方面不过关。
解决方法:
可根据白细胞的透光能力较强这一特点,利用低倍镜找。方法是:
首先,应在低倍镜下调节细准焦螺旋,当看清细胞后,再继续向上调,使红细胞模糊不清。
然后,移动涂片,边移动边注意观察。会发现在视野中有一些小亮点,如星星在闪烁。将其中一个亮点置于视野中央,然后,再调细准焦螺旋使细胞清晰。观察后发现,此亮点便是要找的白细胞。如需仔细观察,可换高倍镜。但注意光线不要太亮。
3.1.2 家兔、小白鼠血涂片制作失败
血涂片制作失败原因分析:
1.现象:
以磷酸缓冲液为稀释液配制染剂,配比尝试了1:5,1:7,1:9,细胞几乎均不着色;
以蒸馏水为稀释液配制染剂,配比为1:5,染色较浅,但能看到细胞。
查阅相关资料:缓冲液pH值为6.24时,各血涂片的血细胞染色均较淡,尤其是白细胞中特殊颗粒显示不清,胞核、胞质对比不理想;随