MPT-NAG测定N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的应用价值
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该 方 法 不 受 尿 色 的 影 响 。用 于 尿 样 中 ＮＡ 活 力 的 测 定 ， 获 Ｇ 均 得 满 意 结果 。 １ 材 料 与 方 法
Ｉ， 他 条 件 不 变 。 对 ４ Ｌ ＮＡＧ 标 准 酶 进 行 测 定 ， ｐ 其 ５Ｕ／ 在 Ｈ
４６ 酶促反应速率最大 。 ．时
取 浓 度 为 ５Ｕ／ 的质 控 品 作 为样 品 ， 复 Ｌ 重
测 定 １ 次 ， 出 标 准 差 Ｓ 以 ３ 为 最 低 检 测 限 ， 果 为 Ｏ 求 ， 结
・
２ １ ・ ０２
堕 医学与临床 ２ １ 年 ８ ０１ 月第 ８ 卷第 １ 期 Ｉ ｂＭｅ ｌ ， ｕｕｔ ０ １Ｖ １ ， ｏ１ ｄＣｉ Ａ ｇ ｓ ２１ ，ｏ． Ｎ ．６ ６ ａ ｎ ８ 最 大 吸 收峰 ， 定 样 本 在 ３ ０ｎ ｌ 成 ， 受 尿液 颜 色 干 扰 。 该 测 ４ ｉ 完 Ｔ 不 测 定 １ Ｏ名 体 检 健 康 者 尿 液 样 本 ， ６ ０ 男 Ｏ名 ，
４ ８ ５ ０ ５ ２和 ５ ４的柠 檬 酸 一 酸 氢 二 钠 缓 冲 液 ２ ０ ｍｍｏ／ ． 、． 、． ． 磷 ０ ｌ
上 皮细胞受损 时 ， 中 Ｎ 尿 ＡＧ 活 性 将 显 著 升 高 且 早 于 其 他 尿
酶 ， 肾小 管 损 害 的 早 期 诊 断 有 较 大 价 值 ｌ ， ＮＡＧ 上 升 程 对 １且 ］
Ｎ 乙 酰一— Ｉ 基 葡 萄 糖 苷 酶 （ 一 ＢＩ 氨 ） ＮＡＧ） 一 种 位 于 溶 酶 体 内 是
的 酸 性 水 解 酶 ， 对 分 子 质 量 为 １０× １。 存 在 于 所 有 组 织 相 ４ ０， 中 。尿 中 ＮＡＧ主 要 来 源 于 肾近 曲小 管 上 皮 细胞 ， 近 曲小 管 当
度 与 肾 小 管 损 伤 程 度 成 正 比ｌ 。可 作 为 早 期 诊 断 肾 损 害 的 尿 ＿ ２ ］
标 志 性 蛋 白ｌ 。本 文 基 于 ＮＡＧ 催 化 水 解 ６甲基 ２硫 代 吡 啶一 ３ ］ 一 一 Ｎ 乙 酰一－ Ｉ 基 葡 萄 糖 苷 （ Ｔ Ｎ ＢＩ 氨 ） ＭＰ — ＡＧ） 成 无 色 的 ６ 甲基 一一 生 ２ 硫 代 吡 啶 （ Ｔ ， 反 复 试 验 确 定 了 最 佳 实 验 条 件 ， 立 起 简 ＭＰ ） 经 建 便 、 敏 、 定 的 检 测 体 液 中 ＮＡＧ 活 力 的紫 外 动 力 学 分 析 法 ， 灵 稳
