红细胞比容、血红蛋白测定

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离心后血液分层
layer after blood centrifugated
方法与步骤 改进的温氏分血管比容法
• 采血(加入抗凝剂肝素钠,抗凝血)
• 用移液器取1 ml抗凝血,放入EP管中。
• 离心:将分血管以3000 r/min离心30 min, 取出分血管,读取红细胞柱的高度。
[注意事项]
• 选择抗凝剂必须考虑到不能使红细胞变形、 溶解。本实验采用肝素钠抗凝。 • 血液与抗凝剂混合、注血时应避免动作剧 烈引起红细胞破裂。 • 温氏分血管内壁要充分干燥。血液进入毛 细管内的刻度读数要精确,血柱中不得有 气泡。
二、血红蛋白的测定
• 目的 掌握用比色法测定动物的血红蛋白的含量。
• 原理 血红蛋白的颜色常与氧的结合量多少有关。 但当用一定的氧化剂将其氧化时,可使其转变为 稳定、棕色的高铁血红蛋白,而且颜色与血红蛋 白(或高铁血红蛋白)的浓度成正比。可与标准 色进行对比,求出血红蛋白的浓度,即每升血液 中含血红蛋白克数(g·L-1)。
具体测定方法如下:
①用滴管加5~6滴,0.1 mol·L-1 HCl到刻度 管内,(约加到管下方刻度”2”或多或10%处)。
②用微量采血管吸血至20μ l,仔细揩去吸管外 的血液。 ③将吸血管中的血液轻轻吹到比色管的底部, 再吸上清液洗吸管3次。操作时勿产生气泡,以 免影响比色。用细玻棒轻轻搅动,使血液与盐 酸充分混合,静置10 min,使管内的盐酸和血 红蛋白完全作用,形成棕色的高铁血红蛋白。
红细胞比容测定 血红蛋白测定
一、红细胞比容测定 目的 掌握红细胞比容的测定方法。
原理 将定量的抗凝血灌注于带刻度玻璃管中,定时、定速 离心后,有形成分和血浆分离,上层呈淡黄色的液体是血 浆,中间很薄一层为灰白色,即白细胞和血小板(或栓细 胞),下层为暗红色的红细胞,彼此压紧而不改变细胞的 正常形态。根据红细胞柱及全血高度,可计算源自文库红细胞在 全血中的容积比值,即为红细胞比容(压积) 。
方法与步骤
沙里氏血红蛋白计测定


沙里氏比色法是用HCl使血红蛋白酸化形成棕色的高铁 血红蛋白,然后和标准比色板进行比色。
沙里血红蛋白计 主要具有标准褐色玻璃比色箱和1只方 形刻度测定管组成。比色管两侧通常有两行刻度;一侧 为血红蛋白量的绝对值,以g· dl-1(每100 ml血液中所含 血红蛋白的克数)表示,从2~22 g;另一侧为血红蛋白 相对值,以%(即相当于正常平均值的百分数)来表示, 从10%~160%。为避免所使用的平均值不一致,因此 一般采用绝对值来表示。
【注意事项】

血液要准确吸取20 μl,若有气泡或 血液被吸入采血管的乳胶头中都应将 吸管洗涤干净,重新吸血。洗涤方法 是:先用清水将血迹洗去,然后再依 次吸取蒸馏水、95%酒精、乙醚洗涤 采血管1~2次,使采血管内干净、干 燥。
④把比色管插入标准比色箱两色柱中央的空格中。
⑤使无刻度的两面位于空格的前后方向,便于透光 和比色。用滴管向比色管内逐滴加入蒸馏水, 并不断搅匀,边滴,边观察、边对着自然光进 行比色,直到溶液的颜色与标准比色板的颜色 一致为止。 ⑥读出管内液体面所在的克数,即是每100 ml血中 所含的血红蛋白的克数。比色前,应将玻棒抽 出来,其上面的液体应沥干净,读数应以溶液 凹面最低处相一致的刻度为准。换算成每升血 液中含血红蛋白克数(g· L-1)。
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