各 种 实验 参 数 进 行 研 究 。 用该 法测 定 了 多种 病 尿 样 中 ＮＡ 活 活性 。结 果 该 法 最低 检 出 限 为 １ ５Ｕ／ 线 性 范 围 Ｇ ． Ｌ， 可 达 ２ ０ Ｕ／ （ 一０ ９ ８９ ， 内 Ｃ 为 ＜３ ， 间 Ｃ ％ ５ ， 收 率 为 １ １ ３ 。 结 论 本 法 灵敏 度 高 ， 性 、 密 ５ Ｌ ｒ ． ９ ） 批 Ｖ 批 Ｖ 回 Ｏ ． 线 精 度 好 ， 果 准 确 ， 操 作 简便 快 速 ， 用 于 全 自动 生 物 化 学 分 析 仪 操 作 。 结 且 适
单 位 ， 称 Ｕ／ 简 Ｌ。 １ ３ ２ 实 验参 数 反 应类 型 ．． 速 率 法 ， 长 为 ３０ｎ 主 ） ４ ５ 波 ４ ｍ（ ／ ０
ｎ 副 ） 反 应 温 度 ： ７℃ ； 剂 １用 ２ ０ｔ 试 剂 ２用 ６ Ｌ； ｍ（ ； ３ 试 ４ Ｌ， ＊ Ｏ“
别 为 ５Ｕ／ 和 ２ ０ Ｕ／ 标 本 １份 。 然 后 将 两 份 标 本 按 Ｌ ５ Ｌ
人 ［］ 董 绍 良 ， 述 枚 ， 政 贤 ． 儿 内科 学 ［ 北 京 ： 民卫 ５ 陈 何 小 Ｍ］ 生 出版 社 ， ０ ４ ２ ６ ２０ ：７．
［］ 翟 燕 ． 清 特 异 性 抗 体 检 测 在 肺 炎 支 原 体 感 染 早 期 诊 断 ４ 血 意 义 ［］ 中华 儿 科 杂 志 ，９ ３ ３ ２ ：０ ． Ｊ． １ ９ ，１（） １ １ （ 收稿 日 ： １ ０ ４ 期 ２ １２ ） ０ ２
映 酶 量 的 多 少 。 所 以 试 剂 ２中 ＭＰ ＿ ＡＧ 的 浓 度 确 定 为 ＴＮ
７ｇ Ｉ。 ／
１１ 试剂和仪器 ．
液 ２ ０ｍｍｏ／ ｐ ． ±０ ０ ） 表 面 活 性 剂 １ｇＩ， 定 剂 和 ０ ｌ Ｌ（ Ｈ ４ ６ ． ５ 、 ／ 稳 防腐 剂 适 量 。 （ ） 剂 ２ Ｒ ） 柠 檬 酸 一 酸 氢 二 钠 缓 冲 液 ２试 （２： 磷
每 份 样 品重 复测 定 ３次 ， 均 值 ， 得 回 收 率 分 别 为 １３ ２ 、 取 所 ０ ．
１ １ ５ 、 ９２ ， 均 回 收率 １ １３ 。 ０ ． ９ ． 平 ０ ． ２８ 线性试验 ． 根 据 ＮＣ ｋ （ Ｐ ． ） 评 估 方 案 ， 浓 度 分 Ｃ Ｓ Ｅ ６Ｐ 的 取
１ｕ ｌＬ 的 ＭＰ — Ｇ 发 生 转 变 为 １Ｕ 的 ＮＡＧ 酶 量 为 １ ｍｏ／ Ｔ ＮＡ 个
２ ７ 回收 试 验 ．
在 ｌ份 样 品 中分 别 加 入 低 、 、 ３个 浓 度 的 中 高
ＮＡＧ 质 控 品 ， 同时 样 品 中加 入 相 同体 积 的蒸 馏 水 做 基 础 样 本 ，
检 验 医 学 与 临床 ２ １ 年 ８月 第 ８卷 第 １ ０１ ６期
Ｌ ｂＭ ｅ ｌ ， ｇ ！ ａ ｄｅｉ ｎ
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・
２Ｏ１ ・ １
Ｉ］ 熊正东． 儿肺炎支原体感染 的治疗［］实用儿科 杂志 ， － ３ 小 Ｊ．
１９ ， （） ２ ５ ９ ３ ８ ３ ：０ ．
方 法 最 低 检 出 限 为 １ ５ Ｕ／ 线 性 范 围 可 达 ２ ０ ｕ／ ｒ ． Ｉ， ５ ｉ（ 一
【 键 词 】 甲基一一 代 吡啶 一 乙酰 口Ｄ 氨 基 葡 萄 糖 苷 ； Ｎ 乙酰一— － 基 葡 萄糖 苷 酶 ； 紫 外 动 力 学 法 关 ２硫 Ｎ一 一－ ｐＤ 氨 Ｄ Ｉ１ ．９ ９ ｊｉ ｎ １７ －４ ５ ２ １ ． ６０ ５ 文 献 标 志 码 ： 文 章 编 号 ：６ ２９ ５ （ ０ １ １－０ １０ Ｏ ：０ ３ ６ ／．ｓ ． ６ ２９ ５ ．０ １ １ ． ５ ｓ Ｂ １ ７ －４ ５２ １ ） ６２ １－２
ＭＰ — Ｔ ＮＡＧ 测 定 Ｎ一 乙酰一一 一 基葡 萄 糖 苷 酶 的 应 用 价值 ＩＤ 氨 ３
余 长福 （ 江省温 州 市瓯 海 区第 三人 民 医院检 验科 浙 ３ ５１ ） ２ ０ ４
【 要 】 目的 应 用 新 型 底 物 ６ 甲基 ２硫 代 吡 啶 一 乙酰一 ） 基 葡 萄糖 苷 （ Ｔ ＮＡＧ） 立检 测 Ｎ 乙酰一— 摘 一 Ｎ Ｉ 氨 ＿ ＭＰ — 建 一 ｐ Ｉ 氨 基 葡 萄 糖 苷 酶 活 力的 紫外 动 力 学新 方 法 ， 于 尿 液 中 ＮＡＧ 活 性 测 定 。方 法 基 于 ＮＡ 催 化 水 解 对 硝 基 苯一 ） Ｉ 用 Ｇ Ｎ 乙酶一 一 氨 基 葡 萄 糖 苷 生 成 有 色的 对 硝 基 酚 这 一 反 应 ， 缓 冲 液 离 子 强 度 、 Ｈ 值 、 物 浓 度 等 最 佳 反 应 条 件 及 对 ｐ 底
２ ０ Ｕ／ ５ Ｌ。
统计软件 。
２ 结 果
２ １ 吸 收 光谱 在 本 实 验 条 件 下从 ３ ０ ４ Ｏｎ 范 围 内 测 定 标 ． ０ ～ ５ ｍ 准 溶 液 的 吸 光 度 ， 知 ６甲 基 ２巯 基 吡 啶 最 大 吸 收 波 长 为 得 一
３ ４０ ｎｍ
２９ 最低检测 限 ．
２ ２ 最 适 缓 冲离 子 强 度 的 选 择 ．
分 别 配 制 ５ 、 ０ 、５ 、 ０ ０ １０ １ ０ ２ ０
和 ２ ０ｍｍ ｌＬ的 柠 檬 酸一 酸 氢 二 钠 缓 冲 液 ， 他 条 件 不 变 。 ５ ｏ／ 磷 其 分 别 测 试 同 一 份 样 品 （５Ｕ／ ） ４ Ｌ 。酶 反 应 速 率 随 缓 冲 液 浓 度 的 增 加 而 增 高 ， 当 浓 度 大 于 ２ ０ｍｍｏ／ 时 ， 反 应 速 率 反 而 但 ０ ｌＬ 酶 降 低 。这 是 缓 冲 液 浓 度 太 大 反 而 抑 制 了 ＮＡＧ 酶 的活 性 ， 而 从 导 致 反 应 变 慢 。 因 此 ， 择 柠 檬 酸一 酸 氢 二 钠 浓 度 ２ ０ 选 磷 ０ ｍｍｏ／ 为 最 佳 缓 冲液 和 最 佳 浓 度 。 ｌＩ作 ２ ３ 最 适 ｐ 值 的 选 择 分 别 配 制 ｐ ． 、 ． 、 ． 、 ． 、 ． Ｈ Ｈ４ ０ ４ ２ ４ ４ ４ ６
２ ０ ｍｍｏ／ （ Ｈ ４ ６ ． ５ 、 Ｔ ＮＡＧ ７ｇ Ｌ、 定 剂 和 防 ０ ｌＬ ｐ ． ±０ ０ ） ＭＰ — ／ 稳
腐 剂适 量 。 （ ） ３ ＮＡＧ酶 标 准 酶 和质 控 品 ， 由浙 江 伊 利 康 生 物 技 术 公 司 提供 。所 有 检 测 在 Ａ ０ Ｕ４ ０全 自动 生 物 化 学 分 析 仪 上
２ ４ 底 物 浓 度 选 择 在 其 他 条 件 不 变 的情 况 下 ， 试 剂 ２中 ． 将
ＭＰ － ＡＧ 浓 度 分 别 调 整 至 ５ ７ ９ｇ Ｌ， 别 测 定 高 、 、 ３ ＴＮ 、 、 ／ 分 中 低
（ ） 剂 １ Ｒ ） 柠 檬 酸 一 酸 氢 二 钠 缓 冲 １试 （１： 磷 种 浓 度 的 质 控 品 。结 果 显 示 试 剂 ２中 ＭＰ — Ｔ ＮＡＧ 浓 度 为 ７ｇ ｉ 底 物 浓 度 与 酶 反 应 速 度 的 反 应 曲 线 尾 部 已 趋 于 平 坦 ， ／ 时 说 明 反 应 速 度 已到 最 大 值 ， 定 此 处 的反 应 速 度 ， 能 准 确 反 测 最
１： 、 １ ３： 、 １ １： 、 ２ １： 、 ４ ０： ０ ４： 、 １ ２： 、 １ １： 、 ３ １： 、 １的 比 例 混
标 本 取 １ Ｌ 读 数 时 间 １ ｎ ５ ； ～３ｍｉ。
１ ３３ 统 计 学 处 理 实 验 数 据 的 统 计 学 处 理 采 用 Ｓ Ｓ １ ． ．． Ｐ Ｓ００
２６ 精密度试验 ． 根 据 ＮＣ Ｉ （ Ｐ ５ 的评 估 方 案 ， １ 尿 Ｃ Ｅ 一 ） ｓ 取 份 液 作批 内 和批 问试 验 ， 定 次 数 ２ 测 Ｏ次 ， 果 批 内 Ｃ 为 ２ ６ ， 结 Ｖ ．
批 间 Ｃ 为 ４２ 。 ．
１ ３ １ 测 定 原 理 样 本 中 的 ＮＡＧ 催 化 底 物 ＭＰ ． ． Ｔ ＮＡＧ 水
解 ， 成 产 物 ＭＰ 生 Ｔ。ＭＰ 在 ３ ０ ｎ 处 有 最 大 吸 收 峰 ， 过 测 Ｔ ４ ｍ 通
定 ３ ０ｎ 处 每 分 钟 的 吸 光 度 变 化 速 率 ， 计 算 出 ＮＡＧ 的 活 ４ ｍ 可 性 。 即在 最 佳 实 验 条 件下 ， ０ ０ｍＬ样 品 中 ＮＡ 每 分 钟 水 解 １ ０ Ｇ
进行 。 １２ 样本 ．
１ ３ 方 法 ．
２ ５ 反 应 时 间 的选 择 在 其 他 条 件 不 变 的 情 况 下 ， 样 本 按 ． 用
反 应 条 件进 行 操 作 ， 察 ６ ～ ３０ Ｓ内各 时 间 的 吸 光 度 变 化 ， 观 Ｏ ０
随 机 中段 尿 样 。
可见到时问变化与吸光率变化为线性关系 。
合 ， 生 ９ 不 同 浓 度 的样 品 ， 本 法 从 高 到 低 和 从 低 到 高 两 产 个 用 个 浓 度 顺 序 测 定 ， 测 定 值 （ ） 理 论值 （ 作 线 性 回归 分 析 ， 将 ｙ与 Ｘ）
回归 方 程 为 ｙ： １ ０ ５ 一０ ２ １ ｒ ０ ９ ８ ９ 表 明 线 性 可 达 ．０Ｘ ． ８ ． 一 ． ９ ，
Ｉ， 他 条 件 不 变 。 对 ４ Ｌ ＮＡＧ 标 准 酶 进 行 测 定 ， ｐ 其 ５Ｕ／ 在 Ｈ
４６ 酶促反应速率最大 。 ．时
取 浓 度 为 ５Ｕ／ 的质 控 品 作 为样 品 ， 复 Ｌ 重
测 定 １ 次 ， 出 标 准 差 Ｓ 以 ３ 为 最 低 检 测 限 ， 果 为 Ｏ 求 ， 结
・
２ １ ・ ０２
堕 医学与临床 ２ １ 年 ８ ０１ 月第 ８ 卷第 １ 期 Ｉ ｂＭｅ ｌ ， ｕｕｔ ０ １Ｖ １ ， ｏ１ ｄＣｉ Ａ ｇ ｓ ２１ ，ｏ． Ｎ ．６ ６ ａ ｎ ８ 最 大 吸 收峰 ， 定 样 本 在 ３ ０ｎ ｌ 成 ， 受 尿液 颜 色 干 扰 。 该 测 ４ ｉ 完 Ｔ 不 测 定 １ Ｏ名 体 检 健 康 者 尿 液 样 本 ， ６ ０ 男 Ｏ名 ，
４ ８ ５ ０ ５ ２和 ５ ４的柠 檬 酸 一 酸 氢 二 钠 缓 冲 液 ２ ０ ｍｍｏ／ ． 、． 、． ． 磷 ０ ｌ
上 皮细胞受损 时 ， 中 Ｎ 尿 ＡＧ 活 性 将 显 著 升 高 且 早 于 其 他 尿
酶 ， 肾小 管 损 害 的 早 期 诊 断 有 较 大 价 值 ｌ ， ＮＡＧ 上 升 程 对 １且 ］
Ｎ 乙 酰一— Ｉ 基 葡 萄 糖 苷 酶 （ 一 ＢＩ 氨 ） ＮＡＧ） 一 种 位 于 溶 酶 体 内 是
的 酸 性 水 解 酶 ， 对 分 子 质 量 为 １０× １。 存 在 于 所 有 组 织 相 ４ ０， 中 。尿 中 ＮＡＧ主 要 来 源 于 肾近 曲小 管 上 皮 细胞 ， 近 曲小 管 当
度 与 肾 小 管 损 伤 程 度 成 正 比ｌ 。可 作 为 早 期 诊 断 肾 损 害 的 尿 ＿ ２ ］
标 志 性 蛋 白ｌ 。本 文 基 于 ＮＡＧ 催 化 水 解 ６甲基 ２硫 代 吡 啶一 ３ ］ 一 一 Ｎ 乙 酰一－ Ｉ 基 葡 萄 糖 苷 （ Ｔ Ｎ ＢＩ 氨 ） ＭＰ — ＡＧ） 成 无 色 的 ６ 甲基 一一 生 ２ 硫 代 吡 啶 （ Ｔ ， 反 复 试 验 确 定 了 最 佳 实 验 条 件 ， 立 起 简 ＭＰ ） 经 建 便 、 敏 、 定 的 检 测 体 液 中 ＮＡＧ 活 力 的紫 外 动 力 学 分 析 法 ， 灵 稳
各 种 实验 参 数 进 行 研 究 。 用该 法测 定 了 多种 病 尿 样 中 ＮＡ 活 活性 。结 果 该 法 最低 检 出 限 为 １ ５Ｕ／ 线 性 范 围 Ｇ ． Ｌ， 可 达 ２ ０ Ｕ／ （ 一０ ９ ８９ ， 内 Ｃ 为 ＜３ ， 间 Ｃ ％ ５ ， 收 率 为 １ １ ３ 。 结 论 本 法 灵敏 度 高 ， 性 、 密 ５ Ｌ ｒ ． ９ ） 批 Ｖ 批 Ｖ 回 Ｏ ． 线 精 度 好 ， 果 准 确 ， 操 作 简便 快 速 ， 用 于 全 自动 生 物 化 学 分 析 仪 操 作 。 结 且 适
单 位 ， 称 Ｕ／ 简 Ｌ。 １ ３ ２ 实 验参 数 反 应类 型 ．． 速 率 法 ， 长 为 ３０ｎ 主 ） ４ ５ 波 ４ ｍ（ ／ ０
ｎ 副 ） 反 应 温 度 ： ７℃ ； 剂 １用 ２ ０ｔ 试 剂 ２用 ６ Ｌ； ｍ（ ； ３ 试 ４ Ｌ， ＊ Ｏ“
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［］ 翟 燕 ． 清 特 异 性 抗 体 检 测 在 肺 炎 支 原 体 感 染 早 期 诊 断 ４ 血 意 义 ［］ 中华 儿 科 杂 志 ，９ ３ ３ ２ ：０ ． Ｊ． １ ９ ，１（） １ １ （ 收稿 日 ： １ ０ ４ 期 ２ １２ ） ０ ２
映 酶 量 的 多 少 。 所 以 试 剂 ２中 ＭＰ ＿ ＡＧ 的 浓 度 确 定 为 ＴＮ
７ｇ Ｉ。 ／
１１ 试剂和仪器 ．
液 ２ ０ｍｍｏ／ ｐ ． ±０ ０ ） 表 面 活 性 剂 １ｇＩ， 定 剂 和 ０ ｌ Ｌ（ Ｈ ４ ６ ． ５ 、 ／ 稳 防腐 剂 适 量 。 （ ） 剂 ２ Ｒ ） 柠 檬 酸 一 酸 氢 二 钠 缓 冲 液 ２试 （２： 磷
每 份 样 品重 复测 定 ３次 ， 均 值 ， 得 回 收 率 分 别 为 １３ ２ 、 取 所 ０ ．
１ １ ５ 、 ９２ ， 均 回 收率 １ １３ 。 ０ ． ９ ． 平 ０ ． ２８ 线性试验 ． 根 据 ＮＣ ｋ （ Ｐ ． ） 评 估 方 案 ， 浓 度 分 Ｃ Ｓ Ｅ ６Ｐ 的 取
１ｕ ｌＬ 的 ＭＰ — Ｇ 发 生 转 变 为 １Ｕ 的 ＮＡＧ 酶 量 为 １ ｍｏ／ Ｔ ＮＡ 个
２ ７ 回收 试 验 ．
在 ｌ份 样 品 中分 别 加 入 低 、 、 ３个 浓 度 的 中 高
ＮＡＧ 质 控 品 ， 同时 样 品 中加 入 相 同体 积 的蒸 馏 水 做 基 础 样 本 ，
检 验 医 学 与 临床 ２ １ 年 ８月 第 ８卷 第 １ ０１ ６期
Ｌ ｂＭ ｅ ｌ ， ｇ ！ ａ ｄｅｉ ｎ
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２Ｏ１ ・ １
Ｉ］ 熊正东． 儿肺炎支原体感染 的治疗［］实用儿科 杂志 ， － ３ 小 Ｊ．
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方 法 最 低 检 出 限 为 １ ５ Ｕ／ 线 性 范 围 可 达 ２ ０ ｕ／ ｒ ． Ｉ， ５ ｉ（ 一
【 键 词 】 甲基一一 代 吡啶 一 乙酰 口Ｄ 氨 基 葡 萄 糖 苷 ； Ｎ 乙酰一— － 基 葡 萄糖 苷 酶 ； 紫 外 动 力 学 法 关 ２硫 Ｎ一 一－ ｐＤ 氨 Ｄ Ｉ１ ．９ ９ ｊｉ ｎ １７ －４ ５ ２ １ ． ６０ ５ 文 献 标 志 码 ： 文 章 编 号 ：６ ２９ ５ （ ０ １ １－０ １０ Ｏ ：０ ３ ６ ／．ｓ ． ６ ２９ ５ ．０ １ １ ． ５ ｓ Ｂ １ ７ －４ ５２ １ ） ６２ １－２
ＭＰ — Ｔ ＮＡＧ 测 定 Ｎ一 乙酰一一 一 基葡 萄 糖 苷 酶 的 应 用 价值 ＩＤ 氨 ３
余 长福 （ 江省温 州 市瓯 海 区第 三人 民 医院检 验科 浙 ３ ５１ ） ２ ０ ４
【 要 】 目的 应 用 新 型 底 物 ６ 甲基 ２硫 代 吡 啶 一 乙酰一 ） 基 葡 萄糖 苷 （ Ｔ ＮＡＧ） 立检 测 Ｎ 乙酰一— 摘 一 Ｎ Ｉ 氨 ＿ ＭＰ — 建 一 ｐ Ｉ 氨 基 葡 萄 糖 苷 酶 活 力的 紫外 动 力 学新 方 法 ， 于 尿 液 中 ＮＡＧ 活 性 测 定 。方 法 基 于 ＮＡ 催 化 水 解 对 硝 基 苯一 ） Ｉ 用 Ｇ Ｎ 乙酶一 一 氨 基 葡 萄 糖 苷 生 成 有 色的 对 硝 基 酚 这 一 反 应 ， 缓 冲 液 离 子 强 度 、 Ｈ 值 、 物 浓 度 等 最 佳 反 应 条 件 及 对 ｐ 底
２ ０ Ｕ／ ５ Ｌ。
统计软件 。
２ 结 果
２ １ 吸 收 光谱 在 本 实 验 条 件 下从 ３ ０ ４ Ｏｎ 范 围 内 测 定 标 ． ０ ～ ５ ｍ 准 溶 液 的 吸 光 度 ， 知 ６甲 基 ２巯 基 吡 啶 最 大 吸 收 波 长 为 得 一
３ ４０ ｎｍ
２９ 最低检测 限 ．
２ ２ 最 适 缓 冲离 子 强 度 的 选 择 ．
分 别 配 制 ５ 、 ０ 、５ 、 ０ ０ １０ １ ０ ２ ０
和 ２ ０ｍｍ ｌＬ的 柠 檬 酸一 酸 氢 二 钠 缓 冲 液 ， 他 条 件 不 变 。 ５ ｏ／ 磷 其 分 别 测 试 同 一 份 样 品 （５Ｕ／ ） ４ Ｌ 。酶 反 应 速 率 随 缓 冲 液 浓 度 的 增 加 而 增 高 ， 当 浓 度 大 于 ２ ０ｍｍｏ／ 时 ， 反 应 速 率 反 而 但 ０ ｌＬ 酶 降 低 。这 是 缓 冲 液 浓 度 太 大 反 而 抑 制 了 ＮＡＧ 酶 的活 性 ， 而 从 导 致 反 应 变 慢 。 因 此 ， 择 柠 檬 酸一 酸 氢 二 钠 浓 度 ２ ０ 选 磷 ０ ｍｍｏ／ 为 最 佳 缓 冲液 和 最 佳 浓 度 。 ｌＩ作 ２ ３ 最 适 ｐ 值 的 选 择 分 别 配 制 ｐ ． 、 ． 、 ． 、 ． 、 ． Ｈ Ｈ４ ０ ４ ２ ４ ４ ４ ６
２ ０ ｍｍｏ／ （ Ｈ ４ ６ ． ５ 、 Ｔ ＮＡＧ ７ｇ Ｌ、 定 剂 和 防 ０ ｌＬ ｐ ． ±０ ０ ） ＭＰ — ／ 稳
腐 剂适 量 。 （ ） ３ ＮＡＧ酶 标 准 酶 和质 控 品 ， 由浙 江 伊 利 康 生 物 技 术 公 司 提供 。所 有 检 测 在 Ａ ０ Ｕ４ ０全 自动 生 物 化 学 分 析 仪 上
２ ４ 底 物 浓 度 选 择 在 其 他 条 件 不 变 的情 况 下 ， 试 剂 ２中 ． 将
ＭＰ － ＡＧ 浓 度 分 别 调 整 至 ５ ７ ９ｇ Ｌ， 别 测 定 高 、 、 ３ ＴＮ 、 、 ／ 分 中 低
（ ） 剂 １ Ｒ ） 柠 檬 酸 一 酸 氢 二 钠 缓 冲 １试 （１： 磷 种 浓 度 的 质 控 品 。结 果 显 示 试 剂 ２中 ＭＰ — Ｔ ＮＡＧ 浓 度 为 ７ｇ ｉ 底 物 浓 度 与 酶 反 应 速 度 的 反 应 曲 线 尾 部 已 趋 于 平 坦 ， ／ 时 说 明 反 应 速 度 已到 最 大 值 ， 定 此 处 的反 应 速 度 ， 能 准 确 反 测 最
１： 、 １ ３： 、 １ １： 、 ２ １： 、 ４ ０： ０ ４： 、 １ ２： 、 １ １： 、 ３ １： 、 １的 比 例 混
标 本 取 １ Ｌ 读 数 时 间 １ ｎ ５ ； ～３ｍｉ。
１ ３３ 统 计 学 处 理 实 验 数 据 的 统 计 学 处 理 采 用 Ｓ Ｓ １ ． ．． Ｐ Ｓ００
２６ 精密度试验 ． 根 据 ＮＣ Ｉ （ Ｐ ５ 的评 估 方 案 ， １ 尿 Ｃ Ｅ 一 ） ｓ 取 份 液 作批 内 和批 问试 验 ， 定 次 数 ２ 测 Ｏ次 ， 果 批 内 Ｃ 为 ２ ６ ， 结 Ｖ ．
批 间 Ｃ 为 ４２ 。 ．
１ ３ １ 测 定 原 理 样 本 中 的 ＮＡＧ 催 化 底 物 ＭＰ ． ． Ｔ ＮＡＧ 水
解 ， 成 产 物 ＭＰ 生 Ｔ。ＭＰ 在 ３ ０ ｎ 处 有 最 大 吸 收 峰 ， 过 测 Ｔ ４ ｍ 通
定 ３ ０ｎ 处 每 分 钟 的 吸 光 度 变 化 速 率 ， 计 算 出 ＮＡＧ 的 活 ４ ｍ 可 性 。 即在 最 佳 实 验 条 件下 ， ０ ０ｍＬ样 品 中 ＮＡ 每 分 钟 水 解 １ ０ Ｇ
进行 。 １２ 样本 ．
１ ３ 方 法 ．
２ ５ 反 应 时 间 的选 择 在 其 他 条 件 不 变 的 情 况 下 ， 样 本 按 ． 用
反 应 条 件进 行 操 作 ， 察 ６ ～ ３０ Ｓ内各 时 间 的 吸 光 度 变 化 ， 观 Ｏ ０
随 机 中段 尿 样 。
可见到时问变化与吸光率变化为线性关系 。
合 ， 生 ９ 不 同 浓 度 的样 品 ， 本 法 从 高 到 低 和 从 低 到 高 两 产 个 用 个 浓 度 顺 序 测 定 ， 测 定 值 （ ） 理 论值 （ 作 线 性 回归 分 析 ， 将 ｙ与 Ｘ）
回归 方 程 为 ｙ： １ ０ ５ 一０ ２ １ ｒ ０ ９ ８ ９ 表 明 线 性 可 达 ．０Ｘ ． ８ ． 一 ． ９ ，